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根据O抗原的不同,霍乱弧菌可分成200多个血清群,其中仅O1群和O139群能引起暴发流行。霍乱弧菌的检验多以传统细菌培养方法为主,存在操作繁琐、费时费力等缺点。实时PCR以其闭管检测、无需电泳、特异性强、灵敏度高、可定量等优点已广泛用于病原菌的检测,其中包括致病性弧菌的检测,如霍乱弧菌、 相似文献
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双重实时PCR快速同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌 总被引:5,自引:2,他引:5
目的建立改良分子信标双重实时PCR同时检测霍乱弧菌和副溶血弧菌的快速方法,应用于霍乱监测、副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)和副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因(TDH)的保守序列,分别设计引物和改良分子信标探针,以10种细菌作对照,建立双重实时PCR改良分子信标检测体系,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和霍乱监测。结果改良分子信标双重实时PCR反应体系DNA灵敏度为102.4~166.6fgμl,菌液灵敏度为32~64CFUml或3~6CFUPCR反应体系,无交叉反应。此反应体系同时检测40株副溶血弧菌和50株霍乱弧菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰。对3起细菌性食物中毒共48份样品和100份海产品进行检测,9份副溶血弧菌实时PCR阳性,其中7份副溶血弧菌细菌培养阳性,其余样品都为阴性。从样品处理到检测结果仅需1天时间。结论改良分子信标双重实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于霍乱和副溶血弧菌食物中毒的快速诊断,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。 相似文献
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改良分子信标—实时PCR快速检测副溶血弧菌 总被引:12,自引:0,他引:12
目的 :建立改良分子信标 -实时 PCR检测副溶血弧菌的快速方法 ,应用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断和海产品检验。方法 :根据 Gen Bank公布副溶血弧菌的耐热直接溶血毒素基因 (TDH)的保守序列 ,设计一对引物和改良分子信标探针 ,用 FAM荧光剂标记探针的 5′,并进行特异性和灵敏度分析 ;同时以 11种细菌作对照 ,建立改良分子信标检测副溶血弧菌的实时 PCR反应体系 ,应用于副溶血弧菌食物中毒快速诊断和食品微生物检测。结果 :检测 12种细菌 ,只有副溶血弧菌有荧光信号 ,与其他细菌无交叉反应 ,DNA灵敏度为 16 6 .6 fg/ μl,菌液灵敏度为 6 9cfu/ ml或 6 cfu/ PCR反应体系。改良分子信标 -实时 PCR反应体系检测 4 0株副溶血弧菌均出现特异的荧光信号 ,无干扰。对 3起细菌性食物中毒共 4 8份样品和 10 0份海产品进行检测 ,9份副溶血弧菌实时 PCR阳性 ,其中 7份副溶血弧菌细菌培养阳性 ,其余样品都为阴性。检测时间仅需 2 h。结论 :改良分子信标 -实时 PCR检测体系快速、灵敏度高 ,特异性强 ,可用于副溶血弧菌食物中毒的快速诊断 ,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段 相似文献
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目的 建立改良分子信标,多重实时PCR同时检测沙门菌和志贺菌的快速方法,应用于食源性致病菌的快速诊断。方法 根据GenBank公布的沙门菌侵袭性基因invA和ssaR基因,分别设计一对引物和改良分子信标探针,用同色荧光标记,用于同体系检测沙门菌。志贺菌根据ipaH基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,加入沙门菌检测体系中,建立三重实时PCR一改良分子信标检测体系,应用于同时对沙门菌、志贺菌食物中毒的快速诊断和门诊肠道致病菌的检测。结果 改良分子信标一多重实时PCR反应体系DNA灵敏度为69~93fg/μl。菌液灵敏度为32~64CFU/ml或1~2CFu/PCR反应体系,无交叉反应。该反应体系同时检测134株沙门菌和67株志贺菌,均出现特异的荧光信号,两种细菌检测互不干扰。对细菌性食物中毒样本等共1100份同时进行沙门菌和志贺菌检测,569份沙门菌实时PCR阳性,其中551份沙门菌培养阳性;42份志贺菌实时PCR阳性,其中41份志贺菌培养阳性。从样品处理到检测结果仅需时间2h至1d。结论 改良分子信标-多重实时PCR检测体系快速、灵敏度高,特异性强,可用于沙门菌和志贺菌食物中毒的快速诊断,伤寒、痢疾等肠道传染病的初筛及预防医学门诊的健康人群体检,为食源性疾病的分子流行病学调查提供新的检测手段。 相似文献
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改良分子信标-实时PCR快速检测产单核李斯特菌 总被引:1,自引:0,他引:1
目的:建立改良分子信标-实时PCR检测产单核李斯特菌(LMO)的快速方法,应用于食品中LMO的污染状况调查及食物中毒快速诊断。方法:根据GenBank公布的LMO hlyA基因的保守序列,设计引物和改良分子信标探针,建立改良分子信标-实时PCR检测体系,应用于食品中LMO检测。结果:改良分子信标-实时PCR反应体系DNA灵敏度为110fg,菌液灵敏度为99cfu/ml或4cfu/PCR反应体系,无交叉反应。以此反应体系检测28株LMO,均出现特异的荧光信号。上述方法可将检测时问由原来的至少4d缩短至1d。对228份食品进行LMO检测,8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性,其中6份1310细菌培养阳性。结论:改良分子信标-实时PCR反应体系快速、灵敏度高,特异性强.能提高LMO的检出率和准确性,可应用于LMO食品污染状况调查及食物中毒的快速诊断。 相似文献
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辣根过氧化物酶化学发光测定体系的增敏研究及应用 总被引:1,自引:0,他引:1
辣根过氧化物酶(HRP)在酶联免疫分析中得到十分广泛地应用.以往HRP 多用比色法来测定,近来有人用高灵敏度的化学发光法测定HRP.然而在这方面比较祥细的研究还未见报道.本文为了提高HRP 的化学发光检测灵敏度,对发光剂鲁米诺进行了活化,并详细地研究了增敏剂对碘苯酚增敏的最佳 相似文献
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改良分子信标-实时PCR快速检测霍乱弧菌 总被引:4,自引:0,他引:4
目的:建立改良分子信标-实时PCR检测霍乱弧菌的快速方法,应用于霍乱监测。方法:根据GenBank公布的霍乱弧菌肠毒素基因A亚单位(ctxA)的保守序列,设计一对引物和改良分子信标探针,并进行特异性和灵敏度分析;同时以11种细菌作对照,建立改良分子信标检测霍乱弧菌的实时PCR反应体系,应用于霍乱监测。结果:霍乱弧菌改良分子信标检测体系检测12种细菌,只有霍乱弧菌有荧光信号,与其他细菌无交叉反应,DNA灵敏度为102.4fg/ul,菌液灵敏度为32cfu/ml或3cfu/PCR反应体系。对100份海产品和30份腹泻病人大便标本进行检测,结果都为阴性。检测时间仅需2h。结论:改良分子信标-实时PCR检测体系快速、灵敏度高、特异性强,可用于霍乱的快速诊断,为霍乱的分子流行病学调查提供新的检测手段。 相似文献
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荧光PCR和PFGE在副溶血弧菌食物中毒诊断中的应用研究 总被引:1,自引:0,他引:1
[目的]探讨荧光PCR和脉冲场电泳(PFGE)在副溶血弧菌食物中毒调查中的应用。[方法]对中毒样品进行荧光PCR检测,副溶血弧菌临床分离株基因组DNA经NotI酶切,通过PFGE获得电泳图谱,利用BioNumerics软件对图谱进行聚类分析。[结果]部分样品荧光PCR检测结果呈阳性,同起食物中毒菌株PFGE图谱一致。[结论]荧光PCR可以快速准确的鉴定病原体。PFGE具有很强的菌株同源性分析能力,适用于食物中毒病原菌学鉴定和传染源溯源。荧光PCR和PFGE在食物中毒的快速诊断中可发挥重要作用。 相似文献
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目的评价以不同方法检测食品中污染产单核李斯特菌(LMO)效果,并对其检测方法进行优化。方法同时用国标法、改良国标法、改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法对深圳市2004—2006年食品样品进行LMO分离鉴定并进行比较。结果228份样品中8份增菌液LMO实时荧光PCR阳性,其中6份LMO细菌培养阳性。国标法、改良国标法,改良分子信标-实时荧光PCR法、免疫磁性分离法都能栓出LMO,栓出率分别为2、63%、2.63%、3.50%、2、63%。深圳市食品中LMO的污染率为2.63%(国标法),速食类冻品污染率为12.8%(国标法)。结论荧光PCR法栓出率最高,将检测时间由原来的至少4—5d缩短至1d,可用于食品污染LMO状况调查的初筛扣食物中毒的快速诊断;国标法与改良国标法的栓出率相等,而后者的操作更方便。免疫磁性分离法的栓出率最低。 相似文献
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