冻存脐带血中内皮祖细胞的分离培养及生物学特性鉴定

目的:建立和开发一种新型的从冻存脐带血中分离培养内皮祖细胞(EPC)的方法,探讨其生物学特性,提高冻存脐带血分离获得EPC的成功率。方法:自液氮罐中收集公共库中2000年至2001年保存的12例冻存脐带血,37℃水浴锅中快速复苏后,磷酸缓冲盐溶液(PBS缓冲液)洗涤,获得总有核细胞(TNCs),将TNCs接种至培养皿中诱导扩增EPC。使用流式细胞术和免疫荧光方法鉴定EPC并确定纯度。采用下列方法体外鉴定内皮祖细胞的功能:荧光显微镜观察细胞特异性摄取Dil-Ac-LDL和FITC-UEA-I的功能、在基质胶中形成毛细管样结构的情况,ELISA法检测释放VEGF因子的功能。结果:培养3周后,出现1-5个鹅卵石铺路石样内皮祖细胞集落。体外培养第1-3代EPC,其表面CD31、CD34、CD144和VEGFR (CD309)标记阳性率分别为(92. 91±5. 20)%、(30. 0±23. 27)%、(88. 55±3. 83)%和(67. 21±12. 12)%。EPC细胞具有特异性内吞Dil-Ac-LDL和FITCUEA-I、形成毛细管结构,释放低浓度VEGF因子等功能。结论:采用本方法从冻存脐带血中分离EPC的稳定性与重复性高,从冻存的脐带血中分离EPC的成功率可提高至85%。该方法为临床应用丰富的内皮祖细胞奠定了基础。     

狂犬病疫苗接种引起瑞氏综合征1例报告

患儿女,3岁,因发热9天,嗜睡、烦躁5天入院。13天前被老鼠咬伤,于咬伤次日、第5天、第9天各注射狂犬疫苗1针。9天前患儿突然发热达40℃,无任何感染及服药史。曾先后抽搐3次,非喷射性呕吐1次。5天前出现嗜睡、烦躁和大小便失禁。在外院连用青霉素、氨苄青霉素9天,效果不佳。查体:嗜睡状,双手指甲床皮肤移行处有膜样脱皮,双侧腹股沟处有片状淤斑,双耳后及腹股沟触及数个花生米大小淋巴结,质软,压眶有反应,瞳孔等大等圆,对光反射存在。颈软,肺心     

小儿支气管哮喘细胞免疫的观察

1989～1990年,我们对门诊及住院的哮喘病儿24例和健康儿52例测定外周血T淋巴细胞亚群,还对51例哮喘病儿检测了E-RFC     

反复呼吸道感染患儿的T细胞亚群测定分析

为了探讨反复呼吸道感染患儿与T细胞亚群的关系,我们对60例反复呼吸道感染患儿(下称患儿组)的T细胞亚群总T细胞(CD_3)、T辅助细胞/T诱导细胞(CD_4)、T抑制细胞/T杀伤细胞(CD_3)进行了检测,并以40例同龄健康儿童作对照(下称对     

无动物源成分纯细胞因子从深低温冻存脐血中高效扩增NK细胞

背景：从深低温冻存脐血中获得大量高纯度无滋养层细胞、无动物源成分的NK细胞,以便更好地开展NK细胞杀伤肿瘤的实验研究,此次研究通过使用NK扩增培养试剂盒和血清替代物,以获得安全、高效的体外扩增培养NK细胞的方法。目的：建立一种从冷冻脐血中采用纯细胞因子扩增NK细胞的技术体系并证明其体外杀瘤能力。方法：解冻液氮存储的冻存脐血,优化复苏体系,采用Ficoll密度梯度离心的方法收集脐血单个核细胞,接种于预先铺板的T175培养瓶中,采用细胞因子试剂盒+血清替代物法培养21 d后收集细胞并计数,应用流式细胞术检测细胞中CD3^-CD56⁺的比例,并将所得数据与K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法进行对比分析。同时以髓系白血病细胞K562为靶细胞,采用CCK-8试剂盒检测不同效靶比NK细胞杀伤K562细胞的作用。最后进行了12 h内的模拟储存运输实验,采用流式检测CD3-CD56⁺的比例变化,并使用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡率。结果与结论：(1)采用K562滋养层细胞+胎牛血清的培养方法扩增培养14 d,细胞扩增(5...