TLR3激动剂对B细胞功能的影响

目的观察TLR3激动剂Poly I:C对B细胞功能的影响,包括细胞增殖、共刺激分子表达、细胞因子和抗体的分泌情况。方法利用免疫磁珠法分选小鼠脾脏CD19+B细胞,RT-PCR法证实其表达TLR3。体外用Poly I:C刺激B细胞一定时间后,CFSE分裂法检测B细胞增殖,流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测B细胞表面共刺激分子表达,CBA(cytometric bead ar-ray)法或ELISA法检测培养上清中细胞因子含量,CBA法检测B细胞分泌Ig的亚型。结果 Poly I:C可以促进B细胞增殖,上调B细胞表面CD40、CD80、CD86和MHC II类分子的表达,促进IL-6和TNF-α的高分泌,诱导IgG1κ抗体的产生。结论 Poly I:C可以通过促进增殖、细胞因子分泌,诱导抗体产生和上调共刺激分子表达等多方面调节B细胞功能。     

可生物素化H-2K~d-BSP融合蛋白的原核表达和纯化

目的构建可生物素化的H-2Kd-BSP融合基因的表达载体,原核表达H-2Kd-BSP融合蛋白,以制备H-2Kd-肽四聚体。方法采用RT-PCR技术从小鼠SP2/0细胞中克隆小鼠MHC-Ⅰ类分子H-2Kd基因的胞外区,拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列(BSP)后,插入pET-22b高效表达载体多克隆位点,诱导表达后对表达产物进行纯化,用Western印迹法分析鉴定纯化融合蛋白。结果成功构建pET-H-2Kd原核表达载体,测序证实H-2Kd-BSP融合基因序列正确。pET-H-2Kd原核表达载体可在大肠杆菌BL21中高效诱导表达H-2Kd-BSP融合蛋白,表达量占菌体总蛋白的36%,主要以包涵体形式表达;经反复洗涤纯化,纯化蛋白纯度可达90%以上。纯化蛋白可被H-2Kd分子特异性单克隆抗体SF1-1.1所识别。结论可生物素化H-2Kd-BSP融合蛋白的原核表达和纯化为进一步制备H-2Kd-肽四聚体奠定了实验基础。     

病原生物学精品课程建设的探索与实践

课程建设是衡量学校办学水平和教学质量的重要标志,是实现培养目标的基本保证。作者从师资队伍、教学管理、教学内容、教学方法和课程文化等方面对病原生物学精品课程的建设进行了探讨和实践。     

日本血吸虫可溶性虫卵抗原诱导BIO细胞产生的研究

目的观察日本血吸虫可溶性虫卵抗原（SEA）与成虫抗原（SwAP）是否能够诱导小鼠调节性B细胞的产生。方法SEA、SWAP和脂多糖（LPS）分别体外刺激小鼠脾脏单个核细胞和磁珠分选后的脾脏CD19＋B细胞,72h后用流式细胞术分别检测CD19＋IL-10＋细胞比例,和细胞表面CD80、CD86及CD40的表达,用ELISA法检测培养上清中IL-10的水平。体内实验用SEA、SWAP、PBS分别和不完全弗氏佐剂混合免疫小鼠,1次／N,共3次,末次免疫后7d取小鼠脾脏,流式细胞术检测CD19＋IL-10＋细胞比例,用ELIsA法检测培养上清中IL-10的水平。结果LPS与SEA体外均能显著诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19＋IL-10＋细胞,两者无显著差异,而swAP组不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19＋II-10＋。细胞;SEA与LPS能够诱导脾脏CD19＋B细胞表面高表达CD80、CD86和CD40,而SwAP不能诱导脾脏CD19＋B细胞活化;SEA与LPS诱导脾脏CDt9＋B细胞分化为IL-10＋细胞的比例也显著升高,同时能刺激脾脏CD19＋B细胞分泌高水平的IL-10,两者无显著差异;而SwAP不能诱导小鼠脾脏CD19＋。B细胞分化为IL—10＋细胞并分泌IL-10。SEA体内免疫小鼠后,小鼠脾脏单个核细胞分化为CD19＋IL-10＋细胞比例显著升高,并且能够分泌高水平的IL-10,而swAP和PBS免疫组均不能诱导小鼠脾脏单个核细胞分化为CD-9＋IL-10＋细胞并分泌1L-10。结论SEA体外体内均能诱导小鼠产生分泌IL-10的B10细胞,并且在体外不依赖于脾脏其他免疫细胞的参与,而SwAP体外体内均不能诱导B10细胞的产生。     

小鼠CD8分子α链在SP2/0细胞中的表达及鉴定

目的构建CD8α真核表达载体,为构建膜型细胞因子提供重要工具。方法采取RT-PCR从磁珠分选的CD8α+T细胞中得到CD8α的cDNA基因,将其克隆入表达载体pVITRO。经测序后转染SP2/0细胞,通过流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测CD8α分子在SP2/0细胞中的表达情况。结果构建的pVITRO/CD8α载体测序后,Genebank比对证实为CD8α的cD-NA分子,流式细胞仪和激光共聚焦显微镜结果均说明CD8α在SP2/0细胞的细胞膜上得到表达。结论 CD8α在真核细胞膜上能成功表达,为进一步构建膜表达型细胞因子奠定了基础。     

分泌IFN-γ的杀伤性树突状细胞的体外诱导培养及鉴定

目的从体外诱导的骨髓来源的树突状细胞（dendritic cells,DC）中分离分泌IFN-γ的杀伤性树突状细胞（IFN-γproducing killer dendritic cells,IKDC）.方法取C57BL/6小鼠骨髓细胞,以小鼠重组GM-CSF和IL-4协同诱导下培养.培养第6天,加LPS刺激.培养第7天,收集细胞,通过流式细胞仪（flowcytometer,FCM）分选出CD11clowB220＋NK1.1＋的细胞,FCM进一步鉴定其表型.并将其与肿瘤细胞系B16F10共培养24 h后,CBA（cytometric bead array）法检测共培养上清中IFN-γ的分泌水平.结果体外培养的骨髓来源的DC中,FCM检测存在CD11clowB220＋NK1.1＋的细胞,进一步鉴定发现其高表达CD49b,低表达MHC II类分子,不表达Gr-1分子;并且与肿瘤细胞B16F10共培养后可分泌大量IFN-γ.结论通过FCM分选的方法可从体外培养的骨髓来源的DC中获得IKDC.     

医学免疫学PBL教学模式下的集体备课探讨

医学免疫学内容抽象,学生感觉枯燥难懂,运用PBL教学模式可激发学生学习兴趣,培养学生解决实际问题能力。PBL教学模式下的集体备课,促使教师群策群力,有效完成PBL教学模式的设计和实施。     

病原生物学精品课程建设的探索与实践

目的做好病原生物学精品课程的建设工作。方法从师资队伍、教学管理、教学内容、教学方法、课程文化等方面进行了探讨和实践。结果精品课程的建设工作取得了显著的成效。结论课程建设是衡量学校办学水平和教学质量的重要标志,是实现人才培养目标的基本保证。     

慢性髓细胞自血病BCR-ABL 融合基因片段的克隆表达及其单克隆抗体的制备

目的 制备针对慢性髓细胞白血病(CML)bcr-abl融合蛋白的单克隆抗体(mAb).方法 采用PCR方法扩增包含BCR-ABL(b3a2)融合位点周围约450bp的基因片段,将其定向克隆到pQE-31载体内,转化大肠杆菌M15菌株,诱导表达6×His标签的融合蛋白p18bcr-ab1并对其进行纯化,用纯化后的蛋白免疫Balb/c小鼠,采用常规的细胞融合技术制备针对bcr-abl蛋白的mAB并对其特性进行鉴定.结果 获得了6株分泌抗bcr-abl融合蛋白mAB的杂交瘤细胞株,所分泌的mAbs均特异性识别.bcr-cbl蛋白abl端.结论 本研究中所表达的融合蛋白p18bcr-abl及其mAb的获得为慢性髓细胞白血病的研究提了有效的工具.     

病原生物学精品课程建设的探索与实践

目的做好病原生物学精品课程的建设工作。方法从师资队伍、教学管理、教学内容、教学方法、课程文化等方面进行了探讨和实践。结果精品课程的建设工作取得了显著的成效。结论课程建设是衡量学校办学水平和教学质量的重要标志，是实现人才培养目标的基本保证。