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目的:通过建立稳定表达Rab7及其突变体的巨噬细胞系,分析稳定表达细胞系的生物学特性,研究Rab7及其突变体基因过表达后对LPS和Poly I:C刺激的巨噬细胞表达iNOS/NO的影响。方法:将Rab7及其突变体Rab7(T22N)的真核表达载体通过脂质体法转染RAW264.7细胞,G418选择性培养基筛选,建立稳定表达Rab7及Rab7T22N的细胞系。通过RT-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达细胞系。通过观察细胞形态及MTT法分析稳定表达细胞系的生长特性。以LPS和PolyI:C刺激稳定表达细胞系,不同时间后检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与转染空质粒的细胞相比,转染Rab7和Rab7T22N的细胞中Rab7的mRNA和蛋白水平都显著增高。Rab7过表达后引起细胞形态变化并显著抑制了细胞增殖,Rab7T22N过表达后促进细胞增殖。Rab7过表达后,巨噬细胞在LPS和Poly I:C刺激后分泌的iNOS和NO显著降低,而Rab7T22N过表达后iNOS和NO的分泌又恢复。结论:成功建立了稳定表达Rab7及其突变体的细胞系。Rab7过表达后抑制了细胞增殖,抑制了Poly I:C和LPS刺激后巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。 相似文献
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