刚地弓形虫RH株ROP11基因的克隆与真核表达载体的构建北大核心CSCD

目的构建刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)棒状体蛋白11(ROP11)的真核表达重组质粒并在真核细胞中表达目的蛋白。方法设计合成弓形虫ROP11基因引物,运用RT-PCR方法扩增ROP11基因并克隆至真核表达质粒pcDNA3.1(+),构建重组表达质粒pcDNA3.1-ROP11。将重组质粒转染HeLa细胞,采用间接免疫荧光法检测目的蛋白表达。结果 RT-PCR扩增弓形虫ROP11基因片段为1 548bp,与预期大小相符。构建的重组质粒pcDNA3.1-ROP11经PCR及EcoRⅠ和NotⅠ双酶切鉴定正确。重组质粒测序后与GenBank报道的ROP11基因比对,核苷酸序列同源性和推导氨基酸序列同源性均为99%。免疫荧光检测显示,在重组质粒转染的HeLa细胞胞浆观察到黄绿色荧光,对照组无荧光。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3.1-ROP11,该重组质粒能够在真核细胞中表达目的蛋白,为弓形虫核酸疫苗的研制奠定了基础。     

药监局在保护谁的利益?

"我们之所以不想公开药品、医疗器械违法案件,主要是考虑到企业的生存发展,如果曝光了这些案件,就会给企业造成灭顶之灾,企业就有垮台的危险。"郑州市食品药品监督管理局局长吴希悦的一席话,出人意料(据10月31日《东方今报》)。     

氨溴索对流感嗜血杆菌生物膜清除和膜内杀菌作用研究

目的：观察氨溴索（AMB）对流感嗜血杆菌生物膜（BF）的作用以及对BF菌的杀菌作用。方法：30株流感嗜血杆菌菌株从腺样体肥大患儿术中切除的腺样体组织分离,选取具有较强成膜能力的2株细菌,96微孔板法培养细菌形成BF,结晶紫染色法测定不同浓度AMB对2株细菌BF的影响,并用扫描电镜观察细菌BF形态结构的改变;平板计数法检测AMB对BF菌杀菌作用。结果：结晶紫染色法示,当AMB浓度分别达到0．25mg／ml和0．49mg／ml时,2株细菌BF吸光度值较对照组差异有统计学意义（P〈0．01）,扫描电镜发现BF结构受到破坏;菌落计数显示AMB对流感嗜血杆菌BF菌有杀菌作用,且剂量依赖效果明显。结论：AMB在体外对流感嗜血杆菌BF具有破坏和清除功能,并对BF菌具有杀菌作用。     

京津冀地区血站实验室HBsAg检测不合格情况分析

目的分析北京、天津、河北地区血站实验室2018年的HBsAg ELISA检测不合格率情况,探究可能影响各实验室HBsAg检测不合格率的因素,为实现各地区血站实验室同质化打下基础。方法通过问卷填报的形式,收集2018年北京、天津、河北地区15家血站实验室各月的HBsAg ELISA检测相关质量监控指标,在各实验室间进行比较分析。结果 1)2018年北京、天津、河北地区15家血站实验室的HBsAg ELISA检测不合格率差异有统计学意义(P<0.01);2)6种HBsAg ELISA试剂的检测不合格率差异有统计学意义(P<0.01);3)使用相同试剂的不同实验室间HBsAg检测不合格率差异均有统计学意义(P<0.05);4)采用进口+国产试剂组合的4个实验室不同试剂间检测不合格率差异均有统计学意义(P<0.05),采用国产+国产试剂组合的实验室中有54.5%(6/11)的实验室不同试剂间检测不合格率差异无统计学意义(P>0.05);5)北京、天津、河北地区15家血站实验室的HBsAg ELISA检测不合格结果中单试剂不合格占比分布在20%—80%间,各实验室间...     

京津冀血站实验室核酸混检模式拆分阳性率分析

目的对京津冀血站核酸实验室混检模式拆分阳性率进行比对分析,为实现京津冀地区血站实验室间的同质化提供理论依据。方法对京津冀地区14家核酸混样检测的血液中心和中心血站实验室进行实验室能力指标——有效拆分阳性率的比对,运用统计学方法比较各实验室及试剂之间的差别,整理数据并综合分析。结果京津冀不同血站实验室间NAT检测阳性检出率比较(P<0.05),差别具有统计学意义;拆分阳性率最高为76.92%,最低为30.09%;不同实验室间拆分阳性率比较(P<0.05),差别具有统计学意义;使用相同试剂的不同实验室之间拆分阳性率比较:R1、R2、R3试剂的差别均具有统计学意义(P<0.05)。京津冀血站实验室NAT拆分阳性率平均值为48.94%,参与调查研究的14家实验室,7家拆分阳性率在总均值线以上,7家拆分阳性率其下,低于总平均值的实验室使用的均为国产试剂。结论区域内混样检测试剂以应用国产试剂为主;应对相同试剂对不同实验室混样检测拆分阳性率出现的较大差异进行分析。可通过建立完整的实验室能力指标比对体系和有效的信息沟通渠道,不间断对京津冀血站实验室质量指标进行监控,进一步实施京津冀血...     

某锅炉厂电焊工发锰含量分析

锰是人体正常代谢不可缺少的微量元素 ,但过量的锰进入人体会产生锰中毒 ,已引起人们的关注。我们对某锅炉厂电焊工进行了发锰含量测定和分析 ,结果报告如下。1　调查对象及方法1 1　调查对象　对某锅炉厂工龄一年以上的电焊工 381人进行全面体检 ,测定发锰含量。其中包括Ａ中毒组 (诊断为锰中毒后已脱离电焊作业接受治疗的电焊工 ) ;Ｂ观察对象组 (怀疑为锰中毒 ,但未确诊 ,仍从事电焊作业的电焊工 ) ;Ｃ接触组(在岗电焊工人 ) ;Ｄ对照组 (与Ａ、Ｂ、Ｃ组年龄、工龄、性别组成相近不接触锰的工人 )。1 2　发样采集与处理　采集调查对象枕部…     

张家口地区机采血小板捐献者HPA分型研究

目的:分析河北省张家口地区血小板捐献者血小板特异性抗原HPA1-5,15系统的基因多态性。方法:采集血小板捐献者静脉血并提取DNA,采用聚合酶链-序列特异性引物(PCR-SSP)法进行血小板特异性抗原分型,计算基因频率、基因型频率并与国内外其他地区进行比较是否存在差异及是否表现地区特异性。结果:HPA-1、HPA-2、HPA-4系统中基因表达均为纯合子aa,未出现表达纯合子bb的存在者,其中HPA-1和HPA-4系统各发现杂合子ab表达1例(1%),HPA-2系统发现杂合子ab表达14例(14%);HPA-5系统基因表达主要为纯合子aa(98%),极少数表达纯合子bb(2%);HPA-3和HPA-15系统基因表达杂合程度较高,HPA-3系统基因表达aa、ab、bb表达比例分别为46%、40%、14%,HPA-15系统基因表达aa、ab、bb表达比例分别为21%、64%、15%。结论:张家口地区血小板特异性抗原HPA1-5,15系统基因频率具有本地区特点;HPA-3和HPA-15系统基因表达杂合程度较高,引发同种免疫及血小板输注无效的可能性较大,因此应引起注意。     

京津冀血站实验室抗-HIV检测不合格情况分析

目的 了解京津冀地区血站血液筛查实验室(简称血站实验室)无偿献血者血液标本抗-HIV检测不合格情况及不同血站实验室抗-HIV检测能力的差异及其影响因素.方法 本实验室以电子邮件形式向京津冀15家血站实验室发放并收集调查问卷,内容包括2018年1月～12月各血站实验室抗-HIV ELISA不合格率和确证(WB)阳性结果(...     

刚地弓形虫RH株ROP11基因的克隆与真核表达载体的构建

目的构建刚地弓形虫（Toxoplasma gondii）棒状体蛋白11（ROP11）的真核表达重组质粒行在真饮细胞中表达目的蛋白。方法设计合成弓形虫ROP11基因引物,运用RTPCR方法扩增ROP11基因并克隆至真干发表达质粕pcDNA3．1（＋）,构建重组表达质粒pcDNA3．1-ROP11。将重组质粒转染HeLa细胞,采用间接免疫荧光法检测目的蛋白表达。结果RT—PCR扩增弓形虫ROP11基因片段为1548bp,与预期大小相符。构建的重组质粒pcDNA3．1-ROP11经PCR及EcoRI和NotI双酶切鉴定正确。重组质粒测序后与GenBank报道的ROP11基因比对,核什酸序列同源性和推导氨基酸序列同源性均为99％。免疫荧光检测显示,在重组质粒转染的HeLa细胞胞浆观察到黄绿色荧光,对照组无荧光。结论成功构建了真核表达质粒pcDNA3．1-ROP11,该重组质粒能够在真核细胞中表达日的蛋白,为弓形虫核酸疫苗的研制奠定了基础。     

京津冀血站实验室核酸混样检测模式无效结果分析

目的了解京津冀各地血站实验室所采用的核酸混样检测模式及其在各实验室血液核酸检测过程的差别和影响因素。方法根据京津冀血站实验室比对工作组对3地15个血站实验室调查整理的《2018年京津冀血液筛查实验室质量指标数据汇总分析》及《京津冀血站实验室2018年1—12月质量指标数据》,提取其中有关核酸混样检测模式的数据,统计分析不同核酸混样模式检测的无效结果,包括无效批次率、无效pool率。采用SPSS.20.0软件对数据做统计学分析。结果 2018年京津冀3地血站实验室采用核酸混样检测模式的比例为93.33%(14/15),14家采用混样模式检测的核酸实验室的无效批次率0.25%(1/403)—1.94%(23/1 185),无效pool率0.03%(2/5 857)—0.67%(32/4 750)(P<0.05)。14家实验室共应用6种(不同厂家)(R1—R6)试剂或试剂组合R2/R3/R4/R5/R2+R3/R4+R5,NAT混检无效批次率0.25(1/403)—1.92%(29/1 508),无效pool率0.08%(36/43 238)—0.5%(45/8 938)(P<0...