哮喘小鼠CD4~+CD25~+Foxp3~+调节T细胞和Foxp3蛋白的变化及淫羊藿苷干预作用

目的:研究哮喘小鼠CD4+CD25+Foxp3+调节T(Treg)细胞和Foxp3蛋白的变化,探讨淫羊藿苷对哮喘干预机制。方法:将BALB/c小鼠32只随机分为正常对照组、哮喘模型组、淫羊藿苷组、地塞米松阳性对照组,每组8只。哮喘模型制备用卵白蛋白(OVA)致敏大鼠并雾化吸入刺激,治疗组采用相应药物灌胃给药,对照组用等量生理盐水代替。最后一次激发24小时后,采用Buxco肺功能仪有创法检测小鼠气道反应性;HE染色评价观察小鼠肺组织病理形态学改变;流式细胞术检测脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞比例及Foxp3蛋白表达量;免疫印迹法测定肺组织Foxp3蛋白表达量;ELISA法测定血清及肺泡灌洗液(BALF)IL-10水平。结果:与正常对照组比较:模型组气道阻力及气道炎症指数显著增加(P<0.05);脾Treg细胞比例无明显变化(P>0.05);脾Foxp3蛋白表达显著下降(P<0.05),肺组织Foxp3蛋白表达显著升高(P<0.05),外周血IL-10水平显著下降(P<0.05),BALF中IL-10无显著差异(P>0.05);与模型组比较:淫羊藿苷组气道阻力和气道炎症明显减轻(P<0.05);脾Treg细胞比例和脾Foxp3蛋白表达水平无显著变化(P>0.05),但淫羊藿苷可进一步上调哮喘小鼠肺组织Foxp3蛋白表达量(P<0.05),并增加外周血IL-10水平(P<0.05)。结论:哮喘小鼠脾脏CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞Foxp3蛋白表达水平下降,淫羊藿苷可显著改善哮喘小鼠气道炎症和气道高反应,可能与其上调肺组织Foxp3蛋白表达和增加外周血IL-10水平相关。     

肾阳虚证、异常黑胆质证及与哮喘病证结合的科学内涵

肾阳虚证、异常黑胆质证分别是中医学、维吾尔医学中典型证型,近年来随着生物医学的不断发展,学者们对其科学内涵进行了大量的研究,发现两者的科学内涵存在异同性,但对两者进行对比研究的报道则较少。哮喘是一种慢性气道炎症性疾病,在中医学中,哮喘常被认为属于肾虚或潜隐性肾虚;在维吾尔医学中,哮喘常被认为属于异常黑胆质,但目前尚未有对肾阳虚哮喘、异常黑胆质哮喘进行对比研究的报道。本文结合文献回顾以及本团队的研究工作,把中医学与维吾尔医学中比较常见的证型肾阳虚、异常黑胆质及其与哮喘病证结合模型进行对比,探讨其科学内涵及其异同性,这对深化相关民族传统医学的认识,构建现代中华民族传统医学的体系具有重要意义。     

淫羊藿对哮喘大鼠气道高反应性的影响

目的: 探讨淫羊藿对哮喘大鼠模型气道高反应性的影响. 方法: 将SD大鼠60只随机分为正常对照组、哮喘模型组、地塞米松组、及淫羊藿低、中、高剂量组,每组10只.实验开始第0天,大鼠ip含卵蛋白100μg和氢氧化铝100 mg的生理盐水溶液,第14天起予1%卵蛋白激发3周,第35天起2%卵蛋白激发1周.治疗组第14天起给予低、中、高剂量淫羊藿0.25,0.5,1 g·kg^-1,或地塞米松1 mg·kg^-1,每天1次,连续4周.正常组与模型组用等量生理盐水代替.采用Buxco肺功能仪有创法检测气道反应性;ELISA法检测肺泡灌洗液细胞因子干扰素(INF)-γ,白介素(IL)-4,IL-5,IL-13,IL-10,IL-6,肿瘤坏死因子(TNF)-α及转化生长因子-β(TGF-β);肺组织HE,PAS及Masson三色染色评价观察小鼠肺组织炎症、气道黏液分泌水平及气道壁周围胶原沉积水平. 结果: 与正常组相比,模型组气道阻力(R_L)明显升高,肺顺应性(C_dyn)明显降低(P<0.01);肺泡灌洗液IL-4,IL-5,IL-13,TGF-β₁和TNF-α水平显著升高(P<0.05, P<0.01),而INF-γ水平显著下降(P<0.05);气道炎症指数、气道黏液评分、及气道周围胶原评分显著升高(P<0.01).与模型组相比,淫羊藿低、中、高剂量组可不同程度降低气道阻力,改善肺顺应性(P<0.05, P<0.01);淫羊藿高剂量组可显著降低哮喘模型组肺泡灌洗液中IL-4(P<0.05),IL-5和IL-13水平(P<0.01);中剂量组可显著降IL-5和IL-13水平(P<0.05,P<0.01),且能显著升高IL-10水平(P<0.05);低剂量组可显著降低IL-5水平(P<0.05);淫羊藿中、高剂量治疗组气道炎症指数、气道黏液评分,以及气道周围胶原面积显著降低(P<0.05,P<0.05). 结论: 淫羊藿可改善哮喘模型气道高反应性,这与其抑制气道炎症,及改善气道重塑相关.     

芍药苷对卵蛋白诱导的哮喘小鼠气道炎症的影响

目的 研究芍药苷对哮喘模型小鼠气道高反应性和气道炎症的影响.方法 以卵蛋白(OVA)致敏和激发小鼠哮喘模型,予地塞米松和低、中、高剂量芍药苷灌胃.测定各组小鼠气道高反应性;检测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞、嗜酸性粒细胞、中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞及嗜碱性粒细胞水平;HE染色观察肺部病理变化.结果 芍药苷可明显降低气道高反应性,缓解肺部炎症浸润水平.结论 芍药苷对哮喘小鼠气道高反应性和肺部炎症具有显著的拮抗作用.     

异常黑胆质证哮喘病证结合模型的建立及评价

目的:建立并评价异常黑胆质证哮喘病证结合模型。方法:采用多因素复合作用建立异常黑胆质证模型,结合卵蛋白致敏激发,进一步建立异常黑胆质证哮喘病证结合模型,观察其一般状态、行为学、下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPAA)功能、交感/副交感神经功能、气道反应性、炎症、胶原沉积等相关指标的变化。结果:异常黑胆质证组、异常黑胆质证哮喘组出现体质量下降(P0.05),饮食水量增加(P0.05),在旷场试验中自主活动减少(P0.05),对糖水偏爱程度下降(P0.05)等表现,血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)水平升高(P0.05),环磷酸腺苷(cAMP)、cAMP/环磷酸鸟苷(cGMP)下降(P0.05);哮喘组、异常黑胆质证哮喘组出现气道阻力升高(P0.05),血清、肺泡灌洗液中Th1/Th2细胞因子失衡,呈Th2优势型(P0.05),HE染色显示炎细胞浸润明显(P0.05),PAS染色提示黏液分泌增多(P0.05),MASSON染色提示胶原沉积增多(P0.05),其中,以异常黑胆质证哮喘组改变更为突出。结论:采用多因素复合和卵蛋白致敏激发建立的异常黑胆质证哮喘模型一方面具有类似维吾尔医异常黑胆质证的临床表现及相关生理学指标的改变,另一方面具有气道高反应性、气道炎症、气道重塑等哮喘疾病特征,表明该模型的建立具有一定的可行性。     

顺铂联合氟西汀对肺癌伴抑郁小鼠干预的研究

【摘要】 目的 通过顺铂联合氟西汀对肺癌伴抑郁小鼠进行干预,检测相关指标,观察氟西汀能否通过抗抑郁作用对肿瘤起到抑制作用。方法 通过社交失败应激及皮下接种Lewis肺癌细胞株建立小鼠肺癌伴抑郁模型;ELISA方法检测血清皮质醇及IL-6 水平;RT-PCR方法检测海马组织中脑源性神经营养因子（brain derived neurothropic factor,BDNF）mRNA表达;免疫组织化学方法检测肿瘤组织核转录因子-κB（nuclear factor-κB,NF-κB）及血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）蛋白表达。结果 双药组IL-6水平与模型组相比明显降低（P<0.05）;双药组皮质醇水平、海马BDNFmRNA表达显著降低（p<0.05）;双药组肿瘤重量、肿瘤组织中NF-κB及VEGF蛋白表达水平与单药组相比无明显差异（p>0.05）。结论 氟西汀能够降低肺癌伴抑郁小鼠血清皮质醇水平并促进海马组织BDNFmRNA表达而发挥抗抑郁作用,但并未发现其抗抑郁效果能够抑制肿瘤进展。     

细辛脑雾化吸入佐治老年支气管哮喘急性发作期的临床疗效

目的探讨细辛脑雾化吸人佐治老年支气管哮喘急性发作期的临床疗效。方法选择住院治疗的支气管哮喘急性发作期老年患者70例,其中男性43例,女性27例,年龄60～78岁,平均（69．2±4．8）岁。随机分为常规治疗组（对照组）和细辛脑佐治组（试验组）,每组各35例。常规治疗组患者接受常规治疗;细辛脑佐治组患者在常规治疗基础上加用细辛脑注射液雾化吸人,共7d。对两组患者的疗效、临床症状与体征消失时间、肺功能变化[（第一秒用力呼气容积／用力呼气量预计值的百分比（FEV,％）,第一秒用力呼气容积／用力肺活量百分比（FEV1／FVC％）,最大呼气峰值流速实测值占预计值的百分比（PEF％）]等进行比较及统计学分析。结果细辛脑佐治组的有效率明显高于常规治疗组（P〈0．05）,喘息、咳嗽、胸闷、肺部哮鸣音等症状、体征消失时间明显少于常规治疗组（均P〈0,01、P〈0．05）。与两组治疗前比较,两组治疗后FEV1％、FEV1／FVC％和PEF％均显著升高（P〈0．01）;与常规治疗组治疗后比较,细辛脑佐治组治疗后的FEV1％、FEV1／FVC％和PEF预计值皆明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）。结论细辛脑对老年支气管哮喘有很好的辅助疗效。     

黄芪甲苷对Th2型淋巴细胞D10.G4.1体外作用的研究

目的探讨黄芪甲苷对Th2型淋巴细胞株(D10.G4.1,D10)体外的干预作用。方法体外培养D10细胞,采用ConA作为刺激剂,分别予以2、4、8×10-5mol·L-1剂量黄芪甲苷体外干预,并用地塞米松作为对照。CCK-8法检测药物对D10细胞的增殖影响;流式细胞术检测药物对D10细胞凋亡和周期的影响;ELISA法检测药物对细胞培养上清IL-4、IL-5、IL-13及TNF-α水平的影响;Western blot法检测D10细胞gata-3表达水平。结果黄芪甲苷各剂量组对D10细胞增殖及凋亡均无明显影响(P>0.05);但黄芪甲苷高剂量组IL-13与gata-3表达水平明显下降(P<0.01),而低剂量组TNF-α明显下降(P<0.01)。结论黄芪甲苷体外具有抑制Th2反应的作用,但与药物细胞毒性或诱导凋亡无关。     

清热活血颗粒对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠气道重塑的影响

目的 探讨清热活血颗粒剂对单纯熏烟法建立大鼠慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)模型气道重塑的影响.方法 采用单纯熏烟法造模,将SPF级54只健康雄性SD大鼠随机分为正常组、COPD模型组、布地奈德组、清热活血颗粒(低、中、高)剂量组,每组9只.给予相应处理36 w,观察HE染色后大鼠肺部病理变化;小动物肺功能检测系统评估实验大鼠肺功能;ELISA测定实验大鼠血清MMP-9、TIMP-1以及TGF-β水平;Western blot法检测肺组织MMP-9、TIMP-1及TGF-β的表达水平.结果 清热活血颗粒各剂量组均不同程度延缓肺功能下降,使FVC降低,使FEV0.1/FVC、MMEF及PEF升高,改善气道重塑的病理改变,优于布地奈德组(P＜0.01).清热活血颗粒各剂量组均能一定程度降低大鼠血清细胞因子TGF-β水平,恢复MMP-9/TIMP-1平衡.结论 清热活血颗粒能够明显延缓COPD模型大鼠的肺功能下降,改善气道重塑.     

补肾益气方对哮喘大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴及CD4^+CD25^+调节性T细胞功能的影响

目的通过观察哮喘大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴与CD4^+CD25^+调节性T细胞(Regulatory T cells,Tregs)功能的改变,探讨补肾益气方对哮喘的干预机制。方法将SD大鼠随机分为正常对照组、哮喘模型组、布地奈德组、低剂量中药组、中剂量中药组、高剂量中药组,每组10只。采用卵蛋白致敏并激发制备哮喘模型,中药组采用相应剂量药物灌胃给药,西医治疗组采用布地奈德雾化吸入。最后1次激发24 h后,采用Buxco有创肺功能仪检测气道阻力;HE染色观察肺组织病理形态学改变;Bio-Plex悬液芯片技术检测血清、BALF中细胞因子水平;流式细胞术检测BALF中Tregs比例;ELISA法测定血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质酮(CORT)水平;采用Real time-PCR法检测下丘脑促肾上腺激素释放激素(CRH)mRNA的表达。结果与正常组比较,哮喘组气道阻力及气道炎症显著增加(P<0.05);BALF中Tregs比例明显下降(P<0.05);血清及BALF中IL-10水平显著下降(P<0.05);血浆中CORT、ACTH水平明显下降(P<0.05);下丘脑CRH mRNA表达水平无明显变化(P>0.05)。与哮喘组比较,低、中、高剂量中药组气道阻力和气道炎症明显减轻(P<0.05);BALF中Tregs比例显著增加(P<0.05),并增加血清中IL-10水平(P<0.05);血浆中CORT、ACTH水平明显升高(P<0.05);下丘脑CRH mRNA表达水平明显增加(P<0.05)。结论哮喘大鼠存在下丘脑-垂体-肾上腺轴与Tregs功能紊乱,补肾益气方可显著改善哮喘大鼠气道炎症和气道高反应性,可能与其改善HPA轴与调节Treg细胞功能,增加内源性皮质酮,增加血清IL-10分泌有关。