流式细胞术在细胞凋亡检测中的应用

流式细胞仪（flow cytometer．FCM）是一项集激光、电子物理、光电测量、计算机、细胞荧光化学以及单克隆抗体技术为一体的新型高科技仪器。它可对单细胞或其他生物颗粒膜表面以及内部的化学成分进行快速定量分析与分选。随着现代技术的发展使其在分子生物学、免疫学、遗传学、临床医学、药学等领域中的应用有了突飞猛进的发展，在临床医学和科研中发挥着越来越重要的作用。     

800例不孕不育患者的染色体观察——附其538例配偶染色体检查

目的 从遗传与优生学角度出发,探讨了不明原因的胚胎早期停止发育、反复自然流产或原发不孕不育(包括原发、继发闭经和严重少精子、无精子症)与染色体异常的关系.方法 对800例不孕不育患者及其中538例流产患者的配偶进行了染色体核型分析.结果 1338例中发现异常核型84例,异常率占6.28%.其中平衡易位携带者14例,染色体数目异常39例,结构异常31例.结论 染色体异常可导致不孕不育.提示不孕不育与遗传因素密切相关.     

补肾壮骨中药对大鼠乳腺癌骨转移模型骨痛及骨质破坏的影响

目的:研究淫羊藿、补骨脂和骨碎补3种补肾壮骨中药对大鼠乳腺癌骨转移模型骨痛和骨质破坏的影响。方法:使用雌性SD大鼠进行实验,将48只大鼠随机分为6组,即假手术组、模型对照组、淫羊藿组、补骨脂组、骨碎补组和唑来膦酸组,其中后5组为手术组,在左侧胫骨髓腔内注射MRMT-1大鼠乳腺癌细胞建立大鼠乳腺癌骨转移模型,分别给予对应药物。在造模后第20天观察Von Frey纤维刺激的50%缩足阈(50%PWT)及双足负重差异以显示疼痛行为。第21天取材,测定肿瘤体积、左胫骨影像评分、骨矿物质含量(BMC)和骨密度(BMD)。结果:3种补肾壮骨中药均可使乳腺癌骨转移大鼠50%PWT提高(P0.05或P0.01),补骨脂可使双足负重差异减小(P0.01),淫羊藿可使BMC和BMD升高(P0.05和P0.01)。此外,3种中药均有抑制肿瘤生长和减低骨破坏影像评分的趋势,但未见统计学差异。结论:淫羊藿等补肾壮骨中药在大鼠乳腺癌骨转移模型上具有减轻癌性骨痛和骨质破坏的作用。     

198例遗传咨询者外周血染色体核型分析

目的:探讨染色体异常核型在遗传咨询患者中的发生情况。方法:常规外周血染色体核型分析。结果:198例患者中检出31例染色体异常核型,异常检出率为15.66%。性染色体异常核型22例(70.97%),其中数目异常9例(29.03%),嵌合型5例(16.13%),结构异常8例(25.81%);男性反转综合征1例(3.22%);常染色体异常核型8例(25.81%),其中数目异常5例(16.13%),结构异常3例(9.68%)。结论:染色体异常是发育不良、不孕不育、智力障碍、先天畸形等疾病的重要原因之一。这类患者进行染色体检查,对临床治疗及优生具有极其重要的指导意义。     

循环肿瘤DNA定量方法的建立及其临床应用的初步研究

目的 建立荧光核酸染料PicoGreen用于循环肿瘤DNA定量的方法并以乳腺癌为例初步探讨其在肿瘤辅助诊断中的作用. 方法 采用QIAamp DNA blood kit提取血清中的循环肿瘤DNA并分析其提取效率,分析PicoGreen荧光分光光度法对微量DNA进行精确定量的范围和可靠性.以受试者工作特征曲线(ROC)判断循环肿瘤DNA应用于乳腺癌辅助诊断的可行性. 结果 QIAamp DNA blood kit提取血清中DNA的效率在37.8%～46.2%,平均43.4%.用PicoGreen荧光法,可检出低至1 ng的循环肿瘤DNA,并且在1～500 ng范围内呈现良好的直线关系.用此法检测乳腺癌组血清DNA浓度为(169.70±124.10)μg/L,对照组乳腺良性病变为(51.70±29.04)μg/L,健康人为(54.30±36.84)μg/L.经Mann-Whitney检验二者差异有统计学意义.ROC下面积为0.899(95%CI为0.848～0.951),当DNA诊断界值为96.0/μg/L时,灵敏度为78.2%,特异度为90.0%,提示血清DNA浓度有较好的诊断应用价值. 结论 应用PicoGreen荧光分光光度法可有效检测微量的血清循环肿瘤DNA,且乳腺癌组循环肿瘤DNA浓度明显高于对照组,提示循环肿瘤DNA为有价值的乳腺癌辅助诊断指标之一.     

玻片微量细胞培养技术及细胞原位计量法

一、玻片微量细胞培养技术细胞培养技术的应用对细胞形态学、细胞生理学及细胞遗传学等方面的研究均具有重大意义。体外细胞培养的方法很多,选用的方法因实验目的不同而异。微量塑料板在50年代中由匈牙利学者Gyola Takatsy首次提出用作血清学试验,后来经过改进用于细胞培养。近     

人肝癌细胞和成纤维细胞共育时超微结构的改变

采用定位培养技术 ,将人肝癌细胞和成纤维细胞有序地接种在同一容器内培养 ,电镜下观察 2种细胞接触时细胞切面超微结构的变化。结果 :与肝癌细胞伪足接触的成纤维细胞膜下出现多个吞饮泡 ,使骨架纤维下移 ,局部断裂。 2种细胞的线粒体肿胀 ,溶酶体增多 ,胞质中出现许多泡状结构。提示 ,在肝癌细胞侵袭成纤维细胞早期、成纤维细胞膜尚未受到破坏时 ,细胞内的结构已发生了改变。     

无血清培养人肝癌细胞增生率的变化和bFGF在细胞中的表达

采用无血清培养体系 ,研究肿瘤细胞自分泌调控机制。将人肝癌细胞培养在无血清无外源分裂因子培养基中 ,采用细胞原位计数法和免疫组织化学染色法 ,观察不同时相人肝癌细胞增生率的变化以及碱性成纤维细胞生长因子 (bFGF)的表达情况。结果 :人肝癌细胞生长良好 ,其增生速度与其分泌的bFGF量成正比。提示 :肝癌细胞在无外源生长因子的条件下通过分泌bFGF ,以自分泌和旁分泌的方式作用于自身和相邻细胞 ,促进细胞生长和增生。     

化瘀止痛法外用对骨癌疼痛模型的镇痛作用及机制研究

目的 观察化瘀止痛法外用对骨痛疼痛模型的镇痛作用.方法 SD大鼠左后肢胫骨内接种MRMT-1细胞,制成骨转移癌疼痛模型,给予外用化瘀止痛方药治疗.观察大鼠痛行为学改变,包括yon Frey纤维刺激的50%缩足阈(50%PWT)、热刺激缩足潜伏期(TWL).对背根神经节标本用HE染色观察病理形态学改变.结果 相对于模型组,中药治疗组50%PWT明显延长,TWL延长.病理形态学显示背根神经节神经元细胞结构改变减少.神经元胞体胞核固缩减少,多核仁细胞减少.结论 化瘀止痛法外用可有效拮抗外周伤害感受器,抑制骨转移癌疼痛.