特洛伊肽运载核酸的研究进展

特洛伊肽(trojan peptides),又称细胞穿透肽(cell-penetrating peptides,CPP)或蛋白转导域(protein transduction domains,PTD),是一类少于30个氨基酸的小肽片段,它们一般含有多个碱性氨基酸,能够高效跨越细胞膜并将多种不同类型的大分子物质(如多肽,蛋白质,核酸等)运送至细胞内.本综述主要阐述了利用特洛伊肽将质粒DNA和siRNA运送至培养的哺乳动物细胞以及动物体内的研究进展,并阐明了这一运载系统在基因功能研究和临床应用上的巨大潜力和意义.     

2000 — 2007年上海市副溶血性弧菌致集体性食物中毒分析及对策

  目的  筛选并鉴定可用于实验室快速检测副溶血性弧菌的适配体序列。  方法  利用全菌SELEX技术,通过人工合成全长86 bp、中间含40 bp随机核苷酸序列的单链DNA文库,筛选与副溶血性弧菌高效结合的适配体,对候选适配体序列进行特异性分析,并评估其二级结构和Kd值。  结果  第4轮筛选即出现比较明显的产物富集,继续筛选至第12轮结束。经克隆和测序后得到5条候选适配体序列（F2、F5、F6、F19、F30）,它们与副溶血性弧菌的结合率分别为68.8 %,68.8 %,73.1 %,65.2 %和72.7 %;特异性实验显示,5条候选适配体均能与副溶血性弧菌高效结合,与5种其它常见致病菌则结合不明显;用DNA folding form对5条候选核酸适配体序列进行二级结构模拟,结果显示,其二级结构以茎环（凸环和圆环）为主,茎环结构中的茎多由G-C配对组成;采用荧光分析法对5条候选适配体的Kd值进行分析测定,其对靶细菌的解离常数分别为15.88、15.24、9.13、4.12和25.39 nM。  结论  全菌SELEX技术可用于副溶血性弧菌适配体筛选,5条候选适配体与靶细菌结合力强,特异性高。     

杭州地区临床和食品来源德尔卑沙门菌耐药特征与基因组分析

目的了解杭州地区临床和食品来源德尔卑沙门菌的耐药特征, 并进行溯源分析。方法对2015—2020年杭州地区分离的60株德尔卑沙门菌进行药敏分析、脉冲场凝胶电泳(PFGE)分型和全基因组测序, 并下载公共数据库基因组进行比较;利用测序数据对菌株进行多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)和耐药基因扫描, 并构建基于单核苷酸多态性(SNP)位点的系统发育树。结果杭州地区德尔卑沙门菌临床株和食品株对28种药物的耐药率差异均无统计学意义, 多重耐药率为76.7%(46/60);所有菌株均检出氨基糖苷乙酰转移酶基因aac(6′)-Iaa和磷霉素耐药基因fosA7;60株德尔卑沙门菌共分为46种PFGE带型、53种cgMLST(HC2)型别, 除1株为ST3220型外, 其余均为ST40型;基于439株德尔卑沙门菌(包括60株杭州菌株和379株公共数据库菌株)SNP位点构建的系统发育树显示:部分杭州菌株与东南亚菌株进化距离较近, 提示可能存在跨境传播, 食品株主要来自猪肉和水产类;其他杭州菌株与北京、广州、湖北、重庆等省市的菌株距离较近, 提示可能存在跨省传播, 食品株...     

杭州地区相同分子型别的单核细胞增生李斯特菌临床和食品分离株基因组分析

目的 研究杭州地区分子型别相同的临床和食品来源单核细胞增生李斯特菌在基因组水平的分子差异及进化关系。方法 利用高通量基因组测序和生物信息学分析方法对脉冲场凝胶电泳(Pulse-field gel electrophoresis,PFGE)型别一致的1株临床来源和6株食品来源的ST8型菌株进行基因组共线性、ncRNAs分布和毒力基因携带分析。联合NCBI Assembly数据库中ST8型菌株基因组,构建基于全基因组SNPs位点的进化树,进行溯源分析。结果 杭州地区临床和食品来源的菌株基因组共线性一致。菌株在毒力基因lmo0036和lmo2396的序列和rli48, rli62和rliG分子,质粒pLmA144的分布存在差异。基因组SNPs进化树显示ST8型菌株呈现高度同源。食品分离株中12-004与临床株12-103的进化上最接近,只有16个SNPs差异。结论 杭州市场近年肉类食品中存在遗传进化高度相似的一群ST8型单核细胞增生李斯特菌。杭州单核细胞增生李斯特菌临床分离株感染可能来自这群菌株。     

杭州地区单核细胞增生李斯特菌食品分离株分子型别研究

目的研究杭州地区单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)食品分离株的分子分型情况,了解当地流行株的型别特征。方法用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分型(MLST)的方法对单核细胞增生李斯特菌进行分子分型。PFGE结果进行聚类分析,并绘制MLST数据的最小生成树。结果 6个血清型组成的133株杭州食品分离株共获得19个MLST型别,并发现1个新的ST型ST767。ST9和ST121是数量最多的型别。用AscI和ApaI酶切分别获得33和45个PFGE带型。结论杭州地区单核细胞增生李斯特菌食品分离株分子型别分布广泛,大部分菌株是可引起人李斯特菌病的Lineage I和Lineage II菌株。食品中单核细胞增生李斯特菌的污染比较严重,应加强监测与管理以防食源性疾病的发生。     

2017—2021年杭州市临床和食品来源伦敦沙门菌耐药与基因组特征

目的分析2017—2021年杭州市临床和食品来源伦敦沙门菌的耐药与基因组特征。方法对2017—2021年杭州市分离的91株伦敦沙门菌进行药敏分析、PFGE分型和全基因组测序;利用测序数据对菌株进行多位点序列分型(MLST)、核心基因组多位点序列分型(cgMLST)和耐药基因识别, 并与公共数据库菌株比较进行系统发育分析。结果临床株和食品株对18种药物的耐药率差异均无统计学意义(均P>0.05), 其多重耐药率为75.8%(69/91), 以同时耐7类药物的菌株居多, 发现1株对多黏菌素E耐药且检出mcr-1.1基因的耐8类药物菌株;50.5%(46/91)的菌株对阿奇霉素耐药且检出mph(A)基因;91株伦敦沙门菌均为ST155型, 分为44种PFGE带型和82种cgMLST型别;系统发育分析显示, 大部分杭州菌株(83/91)自行聚集成簇, 簇内混杂少量来自欧洲和北美洲的人分离株以及湖北、深圳等省市的猪肉分离株;少数杭州菌株(8/91)与分离自东南亚、欧洲、北美洲的菌株进化距离较近;与临床株距离较近的主要是猪肉分离株。结论杭州市伦敦沙门菌的感染主要由ST155型菌株引起, 以本...     

免疫磁珠-环介导等温扩增联用技术快速检测副溶血性弧菌方法的建立

目的建立一种快速且质优价廉的检测副溶血性弧菌的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。方法制备副溶血性弧菌跨膜转录调控蛋白toxR多克隆抗体,鉴定纯化后,进行磁珠包被制成免疫磁珠。利用免疫磁珠分离法和环介导等温扩增联用完成对副溶血性弧菌的检测,扩增产物经SYBR Green I染色肉眼观察和电泳鉴定。将副溶血性弧菌菌液作一系列稀释后,运用LAMP法进行敏感性检测,利用副溶血性弧菌和非副溶血性弧菌来验证LAMP方法的特异性。结果LAMP检测副溶血性弧菌的检测下限为10~5 CFU/ml。副溶血性弧菌出现LAMP特征性扩增反应,非副溶血性弧菌未出现LAMP扩增。结论 LAMP检测方法为快速诊断试剂盒打下实验基础,适合日常监测,可满足快速检测的需要。