短发夹状RNA对人肝癌细胞环氧合酶-2的抑制作用

目的:构建针对人环氧合酶-2(COX-2)基因编码区的短发夹状RNA(shRNA)真核表达载体质粒,观察其在不同时间点对人不同肝癌细胞株COX-2表达的影响.方法:以人COX-2mRNA编码区作为RNA干扰靶点,构建shRNA真核表达载体质粒WBH1和WBH2,应用阳离子脂质体分别转染人肝癌细胞株HepG2和Bel7402,利用逆转录聚合酶链反应和Westernblot法分别观察两株细胞转染后24,48,72,和96hCOX-2mRNA和蛋白的表达变化,检测抑制效果.结果:质粒在HepG2细胞和Bel7402细胞中的转染率分别约为60%和54%.WBH1导入细胞24,48,72和96h后,逆转录聚合酶链反应检测COX-2mRNA表达抑制率,HepG2细胞分别为18.5%,88.6%,52.8%和42.4%(P<0.01).Bel7402细胞分别为9%,45.1%,70.1%和56.3%(P<0.01).Westernblot法检测蛋白表达抑制率,HepG2细胞分别为10.3%,80.5%,45.3%和39.0%(P<0.01);Bel7402细胞分别为8.3%,40.2%,66.4%和35.6%(P<0.01).质粒WBH2对COX-2的表达无影响(P>0.05).结论:针对人COX-2的shRNA能高效特异的抑制不同肝癌细胞株的COX-2表达.HepG2细胞和Bel7402细胞分别以48h和72h抑制效果最明显.56.3%(P<0.01).Westernblot法检测蛋白表达抑制率,HepG2细胞分别为10.3%,80.5%,45.3%和39.0%(P<0.01);Bel7402细胞分别为8.3%,40.2%,66.4%和35.6%(P<0.01).质粒WBH2对COX-2的表达无影响(P>0.05).结论:针对人COX-2的shRNA能高效特异的抑制不同肝癌细胞株的COX-2表达.HepG2细胞和Bel7402细胞分别以48h和72h抑制效果最明显.     

肝再生与信号通路的研究进展

人和动物肝脏都具有极强调节自身生长发育和体积大小的能力。肝细胞在正常情况下很少分裂,但在肝损伤(外科切除、化学性或病毒性损伤)或体积过度(药物诱生的肝肥大、大肝脏移植小供体内等)时会迅速表现其强大的增殖和自我调控能力。肝再生的机制非常复杂,多种信号通路在其中起着重要的作用,现将有关研究综述如下。     

肝卵圆细胞调控机制研究进展

肝卵圆细胞是一类存在于成年肝脏、具有自我更新和多向分化潜能的肝干细胞。当肝脏发生严重损伤且肝细胞再生障碍时,卵圆细胞被激活并大量增殖,参与肝脏损伤的修复与重建。肝卵圆细胞增殖分化是多因素作用的结果。现就肝卵圆细胞的定位、来源及调控机制的研究进展作一概述。     

真核翻译延长因子1A2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成作用的研究

人类真核翻译延伸因子1A2（EEF1A2）是一种管家基因，可能作为一种新的潜在癌基因。参与肿瘤的发生、发展。目的：探讨EEFIA2对人胰腺癌裸鼠移植瘤生长和血管形成的作用。方法：以聚合酶链反应（PCR）扩增目的基因片段，应用基因重组技术构建Ad5／F35。EEF1A2重组腺病毒载体。15只裸鼠建立人胰腺癌移植瘤模型．随机分为对照组、绿色荧光蛋白（GFP）组和EEF1A2组，分别注射PBS0．1ml、Ad5／F35-GFP0．1ml（1×10^8PFU）和Ad5／F35-EEF1A20．1ml（1×10^8 PFU）。测定各组肿瘤体积和质量，应用免疫组化方法检测各组增殖细胞核抗原（PCNA）和CD31的表达。结果：成功构建了表达EEF1A2的重组腺病毒载体。与对照组和GFP组相比，EEF1A2组裸鼠肿瘤体积和质量显著增加（P〈O．05），PCNA和CD31表达显著增高（P〈O．05）。结论：EEF1A2可显著促进人胰腺癌裸鼠移植瘤生长，细胞增殖和肿瘤血管形成可能是其重要作用机制。     

以慢性腹泻为主的普通变异型免疫缺陷临床分析

目的:探讨以消化道症状慢性腹泻为主要表现的普通变异型免疫缺陷(common variable immunodeficiency,CVID)的临床及病理特点,提高消化科医师对该病的认识。方法:回顾性分析我院2000年1月—2018年10月以慢性腹泻为就诊症状,确诊为CVID的10例患者的临床资料、实验室检查、影像学检查、组织病理及治疗和预后。结果:10例患者男女比例7∶3,平均发病年龄(30.5±17.3)岁,发病到确诊中位时间为17.5(7.5,37.5)个月。慢性腹泻主要表现为稀糊状便,胶冻状,平均约4～5次/d,无黏液、脓血便,严重者水样泻可达10～20次/d,其中2例伴有间歇性发热表现。所有患者均伴有明显低钾血症及不同程度低蛋白血症。8例合并不同程度的贫血。全部病例以检测到免疫球蛋白(immunoglobuline, Ig)G、IgM、IgA降低确诊。8例患者的淋巴细胞检测显示,4例出现CD4/CD8比例倒置。4例存在胃肠道感染,主要为寄生虫、结核、EB病毒(Epstein-Barr virus, EBV)及机会性真菌感染。胃肠镜表现多样性,主要有十二指肠球部及结肠结节样增生、小肠溃疡、绒毛变钝等表现,病理学主要表现为上皮下淋巴细胞浸润,浸润的淋巴细胞主要以CD8+淋巴细胞为主,浆细胞缺失。腹部影像学普遍(8/10)存在腹部肠系膜淋巴结增大,3例出现小肠肠壁增厚,7例存在脾脏肿大。3例合并自身免疫性疾病,3例合并肾小管酸中毒。9例患者接受丙种球蛋白治疗,4例同时给予肾上腺糖皮质激素治疗,4例合并感染同时给予对应抗感染治疗,临床症状均好转。结论:CVID胃肠道表现尤其是慢性腹泻发生率较高,应重视这类患者的胃肠镜及组织病理学检查。临床应重视对该病的诊断并进一步提高认识。