牛膝甾酮干预SD乳鼠成骨细胞的增殖与分化

文题释义：牛膝甾酮：牛膝为苋科植物牛膝的干燥根,主要含有甾酮类、皂苷类及多糖类成分,具有调节糖代谢、抗炎、镇痛、降血糖、免疫调节等作用,牛膝甾酮是其活性成分之一,目前尚无文献报道其对成骨细胞的生物学效应。 成骨细胞：由间充质干细胞分化而来,直接参与骨形成,其增殖、分化缺陷是骨质疏松症发病的重要原因,研究表明改善成骨细胞功能可有效治疗骨质疏松症。 背景：促进成骨细胞的增殖以及分化是治疗骨质疏松症的有效手段之一,但关于牛膝甾酮对成骨细胞增殖、分化的影响却没有报道。 目的：研究牛膝甾酮对SD乳鼠成骨细胞增殖、分化的影响及其潜在的分子机制。 方法：通过酶消化法获得SD乳鼠成骨细胞,体外诱导培养并鉴定;采用CCK8法检测不同质量浓度牛膝甾酮(1,5,10 mg/L)对成骨细胞活力的影响;采用碱性磷酸酶染色及碱性磷酸酶活性试剂盒评价成骨细胞的早期分化能力;采用茜素红染色观察钙结节的形成数量,评估成骨细胞的矿化能力;采用实时荧光定量PCR法检测成骨分化标志物的表达水平;采用MDC染色检测自噬小体数量。 结果与结论：①相对于不加药对照组,牛膝甾酮在一定程度上抑制成骨细胞的增殖(P < 0.05),但却能够显著促进碱性磷酸酶活性及矿化结节的形成(P < 0.05),同时上调成骨分化标志物CollagenⅠ、OPG、OPN、OCN的表达水平,此外牛膝甾酮还能够促进自噬小体的形成;②结果提示,牛膝甾酮能够通过上调成骨分化相关基因及刺激自噬体的形成而促进成骨细胞的分化。 ORCID: 0000-0002-2837-6347(姜涛) 中国组织工程研究杂志出版内容重点：组织构建;骨细胞;软骨细胞;细胞培养;成纤维细胞;血管内皮细胞;骨质疏松;组织工程     

关节腔内加压灌注氨甲环酸与初次全膝关节置换后失血量的关系

BACKGROUND: Tranexamic acid is extensively used in the primary total knee replacement, but there are many different methods.     

基于转录组学筛选左归丸促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化的关键基因

目的 探讨左归丸治疗骨质疏松（OP）多靶点的分子机制。方法 采用0、100、200、400、1 000μg/mL浓度的左归丸溶液干预MC3T3-E1细胞,Western Blot检测总β-连环蛋白（β-catenin）、活性β-catenin、成骨细胞特异性转录因子2（Runx2）、成骨细胞特异性转录因子（Osx）蛋白表达,qPCR检测Runx2、Osx、Ⅱ型α 胶原蛋白基因（Col2a1）、骨钙蛋白（Ocn）、β-catenin mRNA表达,CCK-8检测MC3T3-E1细胞增殖活力,碱性磷酸酶（ALP）染色及茜素红染色（ARS）检测MC3T3-E1细胞成骨细胞分化能力,RNA-Seq筛选左归丸促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化的差异基因并进行qPCR验证。结果 不同浓度左归丸溶液（100、200、400、1 000μg/mL）干预MC3T3-E1细胞48 h,成骨标志基因（Runx2、Osx、Col2A1、Ocn、β-catenin）表达水平明显升高（P＜0.05）,MC3T3-E1细胞增殖率明显升高（P＜0.05）,ALP、ARS染色明显增强（P＜0.05）,其中以400μg/mL左归丸溶液干预效果最明显。当左归丸溶液干预浓度达到1 000μg/mL,MC3T3-E1细胞成骨分化能力显著下降（P＜0.05）。采用400μg/mL左归丸溶液干预MC3T3-E1细胞48 h,RNA-seq筛选出10个差异最大基因,其中6个上调基因和4个下调基因,qPCR验证发现,EF-Hand 钙结合域9（Efcab9）、叉头框蛋白J1（Foxj1） mRNA表达水平升高（P＜0.05）,Ras 蛋白特异性鸟嘌呤核苷酸释放因子 1（RasGRF1）、生长分化因子 -9（GDF9）、Ⅳ型胶原蛋白 α -3 链（Col4a3） mRNA表达水平明显降低（P＜0.05）。结论 左归丸溶液（400μg/mL）能够调节Efcab9、FOXj1、RasGRF1、GDF-9、Col4a3 mRNA表达水平,促进MC3T3-E1细胞成骨细胞增殖分化。     

DNMT3A对骨关节炎软骨细胞SOX9基因DNA甲基化修饰的影响

目的 探讨DNMT3A对SOX9基因DNA甲基化修饰的影响。方法 培养正常软骨细胞和OA软骨细胞,显微镜下观察软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色、Ⅱ型胶原染色鉴定软骨细胞,qRT-PCR、Western Blot检测DNMT3A、SOX9 mRNA和蛋白表达水平,亚硫酸氢盐测序检测SOX9基因DNA甲基化状态,慢病毒沉默DNMT3A观察SOX9基因DNA甲基化修饰的变化。结果 正常软骨细胞形态规则,体积较大,数量较多,OA软骨细胞形态不规则,体积较小,数量较少。与正常软骨细胞比较,OA软骨细胞中DNMT3A mRNA和蛋白表达量增高（P＜0.05）,SOX9 mRNA和蛋白表达量明显降低（P＜0.05）,SOX9基因DNA甲基化百分比增高。在OA软骨细胞中沉默DNMT3A后,SOX9基因DNA甲基化百分比明显降低。结论 DNMT3A调节SOX9基因DNA甲基化修饰参与OA软骨细胞病变。     

基于网络药理学和分子对接探讨桂枝茯苓丸“异病同治”多囊卵巢综合征和子宫内膜异位症的作用机制

探讨桂枝茯苓丸治疗多囊卵巢综合征（PCOS）和子宫内膜异位症（EMT）的异病同治作用机制。【方法】利用TCMSP获取桂枝茯苓丸组成中药的活性成分及相关靶点。通过GeneCards、PharmGKB、TTD数据库分别筛选PCOS和EMT疾病靶点。使用R软件中的Venn R包获取药物与疾病的交集靶点后绘制Venn图,在Cytoscape中制作药物-活性成分-潜在靶点互作网络图,STRING平台中绘制交集靶点蛋白互作网络（PPI）图,Cytoscape对PPI网络进行优化并筛选核心靶点。应用R语言进行基因本体论（GO）富集和京都基因与基因组百科全书（KEGG）富集分析,AutoDockTools进行分子对接。【结果】获得桂枝茯苓丸85个活性成分及191个相应靶点,桂枝茯苓丸治疗PCOS、EMT的潜在靶点77个。桂枝茯苓丸治疗PCOS、EMT的核心活性成分为槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚、常春藤皂苷元、黄芩素,核心靶点为AKT1、EGFR、IL-6、TNF、TP53。GO功能分析获得2 020个生物过程、34个细胞成分、126个分子功能,KEGG富集分析得到165条信号通路。分子对接显示该方中核心成分与靶点对接良好。【结论】桂枝茯苓丸可能通过槲皮素、β-谷甾醇、山柰酚、常春藤皂苷元、黄芩素,调节脂质和动脉粥样硬化、AGE-RAGE信号通路、流体剪切应力和动脉粥样硬化、化学致癌-受体激活等信号通路,作用于靶点AKT1、EGFR、IL-6、TNF、TP53,从而“异病同治”PCOS和EMT。     

卵巢早衰患者颗粒细胞关键LncRNAs的生物信息学分析

目的 通过生物信息学分析筛选卵巢早衰(premature ovarian failure,POF)患者的差异表达长链非编码RNA(long non-coding RNA, LncRNAs),研究POF病理机制,预测潜在治疗靶点。方法 选取GEO数据库中与POF相关的基因芯片,利用GEO2R在线分析软件筛选颗粒细胞中差异表达LncRNAs。通过mircode数据库和miRNA靶基因预测网站预测靶基因,采用Cytoscape 3.7.2软件绘制基因交互作用网络模型。在DAVID数据库进行基因本体论(gene ontology, GO)和京都基因与基因组百科全书(Kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)富集分析。结果 共筛选出1 110个差异表达LncRNAs(P<0.01,|log₂ FC|≥1.0,FC为差异倍数),其中上调基因905个,下调基因205个,其靶基因主要与金属离子跨膜转运蛋白活性、DNA与转录因子结合能力、蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶活性相关,并且主要富集于PI3K-Akt、MAPK、Rap1、Ras、钙离子信号通路中。结论 利用生物信息学分析差异表达LncRNAs的靶基因功能和通路,进一步探讨POF的病理机制,为寻找新的治疗靶点提供启发。     

基于数据挖掘研究中药熏洗治疗阴道炎用药规律

目的：基于数据挖掘研究中药熏洗治疗阴道炎用药规律。方法：检索收集从建库至2023年2月24日的中国知网（CNKI）、中文科技期刊数据库（VIP）、中国生物医学文献数据库（CBM）、中国学术期刊数据库（万方期刊）收录的中药熏洗治疗阴道炎的临床随机对照文献,构建数据库;统计药物使用频次、性味归经和功效类别,并进行高频药物关联规则和聚类分析、复杂网络分析。结果：共筛选出有效处方156首,涉及中药123味,药物累计使用1 344次。苦参、蛇床子、黄柏、百部、白鲜皮、地肤子等23味为中药熏洗治疗阴道炎的高频药物;药性以平、温为主,药味以苦、甘、辛为主,归经以肝经、肺经为主。关联规则分析获得高频核心药对组合为蛇床子-苦参,3味药组合为蛇床子-黄柏-苦参,4味药组合为黄柏-地肤子-蛇床子-苦参,5味药组合为蛇床子-地肤子-白鲜皮-黄柏-苦参,6味药组合为白鲜皮-地肤子-百部-黄柏-蛇床子-苦参。聚类分析获得3组具有关联性的药物组合;药物复杂网络分析获得苦参、蛇床子、黄柏、地肤子、白鲜皮、土茯苓、百部等7味中药为中药熏洗治疗阴道炎的核心处方。结论：中药熏洗治疗阴道炎以清热药、补虚药和利水渗湿药为主,以...     

自体富血小板关节腔内注射治疗晚期膝骨关节炎对疼痛及疼痛介质的影响

目的:探讨自体富血小板(platelet-rich plasma,PRP)关节腔内注射治疗晚期膝骨关节炎对疼痛及疼痛介质的影响。方法:100例晚期膝骨关节炎患者按照随机数字表法分为实验组和对照组,每组各50例。实验组关节腔注射PRP 4 mL,对照组注射复方倍他米松和利多卡因混合液4 mL。评价治疗前后两组患者视觉模拟评分(visual analogue scalescore,VAS),并根据VAS分数评价临床疗效,检测血清疼痛介质(PGE_2、SP、DA、5-HT)、白三烯(LTB4、LTC4、LTD4)、促炎因子(TNF-α、IL-1β)的表达水平。结果:实验组治疗有效率(90%)与对照组(68%)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。治疗前,两组患者疼痛介质、白三烯、促炎因子比较,差异无统计学意义(P>0.05);治疗后,两组患者疼痛介质、白三烯、促炎因子均下降,且实验组下降程度大于对照组(P<0.05)。结论:PRP关节腔注射疗法可有效改善晚期膝骨关节炎患者疼痛症状,修复关节软骨,控制炎症反应,适合在临床推广。     

骨代谢生化指标与绝经后骨质疏松性腰椎骨折相关性分析

目的：探讨骨代谢生化指标与绝经后骨质疏松性腰椎骨折相关性,进而预测绝经后骨质疏松性合并腰椎骨折风险。方法回顾性分析100例绝经后骨质疏松症患者的临床资料,包括绝经后骨质疏松症腰椎无骨折患者50例和绝经后骨质疏松症合并腰椎骨折患者50例,记录并观察髋部、腰椎骨密度、骨代谢生化标志物Ⅰ型前胶原氨基端前肽（P1NP）、Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列（β-CTX）、骨钙素 N 端中分子（N-MID）、25-羟基维生素 D[25-（OH）VitD]和血清 Ca2＋。结果 P1NP、β-CTX 和25-（OH）VitD 的差异具有统计学意义（P ＜0．05）,绝经后骨质疏松性腰椎骨折与血清 P1NP 呈正相关（P ＜0．05）,25-（OH）VitD 呈负相关（P ＜0．05）,β-CTX 无相关性（P ＞0．05）。结论骨代谢标志物 P1NP、25-（OH）VitD 能够很好地预测绝经后骨质疏松腰椎骨折风险,骨密度预测骨质疏松症骨折风险具有一定局限性。