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相似文献
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1.
目的 探讨miR-218在高浓度葡萄糖诱导大鼠视网膜微血管内皮细胞(rat retinal microvascular endothelial cells,rRMECs)凋亡中的作用及其相关机制。方法 将rRMECs分为对照组、高糖组、miR-218阴性抑制组和miR-218抑制组。对照组细胞用DMEM低糖培养基培养;高糖组在培养基中添加D-葡萄糖,终浓度为25 mmol·L-1;miR-218抑制组及miR-218阴性抑制组是在高糖组培养基的基础上,按照说明书操作,利用Lipo2000将miR-218抑制剂和阴性抑制剂转染rRMECs,共同孵育24 h。提取各组rRMECs总RNA并分析miR-218含量,检测细胞活力,计算细胞凋亡率以及采用Western blot检测各组rRMECs Caspase-3蛋白表达,利用SPSS 19.0统计学软件对实验数据进行单因素方差分析并进行两两比较。结果 对照组、高糖组、miR-218阴性抑制组、miR-218抑制组miR-218相对表达量分别为1.00±0.08、1.48±0.12、1.46±0.14、1.03±0.08;细胞活力分别为100.0%、(72.3±7.5)%、(70.7±9.3)%及(98.4±9.4)%;与对照组相比,高糖组和miR-218阴性抑制组的miR-218相对表达量明显升高(均为P<0.05),miR-218抑制组的miR-218相对表达量较对照组变化不显著(P>0.05);高糖组和miR-218阴性抑制组rRMECs细胞活力与对照组相比均明显降低(均为P<0.05),miR-218抑制组与对照组相比细胞活力未见明显变化(P>0.05)。对照组、高糖组、miR-218阴性抑制组、miR-218抑制组rRMECs细胞凋亡率分别为(2.3±0.0)%、(20.3±3.1)%、(23.1±3.2)%及(2.9±0.1)%;高糖组和miR-218阴性抑制组的细胞凋亡率均显著高于对照组(均为P<0.05);而miR-218抑制组与对照组相比,细胞凋亡率变化不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。对照组rRMECs Caspase-3蛋白相对表达量为(18.6±2.3)%、高糖组为(43.3±4.5)%、miR-218阴性抑制组为(41.6±3.9)%、miR-218抑制组为(20.0±2.8)%。与对照组相比,高糖组和miR-218阴性抑制组的Caspase-3蛋白相对表达量明显增加(均为P<0.05),miR-218抑制组Caspase-3蛋白相对表达量变化不明显(P>0.05)。结论 高浓度葡萄糖能促使rRMECs miR-218相对表达量增高;当miR-218相对表达量增高时,细胞凋亡明显,细胞活力显著下降,细胞内Caspase-3蛋白的相对表达量明显上调。  相似文献   

2.
目的 探讨脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)对高糖环境下视网膜Müller细胞的保护作用。方法 该研究实验分为3组,对照组、高糖组(对照组中添加25 mmol·L-1葡萄糖)、BDNF组(高糖组添加100 mg·L-1 BDNF),实验干预24 h后,在倒置显微镜下观察各组细胞形态和生长状态,并进行各项指标检测。用倒置荧光显微镜观察各组视网膜Müller细胞的生长状态并检测细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光强度;流式细胞仪检测视网膜Müller细胞凋亡率,Western blot检测Bax、Bcl-2蛋白表达情况。结果 与对照组相比,高糖组Müller细胞生长状态差,细胞突起减少,细胞失去原有形态,由原来的不规则形变为类圆形,折光性增强;而BDNF组与对照组相比无明显差异;与高糖组相比,BDNF组细胞生长状态明显改善,细胞突起增多,细胞折光性减弱。与对照组相比,高糖组Müller细胞内ROS含量显著升高(P<0.01),BDNF组细胞内ROS含量亦升高(P<0.01);与高糖组相比,BDNF组ROS含量显著减少(P<0.01)。与对照组相比,高糖组细胞凋亡率显著升高(P<0.01),BDNF组凋亡率仍高于对照组(P<0.01);与高糖组相比,BDNF组凋亡率明显减少(P<0.01)。与对照组相比,高糖组Bcl-2蛋白相对表达量显著减少,Bax蛋白相对表达量明显升高,Bcl-2/Bax二者比值降低(P<0.01),BDNF组与对照组相比相对表达量差异无统计学意义(P>0.05);与高糖组相比,BDNF组Bcl-2蛋白相对表达量明显升高,Bax蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值升高(P<0.01)。结论 高糖环境能诱导视网膜Müller细胞凋亡,而给予外源性BDNF能够显著抑制高糖环境诱导的视网膜Müller细胞凋亡,对视网膜Müller细胞起到保护作用。  相似文献   

3.
目的 探讨黄芩苷对高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激的影响,并探讨其可能机制。方法 以人晶状体上皮细胞系HLE-B3为研究对象,用不同浓度黄芩苷处理后,采用CCK-8法检测细胞活力以筛选黄芩苷最佳作用浓度用于后续实验。将细胞随机分为正常组、高糖组、黄芩苷组,采用CCK-8法检测各组细胞活力,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,RT-PCR检测Kelch样ECH相关蛋白1 (Keap1)、NQO1、核因子红细胞2相关因子2 (Nrf2)、HO-1、Bax、Bcl-2的mRNA相对表达量,Western blot检测Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1、Bax、Bcl-2的蛋白表达水平,酶标法检测各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。结果 CCK-8法检测结果显示,5 μmol·L-1黄芩苷可以显著增强HLE-B3细胞活力,随着黄芩苷浓度升高,细胞活力下降,故以5 μmol·L-1黄芩苷进行后续实验。与正常组HLE-B3细胞活力[(100.00±0.00)%]相比,高糖组细胞活力[(73.52±1.71)%]显著降低(P<0.01);与高糖组相比,黄芩苷组细胞活力[(92.36±3.61)%]显著升高(P<0.01)。流式细胞术检测结果显示,与正常组HLE-B3细胞凋亡率[(7.93±0.22)%]相比,高糖组细胞凋亡率[(57.12±2.63)%]显著升高(P<0.01);与高糖组相比,黄芩苷组细胞凋亡率[(42.09±1.04)%]显著降低(P<0.01)。RT-PCR检测结果显示,与正常组相比,高糖组HLE-B3细胞中Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2 mRNA相对表达量均显著降低,Keap1、Bax mRNA相对表达量均显著升高(均为P<0.05);与高糖组相比,黄芩苷组HLE-B3细胞中Nrf2、NQO1、HO-1、Bcl-2 mRNA相对表达量均显著升高,Keap1、Bax mRNA相对表达量均显著降低(均为P<0.05)。Western blot检测结果显示,高糖组HLE-B3细胞中Keap1、Bax蛋白相对表达量均较正常组显著升高,黄芩苷组Keap1、Bax蛋白相对表达量均较高糖组显著降低(均为P<0.05);高糖组HLE-B3细胞中Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白相对表达量均较正常组显著降低,而黄芩苷组Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白相对表达量均较高糖组显著升高(均为P<0.05)。酶标法检测结果显示,高糖组HLE-B3细胞中SOD活力、GSH-Px含量均较正常组降低,MDA含量较正常组升高(均为P<0.05);黄芩苷组HLE-B3细胞中SOD活力、GSH-Px含量均较高糖组明显升高,MDA含量较高糖组降低(均为P<0.05)。结论 低浓度黄芩苷可抑制高糖诱导的人晶状体上皮细胞凋亡和氧化应激,其作用机制可能与Keap1-Nrf2-ARE信号通路有关。  相似文献   

4.
目的探讨Toll样受体9(TLR9)对高糖下大鼠视网膜神经节细胞(RGC)-5凋亡的影响及小干扰RNA-TLR9(si-TLR9)对凋亡的抑制作用。方法将体外培养的RGC-5细胞分为正常对照组、高糖组、高糖+阴性对照组和高糖+si-TLR9组,分别行正常培养、高糖培养、高糖下空质粒转染和高糖下siRNA-TLR9质粒转染细胞。采用实时PCR法检测各组细胞中TLR9 mRNA表达;采用MTT法检测各组细胞存活率;采用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率;采用caspase-3活性检测试剂盒检测各组细胞中含半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶3(caspase-3)活性;采用Western blot法检测TLR9及B淋巴细胞瘤-2(bcl-2)、bcl-2相关X蛋白(bax)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)和磷酸化(p)-p38MAPK蛋白的表达。结果与高糖+阴性对照组比较,高糖+si-TLR9组细胞中TLR9 mRNA和蛋白的相对表达量明显下降,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高糖组和高糖+阴性对照组细胞存活率分别为(78.36±5.13)%和(75.12±4.25)%,较正常对照组的(95.48±7.25)%明显降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);高糖+si-TLR9组细胞存活率为(86.58±5.32)%,明显高于高糖+阴性对照组的(75.12±4.25)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高糖组和高糖+阴性对照组细胞凋亡率分别为(13.23±1.22)%和(12.52±1.38)%,较正常对照组的(2.26±0.15)%明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);高糖+si-TLR9组细胞凋亡率为(7.15±0.24)%,明显低于高糖+阴性对照组的(12.52±1.38)%,差异有统计学意义(P<0.05)。与高糖+阴性对照组比较,高糖+si-TLR9组细胞中bax蛋白表达量明显下降,bcl-2蛋白相对表达量明显增加,差异均有统计学意义(均P<0.05)。高糖+si-TLR9组细胞中caspase-3活性明显低于高糖+阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。与高糖+阴性对照组比较,高糖+si-TLR9组细胞中p-p38MAPK蛋白相对表达量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。结论下调TLR9表达可抑制高糖诱导的RGC-5细胞凋亡,其作用机制可能与抑制p38MAPK信号通路活化有关。  相似文献   

5.
目的 探讨MicroRNA-21(miR-21)对视网膜母细胞瘤(RB)细胞增殖的影响及作用机制。方法 采用Real-time PCR技术检测miR-21在正常视网膜组织和确诊RB组织中的表达情况;然后在转染的基础上运用MTT检查RB细胞存活率、流式细胞仪检测细胞凋亡率。Western blot法检测与细胞凋亡相关蛋白PDCD4、Bax、Bcl-2的表达。结果 与正常视网膜组织miR-21表达 (0.703±0.071)相比,RB组织miR-21为高表达(2.214±0.162),差异有统计学意义(P<0.01)。在Weri-Rb-1细胞中,与NC组(2.245±0.213)相比,miR-21抑制剂转染后明显降低了miR-21的表达水平,miR-21 inhibitor组为0.683±0.075,差异有统计学意义 (P<0.01)。两组细胞转染后24 h、48 h、72 h、96 h,MTT测定法检测细胞活力结果显示:两组24 h的A值比较,差异无统计学意义 (P>0.05),miR-21 inhibitor 组在 48 h、72 h、 96 h的A值均低于 NC 组,差异均有统计学意义 (均为P<0.01)。流式细胞术检测结果显示:NC组凋亡细胞在总细胞中百分比为(3.045±0.301)%和(4.832±0.493)%,miR-21 inhibitor组凋亡细胞在总细胞中百分比为(2.593±0.257)%和(40.167±4.014)%,miR-21 inhibitor组Weri-Rb-1细胞的凋亡率明显高于miR-21 NC组(P<0.01)。Western blot检测结果显示:NC组PDCD4表达(0.192±0.045)相比miR-21 inhibitor组(0.683±0.091)表达明显减少,NC组Bax的蛋白表达水平(0.143±0.036)相比miR-21 inhibitor组(1.192±0.054)也明显减少,差异均有统计学意义(P<0.01),NC组Bcl-2蛋白表达(0.864±0.038)相比miR-21 inhibitor组(0.257±0.026)明显增多,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 miR-21是RB的促癌基因,miR-21抑制剂可以通过降低miR-21表达抑制肿瘤细胞的增殖、促进细胞凋亡,这一过程与PDCD4、Bax、Bcl-2等凋亡相关蛋白有关。  相似文献   

6.
目的 探讨阿魏酸对高糖诱导的人晶状体上皮细胞(human lens epithelial cells,HLEC)损伤的保护作用。方法 以HLEC为研究对象,将细胞随机分为对照组(HLEC+DMEM)、DMSO组(HLEC+DMEM+DMSO)、高糖组(HLEC+DMEM+30 mmol·L-1高糖)、高糖+阿魏酸组(HLEC+DMEM+DMSO+30 mmo·L-1高糖+阿魏酸)。采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况;流式细胞术检测各组细胞凋亡;Q-PCR检测p53、Bcl-2、Bax mRNA表达水平;免疫细胞化学和Western blot法检测p53、Bcl-2、Bax蛋白表达水平。结果 高糖抑制HLEC的细胞活性,不同浓度阿魏酸干预后,HLEC的细胞活性均明显升高,差异均具有统计学意义(均为P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,高糖组HLEC凋亡率高于对照组(P<0.05),高糖+阿魏酸组细胞凋亡率低于高糖组(P<0.05);高糖组p53、Bax mRNA和蛋白表达水平均明显高于对照组,而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均明显低于对照组(均为P<0.05);高糖+阿魏酸组p53、Bax mRNA和蛋白表达水平均明显低于高糖组,而Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平均明显高于高糖组(均为P<0.05)。结论 阿魏酸可能通过降低Bax和促进Bcl-2表达,进而减轻高糖诱导的HLEC损伤,从而达到防治糖尿病白内障发生的作用。  相似文献   

7.
目的 探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对高糖诱导的晶状体上皮细胞(LEC)凋亡和自噬的影响。方法 本研究以糖尿病性白内障患者和年龄相关性白内障(ARC)患者晶状体前囊膜以及高糖和正常糖条件下培养的人晶状体上皮细胞株(SRA01/04)为研究对象。选取2021年10月至2022年3月在南通大学第二附属医院眼科确诊为白内障的患者20例,依据白内障类型分为糖尿病性白内障组(DC组)和ARC组,每组各10例,取患者晶状体前囊膜进行实验。将细胞分为正常糖组和高糖组,正常糖组培养基含5.5 mmol·L-1葡萄糖,高糖组培养基含25.0 mmol·L-1葡萄糖,处理24 h后进行实验。采用Western blot检测各组HMGB1蛋白的表达水平。利用siRNA技术对HMGB1进行敲降,将细胞分为正常对照组、scr-siRNA组和si-HMGB1组。正常对照组:不作任何处理;scr-siRNA组:加入等量的Lipofectamine 3000和scr-siRNA;si-HMGB1组:加入等量的Lipofectamine 3000和si-HMGB1。三组...  相似文献   

8.
目的探讨二项酶诱导剂5,6-二氢环戊烯-1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮(CPDT)对高糖环境下大鼠Müller细胞凋亡的影响及其与凋亡相关基因B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)和B淋巴细胞瘤-2相关X蛋白(Bax)通路的关系。 方法体外培养SD大鼠的Müller细胞,采用数字表法随机分为对照组、高糖组和CPDT干预组。对照组给予25 mM DMEM完全培养基培养;高糖组给予65 mM DMEM完全培养基培养;CPDT干预组给予65 mM DMEM完全培养基和60 μM CPDT培养,均培养72 h。采用双染法流式细胞仪检测各组细胞凋亡和细胞周期的情况;采用蛋白免疫印迹杂交技术检测各组细胞Bcl-2和Bax蛋白的表达情况。不同组的组间比较采用单因素方差分析,当差异有统计学意义时,进一步采用LSD法两两比较。 结果流式细胞仪检测的结果显示,高糖组的细胞凋亡率为(17.6±3.16)%;对照组的细胞凋亡率为(8.25±0.26)%;CPDT干预组的细胞凋亡率为(13.5±2.25)%,且三组细胞凋亡率间,差异有统计学意义(F=13.48,P<0.05)。蛋白免疫印迹杂交技术检测的结果显示,高糖组Bcl-2蛋白表达量较对照组降低,Bax蛋白表达量较对照组升高,且差异有统计学意义(t=150.38,234.46;P<0.05)。CPDT干预组Bcl-2蛋白表达量较高糖组升高,Bax蛋白表达量较高糖组降低,且差异有统计学意义(t=108.03,36.33;P<0.05)。 结论高糖可通过上调Bax,下调Bcl-2表达,降低Bcl-2/Bax的比值,促进细胞凋亡。CPDT可增加高糖影响下的大鼠Müller细胞活性、Bcl-2的表达及Bcl-2/Bax的比值,抑制Bax的表达和高糖引起的大鼠Müller细胞的凋亡,从而起到保护高糖环境中Müller细胞受损伤的作用。  相似文献   

9.
目的 探讨mtDNA氧化损伤在人视网膜血管内皮细胞(hRECs)高糖代谢记忆过程中的作用。方法 选择30 mmol·L-1葡萄糖作为作用浓度,含浓度为5.5 mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养基作为正常培养基。将hRECs分为4组:空白对照组对hRECs不做特殊处理,用正常培养基培养;高糖诱导3 h组用高糖作用hRECs 3 h,高糖诱导12 h组用高糖作用12 h,高糖诱导24 h组用高糖作用24 h,之后均转至正常培养基培养2 d。采用流式细胞仪检测hRECs细胞凋亡情况及hRECs内活性氧自由基(ROS)含量,Western blot检测hRECs细胞色素C蛋白表达,实时荧光定量PCR检测线粒体呼吸链复合物COX1 mRNA的表达,ELISA法检测hRECs线粒体内mtDNA氧化损伤标志物8-OHdG含量。结果 流式细胞仪检测结果显示,对照组细胞凋亡率为6.94%。高糖诱导3 h组、12 h组及24 h组细胞凋亡率分别为10.30%、12.08%、13.55%;高糖诱导24 h组细胞凋亡率高于高糖诱导12 h组,差异有统计学意义 (P<0.05),高糖诱导12 h组细胞凋亡率高于高糖诱导3 h组,差异有统计学意义(P<0.05);各高糖诱导组细胞凋亡率均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。Western blot 结果显示,各高糖诱导组细胞线粒体氧化损伤相关蛋白细胞色素C相对表达量均高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);高糖诱导3 h组细胞色素C相对表达量低于12 h组和24 h组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。高糖诱导3 h组COX1 mRNA相对表达量高于12 h组和24 h组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);各高糖诱导组COX1 mRNA相对表达量均低于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。各高糖诱导组细胞ROS含量高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);高糖诱导3 h组ROS含量低于12 h组,差异有统计学意义(P<0.05);高糖诱导12 h组ROS含量低于24 h组,差异有统计学意义(P<0.05)。各高糖诱导组线粒体氧化损伤标志物8-OHdG含量高于对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05); 高糖诱导24 h组8-OHdG含量高于12 h组及3 h组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 高糖下视网膜血管mtDNA氧化损伤可能是“高糖损伤”解除后氧化损伤可持续存在的“源动力”。  相似文献   

10.
目的 探讨6-磷酸果糖激酶-2/果糖-2,6-二磷酸酶(6-phosphofructokinase-2/fructose-2,6-bisphosphatase 3,PFKFB3)抑制剂3-(3-吡啶基)-1-(4-吡啶基)-2-丙烯-1-酮[3-(3-pyridinyl)-1-(4-pyridinyl)-2-propen-1-one,3PO]对高糖环境下人脐静脉血管内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)增殖、迁移和管腔形成的影响。方法 将传代培养的HUVEC随机分为4组:正常对照组(5.5 mmol·L-1葡萄糖)、高渗组 (5.5 mmol·L-1葡萄糖 +24.5 mmol·L-1甘露醇)、高糖组 (30.0 mmol·L-1葡萄糖)及高糖+3PO组(30.0 mmol·L-1葡萄糖+ 10 μmol·L-1 3PO)。细胞同步化后按分组情况更换相应培养基,继续培养细胞,用于后续实验。采用MTS实验检测细胞增殖率,细胞划痕实验检测细胞迁移率,体外管腔形成实验检测细胞成管情况,实时荧光定量PCR检测PFKFB3 mRNA表达,Western blot检测PFKFB3及ERK蛋白表达情况。结果 与正常对照组相比,高渗组细胞增殖能力降低(均为P<0.05);24 h高糖组细胞增殖能力无明显升高(P>0.05),48 h高糖组细胞增殖能力升高(P<0.05)。与高糖组相比,高糖+3PO组细胞增殖能力明显被抑制(均为P<0.05)。与正常对照组相比,高渗组细胞迁移率明显升高(均为P<0.05);24 h高糖组细胞迁移率明显升高(P<0.05),但在48 h高糖组中细胞迁移率升高不明显(P>0.05)。与高糖组相比,高糖+3PO组细胞迁移率明显降低(均为P<0.05)。与正常对照组相比,高渗组及高糖组细胞管腔形成能力均明显减弱(均为P<0.05)。与高糖组相比,高糖+3PO组细胞管腔形成能力减弱(P<0.05)。与正常对照组相比,高渗组PFKFB3 mRNA的表达水平变化不大(P>0.05),高糖组PFKFB3 mRNA的表达升高 (P<0.05)。与高糖组相比,高糖+3PO组 PFKFB3 mRNA的表达明显降低(P<0.05)。与正常对照组相比,高渗组及高糖组中p-ERK/ERK蛋白比值及PFKFB3蛋白表达均升高(均为P<0.05)。与高糖组相比,高糖+3PO组p-ERK /ERK蛋白比值及PFKFB3蛋白表达下降(均为P<0.05)。结论 PFKFB3抑制剂3PO可明显降低高糖环境下HUVEC的增殖、迁移和管腔形成的能力,其作用机制可能与MAPK/ERK信号通路有关。  相似文献   

11.
目的 探究miR-101对视网膜母细胞瘤增殖及侵袭能力的影响。方法 收集31例视网膜母细胞瘤组织及7例正常视网膜组织。培养人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181及视网膜母细胞瘤系HXO-Rb44。Lipofectamine 2000转染HXO-Rb44细胞并分组:阴性对照(normal control,NC)1组[转染microRNA(miR)-101阴性对照物]、miR-101表达组(转染miRNA-101类似物);NC 2组[转染组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶(EZH2)阴性对照序列]、siRNA-EZH2组(转染EZH2siRNA)、siRNA-EZH2+mimics组(转染EZH2siRNA和miRNA-101类似物)和EZH2+mimics组(转染EZH2表达载体和miRNA-101类似物)。正常HOX-Rb44细胞作为空白组。采用qRT-PCR检测miR-101、EZH2 mRNA表达,Western blot检测EZH2蛋白表达。MTT及Transwell实验分别测定细胞增殖及侵袭能力。荧光素酶报告基因实验确定miR-101和EZH2的靶向关系。裸鼠体内移植实验测定细胞体内增殖能力。结果 与正常视网膜组织和ACBRI-181细胞相比,视网膜母细胞瘤组织及HXO-Rb44细胞中miR-101的相对表达量均明显下调(均为P<0.05)。EZH2 mRNA及蛋白在miR-101表达组中的相对表达量均显著低于空白组和NC1组(均为P<0.05)。72~96 h,miR-101表达组的吸光度(A)值均显著低于空白组及NC1组(均为P<0.01)。miR-101表达组侵袭细胞数量(51±6)均显著低于空白组(97±11)及NC1组(92±8)(均为P<0.01)。EZH2是miR-101的靶基因。48~96 h,siRNA-EZH2组和siRNA-EZH2+mimics组的A值均显著低于空白组和NC2组(均为P<0.01);72~96 h,siRNA-EZH2+mimics组的A值明显低于siRNA-EZH2组(P<0.05);24~96 h,EZH2+mimics组的A值与空白组和NC2组之间的差异均无统计学意义(均为P>0.05)。siRNA-EZH2组侵袭细胞数量(48±4)和siRNA-EZH2+mimics组(38±3)均显著低于空白组(95±10)和NC2组(90±6)(均为P<0.01),siRNA-EZH2+mimics组侵袭细胞数量明显低于siRNA-EZH2组(P<0.05),EZH2+mimics组侵袭细胞数量与空白组和NC2组之间的差异均无统计学意义(均为P>0.05)。裸鼠体内移植5~7周,siRNA-EZH2组和siRNA-EZH2+mimics组的瘤体体积均显著低于空白组和NC2组(均为P<0.01),siRNA-EZH2+mimics组的瘤体体积明显低于siRNA-EZH2组(P<0.05),EZH2+mimics组的肿瘤体积与空白组和NC2组之间的差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 miR-101上调后可抑制HXO-Rb44细胞的增殖及侵袭能力,这可能是通过抑制EZH2表达实现的。  相似文献   

12.
目的 观察ghrelin及其受体生长激素分泌素受体1a(GHSR-1a)在高糖环境下对视网膜血管内皮细胞的保护作用.方法 将体外培养的人视网膜血管内皮细胞(HRMECs)分为对照组和高浓度葡萄糖组.对照组细胞在含5.5 mmol·L-1葡萄糖的M199培养基中培养48 h,高浓度葡萄糖组细胞在含30.0 mmol·L-...  相似文献   

13.
目的 观察miR-373在视网膜母细胞瘤(retinoblastoma,RB)细胞中的表达及其对RB Y79细胞侵袭及迁移能力的影响和相关机制。方法 采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-373在RB细胞系RB Y79、SO-RB50和人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181中的表达水平,并应用脂质体转染法将miR-373 抑制物(miR-373抑制物组)和阴性对照(NC组)分别转染至Y79细胞,Transwell实验检测Y79细胞侵袭和迁移能力的变化,Western blot检测Y79细胞中上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关标志物E-Cadherin、Vimentin和N-Cadherin蛋白的表达变化。结果 qRT-PCR 结果显示,RB细胞系Y79、SO-RB50中miR-373的相对表达量分别为6.21±0.34、5.40±0.38,明显高于人正常视网膜血管内皮细胞系ACBRI-181中miR-373的相对表达量(1.02±0.04)(均为P<0.05)。Transwell实验显示,miR-373抑制物组迁移细胞数(74±13)个,明显低于NC组(180±17)个(P<0.05),miR-373抑制物组侵袭细胞数(51±9)个明显低于NC组(113±14)个(P<0.05)。Western blot结果显示,miR-373抑制物组E-Cadherin蛋白的表达(0.40±0.08)明显高于NC组(0.20±0.06)(P<0.05),Vimentin蛋白的表达(0.17±0.06)也明显低于NC组(0.51±0.10)(P<0.05),N-Cadherin蛋白的表达(0.12±0.06)也明显低于NC组(0.33±0.08)(P<0.05)。结论 miR-373在RB细胞中表达异常增高,降低miR-373的表达能够通过调控EMT抑制RB Y79细胞的侵袭和迁移能力,为RB的靶向治疗提供了新的潜在靶点。  相似文献   

14.
目的 探讨慢病毒介导miR-34a表达对视网膜母细胞瘤自噬的影响并对其机制进行研究。方法 取对数生长期的Y79细胞,将转染miR-34a的慢病毒载体、转染高迁移率族蛋白1(high mobility group protein 1,HMGB1)载体、共转染miR-34a+HMGB1的慢病毒载体及培养液接种至Y79细胞构建转染miR-34a细胞系。按照接种载体分组,将Y79细胞株分为4组,分别为转染miR-34a组、转染HMGB1组、共转染miR-34a+HMGB1组及阴性对照组。用qRT-PCR检测miR-34a的表达,采用Capase3检测试剂盒检测Caspase3活性。采用流式细胞仪及单丹磺酰尸胺(monodansyl cadaverin,MDC)试剂盒在488 nm荧光下检测MDC荧光率,利用透射电子显微镜观察自噬超微结构。结果 miR-34a转染结果显示,转染miR-34a组miR-34a的相对表达量(2.04±0.46)显著高于阴性对照组(1.03±0.21)(P<0.05),共转染miR-34a+HMGB1组的HMGB1的相对表达量(0.42±0.08)显著低于转染HMGB1组(1.08±0.16),差异有统计学意义(P<0.05)。Caspase3活性测试显示,转染miR-34a组Caspase3活性(10.75±2.87)明显高于阴性对照组(3.48±0.74),转染HMGB1组Caspase3活性(2.46±0.94)低于共转染miR-34a+HMGB1组(6.21±1.74),差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,转染miR-34a组MDC阳性率(56.94%)明显高于阴性对照组(2.15%),共转染miR-34a+HMGB1组的MDC阳性率(43.11%)明显高于转染HMGB1组(10.32%)(P<0.05)。透射电子显微镜观察自噬超微结构显示,阴性对照组无明显改变,共转染miR-34a+HMGB1组可见Y79细胞双层膜结构,转染miR-34a组可见自噬溶酶体结构。结论 miR-34a促进视网膜母细胞瘤的自噬凋亡,其机制可能为抑制HMGB1的表达。  相似文献   

15.
李珂  项奕 《眼科新进展》2021,(5):413-416
目的 探讨miR-19在葡萄膜黑色素瘤(UM)细胞中的表达及其对UM细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 qRT-PCR检测正常视网膜上皮细胞系ARPE-19和UM细胞系SP6.5、M23 中miR-19 的表达。将M23细胞分为miR-19 inhibitor组(转染miR-19-inhibitor)及miR-19 NC组(转染scramble),MTT法检测各组细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,细胞划痕实验检测细胞迁移能力,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Western blot检测表皮生长因子受体(EGFR)/丝氨酸-苏氨酸激酶(AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路蛋白表达。结果 正常视网膜上皮细胞系ARPE-19中miR-19 相对表达量为1.35±0.13,均显著低于UM细胞系SP6.5与M23中miR-19相对表达量8.35±0.73和9.35±0.43(均为P<0.01) 。 M23 细胞转染后,miR-19 inhibitor组中miR-19表达量低于miR-19 NC组 (1.05±0.33 vs 8.05±0.64,P<0.01)。MTT法检测结果显示,转染24 h,miR-19 inhibitor组与miR-19 NC组光密度值比较,差异无统计学意义(P>0.05);转染48 h、72 h、96 h,miR-19 inhibitor组光密度值均低于miR-19 NC组(均为P<0.05)。miR-19 inhibitor组细胞凋亡率高于miR-19 NC组[(15.34±2.35)% vs (8.23±0.72) %,P<0.05]。miR-19 inhibitor组细胞划痕愈合率低于miR-19 NC组 [(23.7±2.1) % vs (68.9±5.1)%,P<0.05]。miR-19 inhibitor组侵袭细胞数少于miR-19 NC组[(45.1±3.9)个 vs (115.3±8.9)个,P<0.05]。miR-19 inhibitor组UM细胞系M23 EGFR蛋白表达量低于miR-19 NC组(0.43±0.03 vs 1.02±0.02,P<0.05) 。miR-19 inhibitor组AKT蛋白表达量低于miR-19 NC组(0.52±0.04 vs 1.12±0.05,P<0.05)。miR-19 inhibitor组mTOR蛋白表达量低于miR-19 NC组(0.63±0.05 vs 1.41±0.06,P<0.05)。结论 敲低miR-19 表达可抑制UM细胞增殖、迁移和侵袭能力并促进凋亡,其机制可能与EGFR/AKT/mTOR信号通路被抑制有关。  相似文献   

16.
目的 对比重力液流系统和主动控制液流系统对白内障超声乳化手术中累积释放能量(cumulative dissipated energy,CDE)及术后视力恢复、角膜内皮参数的影响。方法 选取2017年10月至12月于首都医科大学附属复兴医院眼科行白内障手术患者96例(96眼)。所有患者均患有年龄相关性白内障,LOCS III晶状体核透光性和晶状体核颜色评分为4.0~6.9分。依照液流系统选择情况分为:重力组(48例48眼),使用Centurion重力液流系统;主控组(48例48眼),使用Centurion主动控制液流系统。术中记录每例患者CDE;术后1周、1个月、3个月复诊,行眼科常规检查,包括视力、眼压、裂隙灯、眼底镜等;所有患者术前行非接触角膜内皮镜检查,记录角膜内皮细胞密度(endothelial cell density,ECD)、内皮细胞变异系数(coefficient of variance,CV)、角膜六角形内皮细胞比率(percentage of hexagonal endothelial cells,6A)及中央角膜厚度(central corneal thickness,CCT)。每次复查均行角膜内皮镜检查获取ECD、内皮细胞CV、6A、CCT等数据。结果 术前重力组和主控组患者的年龄、性别、晶状体核透光性、晶状体核颜色评分比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。术前两组患者最佳矫正视力比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后1周主控组患者最佳矫正视力较重力组明显提高,差异有统计学意义(P<0.05),术后1个月和3个月两组间最佳矫正视力差异均无统计学意义(均为P>0.05)。重力组与主控组术中CDE差异无统计学意义(P>0.05)。总体CDE均与术前晶状体核分级呈正相关性(晶状体核透光性:r=0.703,P=0.001;晶状体核颜色评分:r=0.804,P=0.000),术前晶状体核分级越高术中CDE越大。重力组和主控组术前ECD、内皮细胞CV、6A、CCT相似,差异均无统计学意义(均为 P>0.05)。术后1周ECD、内皮细胞CV、6A比较,两组间差异均无统计学意义(均为P>0.05),但重力组CCT[(570.60±34.99)μm]明显大于主控组[(554.67±30.71)μm],差异有统计学意义(P<0.05);术后1个月和3个月两组ECD、内皮细胞CV、6A、CCT比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论 Centurion超声乳化手术系统中重力液流系统及主动控制液流系统对术中CDE及角膜内皮的影响相似,主动控制液流系统能够更有效地减轻术后角膜水肿,使患者在术后早期视力恢复更迅速。  相似文献   

17.
目的 探讨葛根素对大鼠糖尿病视网膜病变(diabetic retinopathy,DR)的抑制作用。方法 取SPF级健康Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组20只、模型组20只和葛根素组20只,模型组和葛根素组大鼠均接受链脲佐菌素左下腹腔注射建立糖尿病模型,正常对照组大鼠注射同样体积的枸橼酸盐溶液。造模后1周,葛根素组大鼠每天给予100 mg·kg-1葛根素单侧腹腔注射治疗,连续治疗6周。正常对照组和模型组大鼠每天给予等量生理盐水腹腔注射。观察并比较各组大鼠体质量、血糖及血-视网膜屏障的损伤情况。应用TUNEL法检测大鼠的视网膜组织神经节细胞凋亡情况;采用ELISA检测各组大鼠白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)β、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)的水平;采用硫代巴比妥酸法检测丙二醛 (malonaldehyde,MDA)水平;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平;Western blot法检测磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(phospho-extracellular signal-regulated kinase,p-ERK)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)、E2核因子相关因子2(nuclear factor-erythroid 2-related factor-2,Nrf2)、细胞外调节p-ERK的总蛋白(t-ERK)及P53的表达情况。结果 模型组大鼠的体质量低于正常对照组,血糖高于正常对照组(P<0.05);而葛根素组大鼠体质量高于模型组,血糖低于模型组(P<0.05)。模型组大鼠视网膜组织伊凡斯兰渗透量为(10.63±3.21)μg·g-1,高于正常对照组[(2.87±1.09)μg·g-1],差异有统计学意义(P<0.05);而葛根素组伊凡斯兰渗透量为(5.56±2.71)μg·g-1,低于模型组,但高于正常对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。模型组大鼠神经节细胞凋亡指数高于正常对照组,而葛根素组低于模型组,但高于正常对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。模型组大鼠视网膜组织中IL-1β、TNF-α及MDA水平高于正常对照组,SOD水平低于正常对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。而葛根素组大鼠视网膜组织中IL-1β、TNF-α及MDA水平低于模型组,SOD水平高于模型组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。模型组大鼠Nrf2、p-ERK蛋白的表达水平高于正常对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。而葛根素组大鼠Nrf2、p-ERK的表达水平低于模型组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。各组大鼠t-ERK 的蛋白表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。模型组大鼠的Bcl-2表达水平低于正常对照组,P53高于正常对照组,差异均有统计学意义(均为P<0.05);葛根素组大鼠Bcl-2表达水平高于模型组,P53低于模型组,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 葛根素可有效减缓2型糖尿病大鼠视网膜神经节细胞的凋亡,改善2型DR的进程,其机制可能与抑制Nrf2/ERK通路的激活,减轻视网膜组织的炎性反应及氧化应激损伤有关。  相似文献   

18.
目的 探讨在高糖诱导的视网膜新生血管形成过程中,核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)炎症小体与自噬之间的关系。方法 根据不同干预方式将人视网膜微血管内皮细胞(human retinal microvascular endothelial cells,HRMEC)随机分为三组:高糖组、3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)+高糖组、CY-09+高糖组。高糖组在M199培养基中加入30 mmol·L-1葡萄糖溶液处理48 h;3-MA+高糖组和CY-09+高糖组分别先用5 mmol·L-1的3-MA和10 mmol·L-1的CY-09处理2 h,然后更换培养基再加入30 mmol·L-1葡萄糖溶液处理48 h。分别采用MTT、Transwell及Matrigel法检测细胞活力、细胞迁移和管腔形成情况,比较三组细胞活力、细胞迁移数和管腔形成数;采用Western blot法检测三组细胞NLRP3炎症小体信号通路的关键蛋白NLRP3、凋亡相关颗粒样蛋白(ASC)、Caspase-1及自噬标志性蛋白LC3-II、LC3-I、Beclin-1的表达并对比;采用Ad-mCherry-GFP-LC3B腺病毒转染细胞观察自噬流的情况。结果 高糖组、3-MA+高糖组、CY-09+高糖组HRMEC细胞活力分别为(153.56±1.46)%、(115.33±3.26)%和(116.10±1.66)%,细胞迁移数分别为(117.33±7.23)个、(70.00±2.00)个和(71.67±2.52)个,细胞管腔形成数分别为(88.33±2.08)个、(61.33±1.53)个和(62.00±3.00)个。与高糖组相比,3-MA+高糖组及CY-09+高糖组HRMEC的细胞活力、细胞迁移数和管腔形成数均明显减少(均为P<0.001),而3-MA+高糖组与CY-09+高糖组间差异均无统计学意义(均为P>0.05)。与高糖组相比,3-MA+高糖组及CY-09+高糖组细胞NLRP3、ASC、Caspase-1、Beclin-1的蛋白相对表达量和LC3-II/LC3-I比值均明显降低(均为P<0.05),细胞内自噬流明显减弱。结论 抑制NLRP3炎症小体与自噬均可有效抑制高糖诱导的视网膜新生血管形成,且二者在其中可能发挥相互正向调控的作用。  相似文献   

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