造血干细胞移植后对人巨细胞病毒感染病毒载量的检测

目的探讨应用实时定量聚合酶链反应（RQ-PCR）法对异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）后巨细胞病毒（CMV）感染的诊断价值及对临床用药的指导意义。方法33例行allo-HSCT的患者于造血重建后，应用RQ-PCR法对其外周血CMV DNA进行动态检测，根据检测结果决定抗CMV治疗的开始、减量和终止，观察治疗效果和临床转归。结果共检出13例CMV感染患者，21次感染发作；除1次是患者中途放弃治疗外，余20次治疗中CMV DNA拷贝迅速转阴或下降至转阴，有临床表现者症状消失、器官功能恢复；且抗CMV疗程短于常规疗程。结论应用RQ—PCR法不但可以早期诊断CMV感染，及时干预治疗，还可以直观指导治疗的减量和终止、缩短疗程、减轻药物不良反应。     

熔解曲线法用于肺癌APC基因甲基化模式的研究

目的 以熔解曲线法测定4株肺癌细胞株和肺癌病人APC基因启动子区的甲基化模式.方法 以脐血淋巴细胞DNA及其转甲基后的DNA经化学修饰、克隆测序的质粒,作为完全非甲基化和完全甲基化标准品.设计通用引物,采用加入荧光染料SYBR Green I的荧光定量PCR法扩增包含21个CpG位点的APC基因启动子区的目的序列,以熔解曲线法通过与完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值比较,确定四株肺癌细胞株(NCI-H446,NCI-H460,SPCA1,NCI-H520)在该区段的甲基化模式,并通过克隆测序验证.同时测定两例肺癌患者癌组织中APC基因启动子区甲基化模式.结果 四株肺癌细胞株中,NCI-H446,SPCA1和NCI-H520的Tm值与完全非甲基化标准品的Tm值相同,而NCI-H460的Tm值有两个,分别与完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值吻合,并经克隆测序验证.两例肺癌患者癌组织的Tm值位于完全非甲基化和完全甲基化标准品的Tm值之间.结论 小细胞肺癌细胞株NCI-H446,肺腺癌细胞株SPCA1和肺鳞癌细胞株NCI-H520的APC基因启动子区为完全未甲基化型,而大细胞肺癌细胞株NCI-H460APC基因启动子区甲基化模式为等位基因杂合型.两例肺癌患者癌组织中的APC基因启动子均为部分甲基化型.熔解曲线法是简单、经济和实用的甲基化模式检测方法.     

利福平等6种抗结核药物的体外抗菌活性比较

了解和比较利福平等６种抗菌药物对结核分枝杆菌的体外抗菌活性,采用琼脂稀释法测定了单药和不同组合药物对临床分离的３０株结核分枝杆菌的最低抑菌浓度（ＭＩＣ）。结果利福平（ＲＦＰ）、异烟肼（ＩＮＨ）、帕司烟肼（ＰＳＮ）、吡嗪酰胺（ＰＺＡ）、链霉素（ＳＭ）、左氧氟沙星（ＬＶＬＸ）的ＭＩＣ５０分别为２０、〈０．０６、〈０．０６、８、５、０．５ｍｌ／Ｌ,不同组合药物的ＭＩＣ值比单药均下降２～８倍。结论：依照药敏试验结果,选择敏感的化疗方案,是处理耐药菌株病例的最佳对策。     

实时荧光定量PCR检测血浆结核分枝杆菌DNA的初步临床应用

目的 评价实时荧光定量PCR技术检测血浆（或血清）结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）DNA的技术。方法 建立实时荧光定期量PCR方法测定血浆MTB DNA,分别检测临床确诊的55例结核病患者血清43份,血浆25份以及非结核肺部疾病患者血清18份,健康体检血清18份和健康体检者血浆11份的MTB DNA含量。结果 18例非结板肺疾病患者血清、18例健康体检者血清以及11例健康体检者血浆MTB DNA全部阴性。55例初诊结核患者中10例（18．2％）治疗前血浆（或血清）MTB DNA阳性。在痰涂片阴性的18例结核患者中,血浆（或血清）MTB DNA阳性检出率为27．8％（5／18）,其特异性达100％。结论 本研究证实了结核患者血浆（或血清）循环MTB DNA的存在,其定量检测对痰涂片阴性及无痰患者的结核病诊断有重要参考价值。     

抗独特型抗体NP30快速ELISA法检测血吸虫抗体

目前，我国血吸虫病诊断主要采用病原学方法及免疫学方法，前者对轻感染的漏检率很高，且费时费力，不适于大规模普查用。免疫学诊断方法以常规的ＥＬＩＳＡ为主，管晓虹等［１］已建立了一株单克隆抗独特型抗体ＮＰ３０，并证实ＮＰ３０是日本血吸虫的相关抗原（ＧＡＡ）...     

实时定量PCR法测定乙肝病毒脱氧核糖核酸

目的：建立实时定量PCR法测定血清样品中乙肝病毒脱氧核糖核酸（HBV—DNA）含量。方法：用PEG-裂解-煮沸法从血清中提取核酸,制作成标准浓度曲线后,对100份患者样本进行实时荧光定量分析,并与ELISA（酶标法）结果作比较,再与CAP—CTM法（化学发光法）进行比较。结果：用SPSS（V．16）软件进行统计分析,得线性回归方程y=-3．212X＋44．90;r^2=0．9980;日内、日间平均误差为RSD〈2．15％：最低检测限是400copies／mL（拷贝数）：该法测得患者HBV—DNA的浓度与EUSA测出样品阳性发生率呈正相关,再与CAP—CTM作配对t检验,P〉0．05,两者无显著性差异。结论：新建的PCR检测法敏感度高,重现性好,线性范围较广,可用于进行临床血清样本中HBV—DNA的定量检测,这对评估HBV患者诊治效果有帮助。     

脑肿瘤端粒酶活性的表达及其意义的研究

目的 探讨脑肿瘤中端粒酶的表达情况,及其与恶性肿瘤发生的关系。方法 采用ＴＲＡＰ－角染法检测了３７例及肿瘤组织和４例正常脑组织中的端粒酶活性。结果 ３７例脑肿瘤组织标本中,１６例有端粒酶活性的表达,阳性率为４３．２％,４例正常脑组织中均未检测到端粒酶活性。结论 端粒酶活性的表达与脑肿瘤的恶性程度密切相关,有可能成为恶性脑肿瘤的一个重要的标志物。