先天性巨结肠中miR-939靶向调控SOX4表达抑制肠神经嵴前体细胞功能表型的实验研究

目的 检测MicroRNA-939(miR-939)和性别决定区相关HMG族盒蛋白4(Sry-related HMG box 4,SOX4)在先天性巨结肠(Hirschsprung's disease,HSCR)中的表达水平,评估miR-939在SOX4调控肠神经嵴前体细胞(enteric neural crest c...     

先天性巨结肠患儿切除肠管肠黏膜ENS干细胞的初步鉴定

目的 我们已经证实p75NTR阳性细胞在HD(Hirschsprung's disease)患儿切除肠管的移形段和扩张段肌间丛及黏膜下丛存在,本研究拟对肠黏膜层进行研究.另外,为了明确Metzger等在肠黏膜活检标本中分离体外培养出的肠黏膜ENS干细胞是胚胎残留还是其他肠黏膜干细胞在诱导分化过程中转化而来,本研究选用了不同时期肠神经干细胞标记物(早期:SOX10和Nestin中晚期:TUJ1;晚期:GFAP),对病理已证实的婴儿组(年龄≤1岁)和幼儿组(年龄＞1岁)HD患儿的切除肠管标本连续切片后进行研究.同时对黏膜层、黏膜下丛及肌间丛的SOX10、Nestin、TUJ1及GFAP强阳性表达率进行综合分析,明确GNCSCs在三层间的存在差异及其与年龄间的关系,以指导临床取材.方法 收集临床诊断及病理确诊的HD患儿手术切除标本15例,分为婴儿组(8例)及幼儿组(7例),长段型(2例)及常见型(13例).沿肠管纵轴各取材一处并将其分为3组:第一组为狭窄段肠管,第二组为移行段肠管,第三组为扩张段肠管.对照组选用切除扩张段肠管的近端肠管,阴性对照应用TBS缓冲液作为一抗.应用S-P法分析四个指标在各标本、各部位的表达情况.结果 SOX10、Nestin和TUJ1在移行段和扩张段黏膜层均有强阳性表达,且在黏膜固有层呈散在分布,但主要位于近黏膜肌层,GFAP在移行段和扩张段黏膜层未见阳性表达.肌间丛SOX10、Nestin、TUJ1和GFAP免疫阳性细胞的强阳性表达率高于黏膜下丛,黏膜下丛强阳性表达率高于黏膜层.婴儿组患儿在扩张段肌间丛SOX10和Nestin强阳性表达率较幼儿组高.婴儿组扩张段黏膜层SOX10和Nestin强阳性表达率较幼儿组高.结论 在HD患儿有神经节段肠管肠黏膜可能存在ENS干细胞或前体细胞,且在肠黏膜固有层呈散在分布,但主要定位于近黏膜肌层.SOX10、Nestin、TUJ1和GFAP在HD患儿肌间丛表达水平较黏膜下丛高,而黏膜下丛表达水平较黏膜层高.婴儿组扩张段黏膜层SOX10和Nestin表达水平可能较幼儿组高,随年龄增长可能逐渐降低.初步判定存在于肠黏膜的ENS干细胞或前体细胞可能来源于肠神经嵴细胞.

Abstract：

Objective To identify the enteric nervous system (ENS) stem cells in intestinal mucosa of the patients with Hirschsprung's disease (HD). Methods Fifteen patients were pathologically diagnosed with Hirschsprung's disease. They underwent surgery to remove the aganglionic intestines.The removed intestines were collected for this study. Of the 15 patients, 8 were infants (age≤1 year)and 7 were toddlers (age＞ 1year). Two were long-segment HD, and 13 were short-segment HD.Three pieces of tissues were collected from the stenotic segment, transitional zone and dilated segment of the removed intestines. The intestines proximate to the dilated segment were selected as controls.Immunohistochemical staining of stem cell markers including SOX10, Nestin, TuJ1 and GFAP was performed to indentify the ENS stem cells in intestinal mucosa. The TBS buffer was used as the negative control of the primary antibody. The S-P method was applied to analyze the expressions of the 4stem cell markers through the intestine. Results The expressions of SOX10, Nestin, and TUJ1 in the mucosa of the transitional zone and dilated segment were strong. And scattered SOX10, Nestin, and TUJ1 positive cells were observed in the lamina propria. But most of the SOX10, Nestin, and TUJ1 positive cells located in mucosa closed to the muscularis mucosa. The expression of GFAP in the mucosa of the transitional zone and dilated segment was negative. The expressions of SOX10, Nestin,TUJ1 and GFAP in myenteric plexus were stronger than those of submucosal plexus (SOX10 expression, infant 50% vs 31.3%, toddler 35. 7% vs 21.4%; Nestin expression, infant 43. 8% vs 37. 5%,toddler 28. 6% vs 14. 2%; TUJ1 expression, infant 37. 5% vs 18. 5%; toddler 28. 6% vs 28. 6%;GFAP expression 25.0 % vs 18. 5 % ; toddler 57. 1% vs 35. 7 % ; P ＜ 0. 05 ). The expressions of SOX10, Nestin and TUJ1 were stronger in submucosal plexus than those in mucosa (SOX10 expression, infant 31.3% vs 25. 0%, toddler 21.4% vs 7. 1% ; Nestin expression, infant 25. 0% vs 18. 8%,toddler 14. 3% vs 14. 3%; TUJ1 expression, infant 18. 5% vs 12. 5 %, toddler 28. 6% vs 7. 1%; P＜0. 05). The expressions of SOX10 and Nestin in myenteric plexus of the dilated segment in infants were stronger than thoset in toddler (SOX10, 75. 0% vs 42. 8% ; Nestin, 62. 5% vs 42. 8%, P＜0. 05). The expressions SOX10 and Nestin in mucosa of the the dilated segment in infants were stronger than those in toddler (SOX10, 37. 5% vs 14. 3%; Nestin, 25. 0% vs 14. 3%, P＜0. 05). Conclusions The ENS stem cells may exist in the mucosa of the ganglionic intestines of HD patients, whichare scattered and mostly located in the mucosa near muscularis mucosa. In HD patients, the expressions of SOX10, Nestin, TUJ1 and GFAP in myenteric plexus are higher than those in submucosal plexus. However, the expressions of SOX10, Nestin, TUJ1 and GFAP in the submucosal plexus are higher than those in the mucous layer. The expressions of SOX10 and Nestin in mucosa of the dilated segment in infants are higher than those in toddlers, and it decreases with age. These observations suggest the ENS stem cells or precursor cells in the gut mucosa may be derived from the gut neural crest cells.     

先天性十二指肠膜状闭锁及狭窄

收治十二指肠膜状闭锁和狭窄11例,其中膜状狭窄9例(含风袋形隔膜2例,双隔膜1例),闭锁2例,伴发畸形5例,术后死亡1例,治愈10例。阐述了十二指肠闭锁及狭窄的X线特征,对产前B超及染色体检查对十二指肠闭锁的意义,手术方法的选择,切除隔膜避免损伤胆总管开口的方法,探查其余肠管的必要性及方法进行了讨论。     

miR-638用于治疗乙肝相关肝癌可能性的实验研究

目的:探讨miR-638用于治疗乙肝相关肝癌的可能性。方法:qRT-PCR方法检测miR-638在乙肝、肝癌患者及正常人群血清中的表达差异,并分析血清miR-638的表达水平与其它血清指标的相关性。上调乙肝病毒(HBV)稳定复制的HepG2.2.15肝癌细胞株中miR-638的表达水平, MTT法和细胞克隆实验检测miR-638过表达对HepG2.2.15细胞增殖的影响;ELISA和qRT-PCR方法检测细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg和HBV DNA的表达水平。结果:miR-638在乙肝及肝癌患者血清中的表达水平均显著低于正常人群（P＜0.000 1）;在乙肝及肝癌患者血清中miR-638的表达水平,总体间与HBV DNA、谷草转氨酶（AST）及谷丙转氨酶（ALT）水平呈显著负相关（P值分别为0.026、<0.001和0.003）。MTT分析及集落形成实验显示miR-638能够显著抑制HepG2.2.15细胞的增殖及集落形成能力。miR-638表达上调后,HBsAg（P＜0.05）、HBeAg（P＜0.05）和HBV DNA水平（P＜0.001）较miR-ctrl组均显著下降。结论:miR-638在HBV复制过程中发挥作用,miR-638过表达可同时抑制HepG2.2.15细胞的增殖能力和HBV的复制。     

先天性十二指肠闭锁及狭窄19例诊断治疗分析

十二指肠闭锁及狭窄是先天性十二指肠梗阻最主要的病因 ,1978年 4月至 1999年 10月我院共收治新生儿及婴幼儿患者 19例 ,均经手术证实 ,现报告如下。一般资料 :19例患儿均系足月产 ,女 6例 ,男 13例 ,出生体重 <2 0 0 0 ｇ 8例 ,～ 2 5 0 0 ｇ 9例 ,2例出生体重不详。其中 12例     

小儿腹腔镜下肝切除术4例

目的报告4例小儿腹腔镜肝切除术的临床经验。方法采用4—5mm套管,腹压10—12mmHg。解剖性肝左叶切除在肝外游离结扎肝左动脉和门静脉左支。超声刀离断浅部肝实质,深部用CUSA解剖出管道、Ligasure凝切,线型Endovascular离断肝静脉。非规则性肝切除不阻断或解剖肝门。切除标本套袋后经扩大的脐部或下腹部Trocar切口取出。结果男女各2例,年龄3个月至4岁,手术时间100～340min,出血量20一200mL。无术中术后并发症。肝肉芽肿患儿随访6年未发现其他部位肉芽肿,肝血管瘤随访5个月无症状。2例肝母细胞瘤患儿中,1例正在化疗中,另1例采取观察随访。结论选择合适病例,小儿腹腔镜肝切除术安全可行。     

let-7b通过靶向调控SALL4影响肝母细胞瘤细胞增殖能力的机制研究

目的初步研究let-7b和SALL4在肝母细胞瘤(hepatoblastoma,HB)细胞恶性行为中的作用及二者间的相互作用机制。方法采用qRT-PCR检测let-7b在正常肝细胞(HL-7702)与HB细胞系、HB组织及癌旁组织中的表达水平,采用免疫组化法检测SALL4在HB组织及癌旁组织中的表达水平,并分析HB组织中let-7b与SALL4表达水平的相关性。通过MTT、细胞周期和凋亡等实验方法上调或抑制HB细胞中let-7b的表达水平,观察let-7b对HB细胞生物学功能的影响;通过生物信息学预测软件、双荧光素酶报告系统、qRT-PCR和western blot等实验,从体外水平验证let-7b与SALL4的靶向关系。采用Kaplan-Meier生存曲线分析不同let-7b与SALL4表达水平的肝母细胞瘤患者总体生存率的差异。结果与癌旁组织相比,let-7b在HB组织中表达量显著降低,而SALL4表达量显著升高;let-7b在肝母细胞瘤组织中的表达水平与PRETEXT分期存在相关性(P=0.002),且HB组织标本中let-7b与SALL4的表达水平存在负相关性(r=-0.716,P<0.001)。let-7b低表达组HB患者的总体生存率显著低于let-7b高表达组(P=0.017)。SALL4阳性组HB患者的总体生存率显著低于SALL4阴性和弱阳性组(P=0.034)。MTT、细胞周期和凋亡实验结果显示,let-7b可抑制肝癌Hep G2细胞增殖,促进细胞的凋亡。而抑制内源性的let-7b可促进Hep G2细胞增殖,抑制细胞的凋亡。生物信息学软件预测及构建双荧光报告载体荧光检测等实验结果显示,let-7b与SALL4存在一定的靶向关系。结论let-7b和SALL4可作为肝母细胞瘤不良预后的潜在标记物;let-7b作为抑癌基因可以靶向调控SALL4的表达,抑制HB细胞的增殖。     

手术治疗先天性胆总管囊肿18例

0 引言 胆道重建术是目前治疗先天性胆总管囊肿的最主要方法之一,其治疗效果得到国内外一致公认,但术后的胆道逆行感染仍是研究的重点. 我院于1994/2002年以空肠间置.胆道重建为基础,在十二指肠内开口处制作内括约肌,以期达到预防逆行胆道感染的目的,通过对11例胆总管囊肿患儿的临床应用取得良好疗效.     

小儿肝母细胞瘤术前化疗的组织学改变

目的观察肝母细胞瘤术前化疗后的组织学变化。方法采用软X线拍片、瘤组织浸泡银染方法，比较5例肝母细胞瘤化疗前后的组织学变化。结果化疗后瘤组织发生明显的坏死、纤维化，面积达80％以上。栓塞剂在瘤组织中的分布与瘤组织坏死纤维化的分布及程度无关。结论进展期肝母细胞瘤术前化疗有效。较短时间的肝动脉栓塞化疗可以达到与静脉化疗相近的组织学上的抗肿瘤效果。     

小儿恶性血管瘤15例诊治报告

报道小儿恶性血管瘤15例,其中血管内皮瘤9例,血管外皮瘤5例,血管肉瘤1例,均经手术及病理证实。总结临床经验,结合文献对其发病,诊断要点及治疗提出见解。