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目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%~96.7%、88.3%~96.1%、78.1%~94.0%、90.8%~94.6%、85.9%~94.1%和90.9%~93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92~107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型. 相似文献
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肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)是引起严重手足口病的主要病原体,研发安全有效的疫苗是控制手足口病的关键措施.目前我国(香港、澳门和台湾地区除外)已有3家公司完成了EV71全病毒灭活疫苗的Ⅲ期临床试验,结果显示疫苗在婴幼儿中安全性良好,预防EV71引起手足口病的保护率达到90%以上,预防EV71其他相关疾病的保护率达到80%以上.此文对这些EV71疫苗临床试验情况做一综述. 相似文献
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目的 比较3个EV71疫苗株病毒的生物信息学特点,为疫苗的质控和探讨该病毒疫苗的免疫机制提供参考.方法 本研究利用DNAstar MegAlign、DNAMAN Alignment、ANtheProt等生物学软件,比较了我国已进入临床试验的3家EV71全病毒灭活疫苗毒株的基因组及氨基酸序列,并对英衣壳蛋白二级结构及可能存在的抗原表位进行了预测分析.结果 3个疫苗株病毒基因同源性为97%~99%;氨基酸同源性为98%~99%;二级结构一致率在95%以上;均存在35个潜在抗原表位区域.结论 3个疫苗株生物信息学分析结果存在高度的一致性,提示疫苗具有相似的抗原性和免疫原性. 相似文献
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新型戊型肝炎病毒ORF2部分基因的构建表达及表达产物的抗原性分析 总被引:2,自引:0,他引:2
目的对新型戊型肝炎病毒ORF2的3′端部分基因进行重组质粒构建及融合表达,并对表达蛋白进行抗原性分析。方法用PCR方法从含有HEVORF2基因的pGEM-T载体上扩增表达片段,双酶切后与原核表达载体pThioHisA构建重组质粒pThioHisA-T11。诱导表达后进行SDS-PAGE和免疫印迹分析。并用纯化的融合蛋白建立EIA检测方法,对40份抗-HEVIgG国家参比血清进行检测。结果含有pThioHisA-T11重组质粒的菌株表达相对分子质量为40×103的可溶性融合蛋白T11,免疫印迹证明融合蛋白T11能与抗HEVIgG发生特异反应。EIA检测结果显示,阳性参比血清符合率为80%(8/10),阴性参比血清符合率为87%(26/30),总符合率为85%。结论表达了新型HEVORF2羧基端278氨基酸并证明有抗原活性,为今后提高HEV检出率奠定了基础。 相似文献
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目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%~96.7%、88.3%~96.1%、78.1%~94.0%、90.8%~94.6%、85.9%~94.1%和90.9%~93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92~107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型. 相似文献
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肠道病毒71型北京分离株全基因组序列分析 总被引:6,自引:0,他引:6
目的 了解2008年北京地区肠道病毒71型(EV71)分离株的全基因序列特点.方法 收集北京地区手足口病患儿的咽拭子样本12份,对其中1份样品08YM-3,经Vero细胞分离培养,提取病毒RNA.利用RT-PCR和5'、3'RACE扩增EV71全长基因.对PCR产物克隆和测序.利用DNAStar软件包的MegAlign进行核苷酸序列分析,构建系统进化树.结果 分离的EV71病毒株经过扩增后克隆得到3个涵盖EV71全基因组的阳性质粒,测序后拼接为EV71全基因组,命名为BJ08株.BJ08的5'非编码区(UTR)、P1、P2、P3、3'非编码区(UTR)和全基因组的核苷酸与C4亚型的参考序列同源性均最高,分别为95.6%~96.7%、88.3%~96.1%、78.1%~94.0%、90.8%~94.6%、85.9%~94.1%和90.9%~93.9%.BJ08株与其他亚型各区段的核酸同源性均低于90%.在全基因序列与VP1区构建的系统进化树中,BJ08株均与C4亚型在同一分支.BJ08株与C4亚型参考株VP1区的6个亚型相关氨基酸序列一致,VP1抗原性表位(92~107aa)无变异.结论 北京BJ08 EV71病毒分离株为C4业型. 相似文献
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人肠道病毒71型(EV71)是引起手足口病(hand-foot-mouth disease,HFMD)的主要病原体之一,主要引起5岁以下婴幼儿手-足-口部疱疹,一般症状轻,但少数患儿出现无菌性脑膜炎、脑干脑炎等多种重症中枢神经症状,病程进展迅速,病死率 相似文献
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目的采用质谱法对我国2家进入临床试验肠道病毒71型(EV71)灭活疫苗的主要蛋白成分进行分析和比较,为完善EV71疫苗的质控方法提供实验依据。方法应用梯度SDS-PAGE法对2家生产自Vero细胞的EV71疫苗原液(A、B原液)进行蛋白电泳分析,蛋白条带经切胶回收、脱色、胰酶酶切后提取蛋白多肽,采用液质联用仪(LC/MS)对回收的各条带蛋白多肽进行二级质谱序列测定。采用酶联免疫法(ELISA)和二喹啉甲酸法(BCA)分别检测浓缩后的疫苗原液中EV71抗原含量和总蛋白含量,计算比活值。结果将原液浓缩10余倍后经梯度SDS-PAGE电泳分析,抗原A为4条带,抗原B为6条带。采用质谱法检测各条带蛋白并搜库分析发现,各条带均含有EV71多聚蛋白;抗原A条带1、3和抗原B的条带1、3、4、5、6含有猴源蛋白。经PSMs(鉴定多肽次数)计算发现EV71蛋白占总蛋白比例分别为96.7%和95.0%,比活值为865.5、291.8U/μg。结论质谱法可作为疫苗中蛋白检测的辅助方法,并考虑在多批次检测的基础上提出限量要求,为疫苗质量的一致性提供保障。 相似文献
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目的:了解2010年我国生产的静注人免疫球蛋白(IVIG)中抗-EV71中和抗体效价的情况,为治疗EV71引起的手足口病(HFMD)提供特异性治疗药物。方法:采用经典微量细胞病变法,应用近2年分离自中国大陆的2株肠道病毒71型(EV71)病毒株,对我国不同血液制品厂家生产的97批IVIG进行抗-EV71中和效价检测,比较不同批次IVIG的EV71中和效价。结果:19家生产企业生产的97批IVIG的EV71中和效价几何平均滴度(GMTs)为1∶180(1∶170~1∶191)。其中有7家生产企业生产的12批制品的中和效价大于1∶256,以S公司生产的20100406批制品效价最高为1∶543,以A公司生产的含有1∶256以上效价的IVIG批数最多(5批),使该公司生产的IVIG的平均EV71中和抗体效价显著高于其他10家企业(P<0.05)。进一步分析显示,该2个公司分别是通过对献血员的EV71中和效价进行筛选,挑选出高效价血浆和选择人群抗体水平较高地区作为血浆来源地进行投料,而制备出了含有高效价EV71中和抗体的IVIG。结论:本研究显示,生产企业只要对原料血浆进行合理控制,制备出含有高效价EV71中和抗体的... 相似文献