乙型肝炎病毒I97L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响

目的研究I97L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响。方法构建EGFP-野毒株核壳蛋白、I97L变异核壳蛋白融合表达载体(pEGFP-WT和pEGFP-L97),酶切和测序鉴定;将pEGFP-WT、pEGFP-L97和对照质粒分别转染HepG2细胞,筛选阳性细胞株;荧光显微镜观察阳性克隆细胞荧光蛋白表达,Western-blot检测核壳蛋白表达;以TNF-α、Act-D诱导HepG2细胞株凋亡,0、16、32和48h采用流式细胞术检测细胞凋亡,32h时采用共聚焦检测细胞凋亡比例。结果成功建立了融合表达蛋白表达载体;荧光显微镜显示各细胞克隆有较好的荧光蛋白表达,Western-blot检测各细胞系核壳蛋白表达没有差异;16、32、48h时,pEGFP-WT、pEGFP-L97表达细胞株凋亡率均明显低于pEGFP-C1细胞株(P<0.05);32h和48h时,pEGFP-L97细胞株凋亡率明显高于pEGFP-WT细胞株(P<0.05);32h时激光共聚焦检测结果与流式细胞术检测结果一致。结论乙型肝炎病毒I97L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响与野毒株核壳蛋白不同,与野毒株核壳蛋白相比,I97L变异核壳蛋白对凋亡因素可能更敏感。     

肝炎肝硬化患者肠壁通透性变化与细菌移位的临床研究

目的探讨肝炎肝硬化患者肠壁通透性与细菌及其毒素移位的关系。方法选择乙型肝炎肝硬化患者57例和16例健康志愿者,其中肝硬化患者按Child-Pugh分级分成A级14例,B级15例,C级28例。用高效液相色谱法（HPLC）测定各组尿中乳果糖和甘露醇（L/M）比值,同时采用鲎试验检测血浆内毒素,比较各组以及合并自发性细菌性腹膜炎（SBP）患者两指标改变情况。结果肝硬化各组内毒素水平均较正常对照组显著升高（P〈0.05）,而L/M值仅在肝硬化C级组显著升高（P〈0.01）,合并SBP肝硬化患者较未合并SBP肝硬化患者L/M值显著升高（P〈0.01）。结论严重肝硬化和合并腹腔感染的肝硬化患者肠壁通透性升高,是产生肠源性感染的重要机制。     

乙型肝炎病毒L60V、I97L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响

目的研究L60VI、97L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响。方法构建变异核壳蛋白融合表达载体pEGFP-V60和pEGFP-L97和变异核壳蛋白阳性HepG2细胞株;荧光显微镜和western blotting检测核壳蛋白表达;以TNF-α、Αct-D诱导HepG2细胞株凋亡,0、16、32h和48h采用流式细胞术检测细胞凋亡,32h时采用共聚焦检测细胞凋亡比例。结果成功建立融合蛋白表达载体和融合变异核壳蛋白表达细胞系,各细胞株核壳蛋白表达量基本相同;16、32、48h时,pEGFP-WT、pEGFP-V60和pEGFP-L97表达细胞株凋亡率均明显低于pEGFP-C1细胞株(P<0.05);32h和48h时,pEGFP-V60和pEGFP-L97细胞株凋亡率均明显高于pEGFP-WT细胞株(P<0.05);32h时激光共聚焦检测结果一致。结论乙型肝炎病毒L60VI、97L变异核壳蛋白对诱导HepG2细胞凋亡的影响与野毒株核壳蛋白不同,L60VI、97L变异可能是慢性肝炎活动的原因之一。     

小剂量抗抑郁药治疗难治性结肠易激综合征的疗效观察

目的：探讨小剂量抗抑郁药治疗难治性结肠易激综合征的疗效。方法：采用自身对照研究，选择符合罗马Ⅱ诊断标准的难治性非便秘型肠易激综合征患者46例，给予小剂量氟西汀或帕罗西汀（10mg／d），疗程12周；采用症状严重度与频率指数、汉密尔例顿抑郁量表（HAMD）及汉密顿焦虑量表（HAMA）评分对其疗效进行评价。结果：46名患者均完成了抗抑郁药治疗，疗程结束后患者症状严重度与频率指数较治疗前均显著降低（P〈0．01），HAMD、HAMA评分亦明显下降（P〈0．01）。结论：小剂量抗抑郁药是治疗难治性结肠易激综合征的安全和有效的药物。     

组织胺及地塞米松引胸腺细胞凋亡的研究

近来发现糖皮质激素在体内外均可诱导胸腺细胞凋亡，这就使Ｔ细胞在胸腺中成熟过程的细胞凋亡的调节机理变得复杂。为了发现其它因素对Ｔ细胞在胸腺成熟过程的影响及探讨其可能机理，本实验研究了组织胺与地塞米松诱导胸腺细胞凋亡。取Ｓｐａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ大鼠胸腺细胞，分别与组织胺、地塞米松、雷尼替丁及组织胺＋雷尼替丁体外培养。在０，６，２４及４８小时取培养细胞。用台盼蓝染色计死亡细胞，吖啶橙细胞核染色观察凋亡细胞形态。二苯胺法及ＤＮＡ电泳检测ＤＮＡ断裂片段。结果表明，６小时以前组织胺及地塞米松主要使细胞ＤＮ…     

p16,CDK4及Rb在结肠病变中的表达研究

采用免疫组化法分析６０例结肠癌，结肠息肉及结肠炎标本Ｒｂ，ＣＤＫ４和ｐ１６的蛋白表达。ｐ１６表达随细胞分化程度降低而减少，结肠炎组织ｐ１６表达随细胞分化程度降低而减少，结肠炎组织ｐ１６表达高于癌和息肉组。Ｒｂ在癌组织和息肉组织中表达明显减少。     

克罗恩病与肠结核患者的粪便菌群特征及其鉴别诊断价值

目的：分析克罗恩病（Crohn’s disease,CD）和肠结核（intestinal tuberculosis,ITb）患者肠道菌群的变化,探讨CD和ITb在肠道菌群方面的鉴别特征。方法：选取2007年6月至2009年11月CD患者15例、ITb患者23例,运用可培养细菌菌群分析的方法对每例患者住院后首次粪便进行分析,同期健康志愿者21人的粪便作对照。结果：CD和ITb患者肠道中均以双歧杆菌、拟杆菌、大肠杆菌和金黄色葡萄球菌为最多,CD组乳酸杆菌、双岐杆菌与正常组比较明显减少（P＜0.01）,拟杆菌较正常组明显增多（P＜0.01）;ITb组乳酸杆菌、双岐杆菌、大肠杆菌与正常组比较明显减少（P＜0.01或P＜0.05）,拟杆菌较正常组明显增多（P＜0.01）;ITb组拟杆菌较CD组增多明显（P＜0.05）,CD组大肠杆菌较ITb组增多明显（P＜0.05）;各组肠球菌、金黄色葡萄球菌和酵母菌数量无明显差别（P＞0.05）。结论：CD和ITb患者均存在肠道菌群紊乱,拟杆菌和大肠杆菌数量变化可能对二者具有鉴别诊断价值。     

阿德福韦酯联合香茹多糖治疗慢性乙型肝炎失代偿期肝硬化的短期疗效观察

目的 观察阿德福韦酯(ADV)与香菇多糖(LTN)联合治疗慢性乙型肝炎失代偿期肝硬化的疗效.方法 将56例患者分为ADV单一治疗组和ADV与LTN联合治疗组,疗程6月.结果 经治疗后,联合治疗组肝功能Child-Pugh分级计分、肝纤维化指标、谷丙转氨酶(ALT)均下降,与单一治疗组比较差异有统计学意义(P<0.05);联合治疗组HBeAg转阴率、乙型肝炎病毒(HBV)DNA转阴率和血清HBV DNA滴度下降均优于单一治疗组,差异有统计学意义(P<0.05);联合治疗组HBeAg转换率与单一治疗组比较差异无统计学意义(P>0.05).无明显药物不良反应.结论 香菇多糖可以提高阿德福韦酯治疗慢性乙型肝炎失代偿期肝硬化的疗效,副作用少.安全性好.     

急性肝炎、肝硬化血清—氧化氮和肿瘤坏死因子的研究

为探讨急性肝炎、肝硬化中ＮＯ和ＴＮＦ变化的意义，测定了２５例急性肝炎和３５例肝硬化病人与３０例正常人血清中的ＮＯ和ＴＮＦα水平。结果显示：与正常人比较，急性肝炎患者血清ＮＯ水平无明显增高（Ｐ＞００５）；而ＴＮＦα水平明显增高（Ｐ＜００１），但较肝硬化为低（Ｐ＜００１）。肝硬化患者，ＮＯ和ＴＮＦα均显著增高（Ｐ＜００１）。提示：尽管ＮＯ不参予急性肝炎患者的肝细胞损伤，但ＮＯ和ＴＮＦα却能加剧肝硬化患者的病理生理学紊乱。