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HIV核心抗原p24原核系统的高效表达、纯化及活性鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 在原核表达系统中对HIVp2 4抗原基因进行克隆和高效表达、纯化并鉴定其活性。方法 利用PCR技术从HIV-1全基因质粒 (B2N)中扩增p2 4抗原基因 ,并克隆入T载体中。通过酶切消化后连接到表达载体pRSET上 ,用此连接产物转化大肠埃希菌BL2 1,经IPTG诱导 ,表达p2 4抗原。利用固定化金属离子 (Ni2 )配体亲和层析技术从表达蛋白中纯化目的蛋白。并运用双酶切技术、SDS-PAGE电泳、WesternBlot(WB)及ELISA法分别对插入基因片段的正确性、表达产物的活性及特异性进行检测。结果 PCR产物约为 6 90bp ,与预期p2 4抗原全基因片段大小一致。重组质粒T-p2 4和pRSET-p2 4经BamHⅠ和HindⅢ双酶切 ,其插入的外源基因片段均为 6 90bp。将纯化前与纯化后的蛋白作SDS PAGE电泳 ,均可见一条约 2 4× 10 3的外源基因表达带 ,与计算的相对分子质量相符。经WB和ELISA试验 ,证明基因工程表达的p2 4抗原具有较高的特异性及活性。结论 成功构建了HIVp2 4表达载体pRSET-p2 4 ,并在原核细胞中高效表达 ,其表达产物具有良好的特异性及活性 相似文献
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两院院士投票评选的“′97世界十大科技进展”之一为“英国科学家发现乙肝病毒结构”,并指出这一成果为从分子角度研究乙肝病毒的致病机理,从而为研制乙肝疫苗和药物奠定了基础。英国“自然”杂志1997年386卷同时发表了英国医学研究委员会分子生物学实验室B.Bottcher等“用低温电子显微术测定乙型肝炎病毒核心蛋白折叠”和美国国立卫生研究院结构生物学实验室J.F.Conway等“用低温电子显微术显示乙肝病毒衣壳中的4-螺旋束”两篇研 相似文献
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恒河猴实验感染庚型肝炎病毒的实验研究 总被引:3,自引:1,他引:3
目的研究庚型肝炎病毒(HGV)在恒河猴中的实验感染状态。方法用一名HGVRNA阳性、HBV、HCV均阴性的健康献血员血浆实验感染2只恒河猴,并取第一代猴感染后6周的血再感染1只第二代恒河猴,然后用以第二代猴感染6周后血继续感染2只第三代恒河猴。分别用逆转录聚合酶链反应(RT-nPCR)检测受感染猴血清中的HGVRNA,并每周抽血测定血清中丙氨酸转氨酶(ALT)。结果感染1周后猴血清HGVRNA阳转,最长持续阳性28周以上。不同感染个体血清ALT水平有明显差异,其中1号猴有短期轻度升高,5号猴血清ALT较长时间在100U/L以上。肝活检发现,感染后16周猴肝组织出现明显的病毒性肝炎样病理改变。进一步对该献血员血浆和感染后猴血清中的HGV5’端部分非编码区基因PCR产物进行测序,结果显示感染用献血员血浆和猴血清中HGV序列与国外株HGU44402的同源性分别为9833%和9583%;与HGU36380株的同源性分别为9250%和8917%;感染猴血清中HGV序列与献血员HGV序列同源性为9583%。结论恒河猴对HGV敏感,可以做为实验模型动物 相似文献
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两种方法检测乙肝HBsAg效果对比 总被引:1,自引:0,他引:1
目的 :考察胶体金联免疫吸附与酶联免疫吸附试验的灵敏度与特异性。方法 :用乙肝表面抗原胶体金联免疫吸附试剂 (GCISA)和酶联免疫试剂 (ELISA)检测各种肝炎病人血清 90 9份 ,正常人血清 173份及乙肝表面抗原质控标准品。结果 :GCISA和ELISA分别检出 773和 770份阳性样品 ,总符合率为97 0 %。检测乙肝表面抗原质控标准品 ,GCISA的灵敏度为 1ng/ml,ELISA为 1~ 2ng/ml,且两种方法都只与HBsAg有特异反应 ,与乙肝病毒核心抗原、e抗原无交叉反应。结论 :GCISA检测血清中的HBsAg特异性强 ,灵敏度与ELISA一致 ,在检测单份样品时较ELISA简单快速 ,观察结果直观 ,不需仪器设备。 相似文献
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为建立更敏感的检测人免疫缺陷病毒 (HIV)抗体的方法 ,并研制检测试剂盒。根据HIV 1/ 2型的基因序列及其所编码氨基酸结构 ,采用固相法合成了HIV 1型的gp4 1.1、gp4 1.2、gp12 0、P2 4和HIV 2型的gp36 5条多肽 ,混合包被酶标板作为固相抗原 ,并用辣根过氧化物酶标记以上多肽抗原作为标记物 ,建立检测血清中HIV 1/ 2抗体的双抗原夹心ELISA法。同时 ,应用该方法制备检测HIV抗体的试剂盒 ,并检测 3批卫生部药品和生物制品检定所HIV诊断试剂国家参比品。用检定所参比品检测 ,该方法特异性、灵敏度均为 10 … 相似文献
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测定我室分离的甲型肝炎病毒BJ-1株结构蛋白VP4-VP2基因区的核心苷酸序列。方法从BJ-1感染的A549细胞中提取病毒RNA模板,通过RT-PCR扩增相应的cDNA片段,测定其核苷酸序列。结果BJ-1株与野型株MBB比较,VP4-VP2区有4个核苷酸变异,同源性为99.5%,推论的氨基酸序列有1个氨基酸变异,同源性为99.6%。与HM-175比较,有30个核苷酸变异,同源性为95.9%(705 相似文献
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双抗原夹心法检测抗HIV-1/2总抗体方法的建立和评价 总被引:5,自引:0,他引:5
目的 进一步提高HIv感染诊断试剂的敏感性。方法 以人工合成的HIv—1 gp41.1(sP1)、gp41.2(sP2)、gp120(sP3)、P24(sP4)和HIV—2gp36(sP5)5条多肽,采用双抗原夹心酶链免疫吸附试验(ELISA)原理,以sP1、sP3、sP4和sP5混合包被酶标板作为因相抗原,辣根过氧化物酶标记sp1、sp2、sP4和sP5多肽为标记物,建立了检测抗HIV—1/2总抗体的双抗原夹心ELISA法。结果 检测卫生部药品生物制品检定所第2代40份质控参比血清,其特异性和灵敏度均为100%,高于间接ELISA法(特异性为90%,灵敏度为65%)。检测210份其他病种患者血清均为阴性,与雅培HIVAB试剂比较检测如份健康献血员血清和88份HIv感染者血清,符合率为100%。结论 本方法特异性强、敏感性高,操作简便,适用于献血员的筛选和临床HIv感染的检测。 相似文献