HBV X siRNA与5-氮-2'-脱氧胞苷对裸鼠肝癌皮下移植瘤作用的研究

目的 目的 探讨靶向HBV X的siRNA(X-siRNA)和5-氮-2′-脱氧胞苷(5-aza-dC)对HBV相关肝细胞癌生长的影响及可能机制.方法 设计合成X-siRNA及对照siRNA,用siRNA处理HepG2/GFP-HBx细胞,RT-PCR法测定处理细胞的HBV X基因表达;将HepG2/GFP、HepG2/GFP-HBx细胞接种于裸鼠皮下建立裸鼠肝癌皮下移植瘤,分别用X-siRNA、5-aza-dC单独或联合处理裸鼠并观察移植瘤生长;甲基化PCR测定移植瘤组织p16基因甲基化.结果 RT-PCR检测示X-siRNA处理的细胞HBV X mRNA水平明显降低;裸鼠体内实验显示HepG2/GFP-HBx组的皮下移植瘤体积明显大于HepG2/GFP组(P＜0.05);X-siRNA与5-aza-dC处理组移植瘤体积明显小于未处理组(P＜0.05);甲基化PCR检测示HepG2/GFP-HBx组移植瘤组织存在p16甲基化而HepG2/GFP组未检出p16甲基化;X-siRNA、5-aza-dC处理的移植瘤组织中p16基因甲基化减低.结论 X-siRNA及甲基化抑制剂可能通过逆转p16甲基化而能有效抑制肝细胞癌生长,具有潜在应用价值.     

乙型肝炎病毒X蛋白抑制p16蛋白表达及其促进HepG2肝癌细胞生长

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)对肝癌细胞生长的影响及其机制.方法 以HepG2细胞和稳定表达GFP/HBx融合蛋白的HepG2/GFP-HBx为实验细胞,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞吸光度值A490,分析细胞生长增殖;流式细胞术检测细胞周期;甲基化PCR检测细胞p16INK4A基因的甲基化;Western blot检测p16蛋白表达水平. 结果 72 h时HepG2/GFP-HBx细胞组的A490为3.225±0.038,分别与HepG2和HepG2-GFP细胞组的2.012±0.022、2.038±0.029比较,增殖能力明显增强,t值分别为46.86和42.51,P值均＜0.001,差异均有统计学意义.流式细胞术检测示HepG2/GFP-HBx细胞组的G0/G1期细胞占16.45％±0.45％,明显低于HepG2和HepG2/GFP细胞组的44.81％±1.36％、42.76％±1.58％,t值分别为-34.22和-28.88,P值均＜ 0.001,差异均有统计学意义.而5-氮-2 '-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)处理的HepG2/GFP-HBx细胞G0/G1期细胞比例为33.25％±0.79％,较未处理HepG2/GFP-HBx细胞组的16.45％±0.45％显著增加,两组比较,t=31.85,P＜0.001,差异有统计学意义.甲基化PCR检测显示HepG2/GFP-HBx细胞组发生了p16INK4A基因甲基化,而HepG2和HepG2-GFP细胞组及5-Aza-CdR处理的HepG2/GFP-HBx细胞组未检测到p16INK4A基因启动子甲基化.Western blot检测示HepG2/GFP-HBx细胞组p16蛋白水平低于HepG2和HepG2/GFP细胞组,而5-Aza-CdR处理HepG2/GFP-HBx细胞后,p16蛋白水平高于未处理的HepG2/GFP-HBx细胞. 结论 HBx蛋白可通过缩短HepG2细胞生长的G0/G1期而加快细胞周期进程,从而促进肝癌细胞生长增殖,其机制可能与HBx蛋白诱导p16INK4A基因启动子甲基化及抑制p16蛋白表达有关.     

乙型肝炎病毒X蛋白与细胞信号转导途径

HBV X蛋白(HBx)是泛宿主多功能蛋白质,能影响多种细胞信号转导途径.HBx可以调节相关蛋白激酶的活性,包括蛋白激酶C、Janus激酶/STAT、IKK、PI-3-K、应激调节蛋白激酶/Jun N末端激酶、ca2+通道以及蛋白激酶B/Akt,还能上调一系列转录因子、多肽分子的活性,包括NF-кB、AP-1、CREB和p53等,此文就相关研究进行综述.     

RANTES、MCP-1和SDF-1β在正常人体和AIDS患者体内含量的对比研究

目的探讨血清趋化因子(RANTES)、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、基质细胞衍生因子-1β(SDF-1β)在获得性免疫缺陷综合征(AIDS)和正常人体内的差异。方法选择2010年1月—2015年1月某院收集的38例AIDS患者作为AIDS组,38例健康者作为健康组,检测两组血清RANTES、MCP-1、SDF-1β水平,并根据病毒载量进行亚组分析。结果 AIDS组患者血清中RANTES、MCP-1、SDF-1β水平分别为(1 392.55±227.69)、(450.91±103.04)、(104.82±22.52)pg/mL,均高于健康组[分别为(120.58±55.87)、(74.25±33.62)、(39.04±11.43)pg/mL],差异均具有统计学意义(均P0.05)。HIV病毒载量4≤Log(VL)5、Log(VL)≥5的AIDS患者血清中RANTES水平分别为(1 470.34±155.01)、(1 408.29±181.54)pg/mL,均高于Log(VL)4组患者[(1 183.12±174.54)pg/mL];HIV病毒载量4≤Log(VL)5的AIDS患者血清中MCP-1、SDF-1β水分别为(537.93±89.32)、(149.31±18.05)pg/mL,高于Log(VL)≥5组[分别为(410.26±80.57)、(81.53±20.31)pg/mL]和Log(VL)4组患者[分别为(381.71±77.26)、(72.90±21.62)pg/mL],差异均有统计学意义(均P0.05)。结论 AIDS患者血清RANTES、MCP-1、SDF-1β水平显著升高,且与病毒载量水平有一定的关系。     

应用16S rRNA基因研究肝硬化患者肠道和腹水中菌群分布

目的探讨基于16S rRNA的PCR技术研究肝硬化患者肠道和腹水中菌群的分布情况。方法选取2010年7月～2011年6月收治的肝硬化失代偿期患者共37例,以腹水和粪便作为标本,进行核酸提取、PCR扩增和杂交。结果患者粪便中PCR阳性率为27.21%,细菌培养阳性率为8.11%;腹水中PCR阳性率为24.32%,细菌培养阳性率为5.41%,显示患者肠道和腹水中PCR阳性率均明显高于细菌培养阳性率（P〈0.05）。结论应用16S rRNA基因诊断失代偿期肝硬化合并感染,具有操作安全、简便快速、灵敏度高、特异性强等优点,为临床合理应用抗生素提供了依据。