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1.
目的:研究蛇毒Ⅱ类磷脂酶A2(PLA2)中D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化及其功能分化决定位点的鉴定。方法:运用序列比较分析,进化树构建和DIVERGE v1.04软件计算研究D49 PLA2和K49 PLA2的功能分化情况及其分化位点。结果:序列比较分析,进化树构建和DIVERGE v1.04软件计算结果表明蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2的确发生了功能分化,对于K49 PLA2来说,1S,7K,11Q,E12,R34,T56,N88,L92,E108,K116,K128可能为功能分化决定位点。对于D49 PLA2,L2,G33,G35,F46和Y118可能为功能分化决定位点。结论:我们首次通过序列比较分析,进化树构建和DIVERGE v1.04软件计算鉴定出蛇毒Ⅱ类PLA2中D49 PLA2和K49 PLA2可能的功能分化位点,为今后通过基因重组和定点突变方法研究蛇毒Ⅱ类PLA2结构功能关系提供了线索。 相似文献
2.
目的 检测特应性皮炎(atopic dermatitis, AD)患者外周血调节性T细胞亚群及相应细胞因子的表达,探讨其与内源性AD和外源性AD诊断及临床分型的意义。方法 选择36例AD患者(内源性AD组、外源性AD组各18例)和15例健康人(对照组),采用流式细胞仪检测各组患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞、CD8+ Foxp3+Treg细胞和IL-17+Foxp3+Treg细胞及其细胞因子IL-10的表达情况。结果 与对照组相比较,内源性AD组和外源性AD组患者外周血CD4+CD25+Foxp3+Treg细胞、CD8+Foxp3+Treg细胞、IL-10+Foxp3+Treg细胞百分比均明显降低(P<0.05),内源性AD组IL-17+ 相似文献
3.
目的:变态反应性疾病包括支气管哮喘、变应性鼻炎、变应性皮炎、食物及药物过敏等,发病率约占全球人口的40%,对人类危害极大。目前已经证实此类疾病的发生是一种炎症过程,而肥大细胞被认为在这种炎症过程中起着重要的作用,被称为初级效应细胞(primary effector cells),是连接变态反应诱导阶段和效应阶段的纽带。但是,迄今为止微量过敏原引起机体大量肥大细胞激活的机制尚不清楚,因而很有必要给以深入研究。方法:①肥大细胞激活实验:以类胰蛋白酶、组胺、蛋白酶激活受体激动剂等激活酶悬浮的人大肠肥大细胞,并分别用酶联免疫吸附试验和特异性玻璃纤维结合荧光检测技术测量类胰蛋白酶和组胺的分泌量②小白鼠腹腔炎症性细胞聚集实验:注射后收集腹腔灌洗液并分类计数炎症性细胞③应用激光共聚焦显微镜结合双色荧光标记鉴定肥大细胞亚型。 相似文献
4.
蛋白酶激活受体2激动剂对肥大细胞释放组胺的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
目的 研究PAR-2激动剂(tc-LIGRLO-NH2与SLIGKV-NH2)和胰蛋白酶对结肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 结肠组织经酶消化后,细胞成份用全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2均可诱导人结肠肥大细胞剂量依赖性组胺释放。浓度为100μmol/mL时,tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2可分别引起比基础分泌量多出2.5倍和2倍的组胺释放,而反PAR-2激动剂tc-OLRGIL-NH2和VKGILS-NH2在实验浓度高至300μmol/mL时仍对组胺释放无影响。胰蛋白酶在1.0~100μg/mL间可引起剂量相关性组胺释放,胰蛋白酶抑制剂可抑制之。PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2的作用从加样后1min开始,3min后完成。细胞经过百日咳毒素和代谢抑制剂预先处理后,几乎失去了对tc-LIGRLO-NH2、SLIGKV-NH2和胰蛋白酶刺激的反应性。结论 PAR-2激动剂和胰蛋白酶是高效的组胺释放刺激剂,其在人结肠炎症性疾病中起一定的作用。 相似文献
5.
目的探讨p53、bax 抑癌基因在肺非小细胞癌组织及癌旁组织中的差异表达.方法以凝胶上rRNA条带的亮度为依据对后续分析用的起始RNA浓度进行调整;以组成型表达的β-actin基因为外对照,对两类组织来源的起始RNA量进行监测;基因克隆及序列分析来验证所用引物的可靠性;随后采用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)的方法对各基因在两类组织中的表达谱进行对比分析,并以Northern杂交加以验证.结果在两类组织来源的起始RNA量基本一致的前提下,p53、bax 2个抑癌基因在成对组织中的表达谱存在明显差异.bax在肺癌组织及癌旁组织中均有表达;p53基因在肺癌组织中的表达量较高,且p53的带型与在癌旁组织中表现也明显不同.结论肺癌组织及癌旁组织中存在bax促凋亡基因的转录;p53基因在肺癌组织出现异常转录. 相似文献
6.
7.
一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化方法 总被引:9,自引:0,他引:9
目的:建立一种高效、快速的大肠杆菌感受态细胞制备及质粒转化的方法。方法:质粒DNA加入感受态细胞,经短暂冰浴和热休克后,直接涂布预热至37℃的平板。以大肠杆菌DH5α为受体菌,研究CaCl2溶液浓度、感受态细胞的存放时间、转化时间及转化后的培养时间等对质粒转化效率的影响。结果:以100mmol/L CaCl2溶液制备感受态细胞,冰浴转化5min,经42℃热休克作用908后直接涂平板筛选转化子,获得与常规转化方法相当的转化效率。CaCl2溶液浓度和感受态细胞的存放时间对转化效率有明显的影响,而转化时间和转化后的振荡培养时间对转化效率的影响不明显。结论:成功地建立了一种高效、快速的感受态细胞制备及质粒转化的方法。 相似文献
8.
9.
IL-12刺激肥大细胞IL-13分泌与ERK信号转导通路的关系 总被引:1,自引:0,他引:1
目的: 检测IL-12对肥大细胞介质分泌的影响并探讨其可能的信号转导通路。方法:小鼠肥大细胞P815培养后,用不同浓度IL-12激发后收集细胞和上清,上清用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测组胺、IL-6和IL-13的分泌量,P815细胞用细胞激发信号ELISA(CASE)方法检测信号转导通路蛋白ERK和P38磷酸化情况。 结果: 不同浓度IL-12(0、1.0、10.0
和100.0 μg•L-1)激发后,P815细胞IL-13分泌量较基础分泌量均增加,并且随IL-12浓度增加而增加;而P815细胞IL-6和组胺释放量与基础分泌量比较差异均无显著性。ERK信号转导通路抑制剂PD98059、U0126预处理的经不同浓度IL-12激发P815细胞后,细胞内ERK磷酸化百分比较未加抑制剂组均显著降低(P<0.05);且P815细胞IL-13分泌量较未加抑制剂组亦显著降低(P<0.05)。P38信号转导通路抑制剂SB203580预处理的不同浓度IL-12激发P815细胞后,细胞内P38磷酸化百分比与未加抑制剂组比较差异均无显著性;且P815细胞IL-13分泌量与未加抑制剂组比较差异均无显著性。结论:IL-12刺激肥大细胞P815分泌IL-13可能是通过激活ERK信号转导通路实现的。 相似文献
10.
目的:探讨P物质(substance P,SP)对过敏小鼠腹腔灌洗液中巨噬细胞表面蛋白酶激活受体(protease activated receptors,PARs)表达的影响?方法:通过腹腔注射鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)建立过敏小鼠模型,再根据腹腔注射的SP的浓度将小鼠分为生理盐水组?0.2?2.0?20.0和200.0 μg/ml SP组,每组6只,同时每组均设有未致敏的对照组?最后一次激发3 h后处死小鼠,取腹腔灌洗液细胞经固定,用流式细胞仪检测巨噬细胞表面PARs的表达?结果:过敏组小鼠腹腔灌洗液中巨噬细胞表面PARs的表达水平较正常组明显降低(P < 0.01),而不同浓度的SP组之间无统计学差异(P > 0.05)?结论:SP对小鼠腹腔巨噬细胞PARs表达无影响,但过敏原可影响巨噬细胞表面PARs的表达? 相似文献