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目的探讨慢性乙型肝炎(CHB)患者CD4+CD25+Treg细胞对外周血树突状细胞成熟的影响。方法对2013年6月至2013年12月就诊的15例CHB患者和18例健康对照各抽取外周血20 ml,分离外周血单个核细胞(PBMC),于体外培养获得树突状细胞(DC)及免疫磁珠分选获得CD4+CD25+Treg细胞;分别将CD4+CD25+Treg细胞和CD4+CD25-T细胞与DC共培养后采用流式细胞仪检测DC表面标志CD83、CD80、CD86、HLA-DR的表达。结果健康对照组,加入Treg后,相比于DC对照组及DC与CD4+CD25-T细胞共培养组,DC的CD83、CD80、CD86表达下降,差异有统计学意义。CHB患者组,加入Treg后,相比于DC对照组,DC的CD83、CD80、CD86表达下降,差异均有统计学意义;与DC和CD4+CD25-T细胞共培养组相比,Treg对DC的CD83、CD80表达抑制率较高,差异有统计学意义。CHB患者组的Treg对DC的CD83、CD80、CD86表达抑制率均高于健康对照组,差异均有统计学意义。结论 CHB患者外周血Treg细胞能够抑制DC的成熟,抑制效应强于健康对照。 相似文献
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目的观察以腺相关病毒(AAV)及慢病毒(Lentivirus)为载体含有针对大鼠金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1具有较强抑制作用的小干扰RNA(siRNA)对四氯化碳(CCl4)诱导的大鼠肝纤维化模型的干预作用。方法挑选针对大鼠TIMP-1基因具有较强抑制作用的siRNA序列,在体外构建为短发夹表达载体后,将其包装为重组AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1,同时包装对照病毒AAV/EGFP和Lenti/EGFP。将Wistar大鼠分为对照组、CCl4模型组、AAV/EGFP组、Lenti/EGFP组、AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1组,观察CCl4造模4周后,经H&E及Masson染色评价各组动物的肝纤维化状况,经荧光定量RCR及Western blot方法检测TIMP-1的表达抑制情况。结果 H&E及Masson染色证实,与对照组相比,CCl4模型组、AAV/EGFP组、Lenti/EGFP组肝脏胶原纤维明显增加,纤维化评分多为3-4级,同时肝脏TIMP-1的转录与蛋白表达水平均明显上升;而AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1组肝纤维化程度明显减轻,纤维化评分多为2-3级,伴随肝脏TIMP-1的转录与蛋白表达水平均显著抑制。AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1组在组织学表现及TIMP-1基因的转录与表达水平上无统计学差异。结论 AAV/siRNA-TIMP-1和Lenti/siRNA-TIMP-1均可有效抑制大鼠肝脏TIMP-1基因表达,进而发挥抗肝纤维化作用。 相似文献
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目的研究铁调素(hepcidin)在CCl4诱导的小鼠肝纤维化中的动态变化。方法 C57BL/6小鼠给予CCl4灌胃建立肝纤维化模型,通过HE和Masson染色验证小鼠肝损伤及纤维化程度,并通过普鲁士蓝染色检测在肝纤维化进展过程中肝脏铁沉积情况;通过两步法胶原酶原位灌注与密度梯度离心分离肝脏原代肝细胞、肝星状细胞、Kupffer细胞;通过实时荧光定量PCR检测肝纤维化进展过程中hepcidin和肿瘤坏死因子(TNF)α、白细胞介素(IL)6、IL-1β的表达水平。计量资料两组间比较采用t检验。结果通过对肝组织进行HE和Masson染色发现,肝纤维化程度随造模时间的延长而逐渐加重,停止造模后肝纤维化出现自发性逆转;普鲁士蓝染色提示,随着造模时间的延长,肝脏铁沉积逐渐增加,造模4周时肝脏铁沉积面积较前增加,与正常对照组相比差异有统计学意义(t=4.772,P0.05),但在造模6周时无明显增加,仍高于正常对照,差异有统计学意义(t=10.32,P0.05);停止造模的自发逆转过程中铁沉积又出现下降;通过实时荧光定量PCR检测发现,肝脏中TNFα、IL-1β、IL-6在CCl4诱导的小鼠肝纤维化模型中持续增高,造模6周时达峰值,与正常对照组相比差异有统计学意义(t值分别为4.322、9.707、5.678,P值均0.05);肝脏hepcidin在此纤维化模型中表达早期升高,造模4周时已达峰值,与正常组相比差异有统计学意义(t=2.590,P0.05),但在自发逆转过程中表达降低,峰值早于炎症因子的表达。结论肝脏中铁沉积在CCl4诱导的小鼠肝纤维化进展过程中逐渐增加;hepcidin的表达在肝纤维化进展过程中逐渐升高,与炎症因子的表达相关。 相似文献
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目的探讨人工合成RNA转染人外周血原代T淋巴细胞的有效方法。方法从人外周血分离原代T淋巴细胞,采用Lipofectamine2000、Lipofectamine RNAiMAX、FuGENE6、Hiperfect和EntransterTM-R 5种不同转染试剂介导荧光标记的RNA转染原代T淋巴细胞,通过荧光显微镜观察及流式细胞术检测进行转染效率评价。结果分离的人外周血原代T淋巴细胞的纯度达到87.4%。采用上述5种转染试剂介导荧光标记的RNA转染T淋巴细胞,24 h后转染效率分别为(14.81±1.03)%、(14.33±1.24)%、(2.10±0.16)%、(1.69±0.08)%、(72.24±1.26)%。采用EntransterTM-R转染100及50 nmol/L对照RNA,24 h后转染效率分别为73.7%和56.0%;EntransterTM-R转染100 nmol/L对照RNA后48、72 h荧光标记细胞阳性率分别为62.0%、56.6%。结论转染试剂EntransterTM-R可有效介导人工合成RNA转染人外周血原代T淋巴细胞。 相似文献
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