结核杆菌抗原Rv0173的HLA-A*0201限制性CTL表位的预测及鉴定

目的 鉴定结核杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)抗原Rv0173中的HLA-A*0201限制性CTL表位.方法 应用数据库SYFPETTHI预测结核杆菌Rv0173中可能存在的HLA-A*0201限制性CTL表位,经流式细胞术分析各抗原肽与HLA-A*0201的亲合力,经时间分辨荧光法检测外周血单个核细胞(PBMCs)对各抗原肽产生的增殖反应,经细胞毒性实验研究各抗原肽诱导的特异性T细胞的细胞毒杀伤活性,逐步鉴定Rv0173的HLA-A*0201限制性CTL表位.结果 位于Rv0173氨基酸序列肽3(21-30aa)和抗原肽7(161-170aa)与HLA-A*0201分子具有较高的亲合力,并都能刺激HLA-A*0201阳性个体PBMCs增殖,并诱导产生特异性杀伤活性.结论 肽3(RLSQSADQYL)(21-30aa)和肽7(LLRGGGLVNL)(161-170aa)是抗原Rv0173上HLA-A*0201限制性CTL的优势表位,可作为结核疫苗设计的候选表位.     

KLIANNTRV是结核抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL表位

目的鉴定结核杆菌抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL优势表位。方法采用数据库SYFPEITHI初步预测结核抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL表位;经流式细胞术分析抗原肽与HLA-A*0201的亲和力;经时间荧光分辨法检测患者外周血单个核细胞(PBMCs)对抗原肽的增殖反应;最后通过细胞毒实验逐步鉴定Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL预测的表位。结果实验证明,预测的位于Ag85A氨基酸序列(242-250aa)的肽表位与HLA-A*0201具有较高的亲和力。结论筛选出的KLIANNTRV(242-250aa)是结核杆菌抗原Ag85A的HLA-A*0201限制性CTL优势表位。     

应用免疫球蛋白重链可变区上框架区来源的抗原九肽获得的细胞毒T细胞功能分析

目的明确存B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白重链可变区(IgHV)的框架区(FR)上是否存在可以激发细胞毒T淋巴细胞(CTL)的抗原表位，这些来源于FR的抗原肽是否能够激发家族特异性的免疫反应，探讨按照B淋巴细胞肿瘤的IgHV基因分型进行家族性的免疫治疗的可能性，方法利用生物信息学系统预测了40例B淋巴细胞肿瘤表面的免疫球蛋白序列的抗原表位，人工合成不同基因家族的抗原几肽，利用1、2细胞结合实验检测预测的抗原肽和HLA分子的亲合力利用体外CTL刺激扩增体系。诱导特异性的CTL细胞增殖，用肽／HLA四聚体检测特异性CTL的数目，应用LDH释放实验检测CTL的细胞毒活性并验证其家族特异性。结果在B淋巴细胞肿瘤的7个IgHV基因家族中找到了12个高亲和力的抗原九肽，其中10个(83％)位于FR，以HLA-A*0201正常供的外周血单个核细胞(PBMNC)负荷该九肽作为抗原呈递细胞去刺激自身PBMNC，经过4轮刺激，CD8和肽／HLA四聚体双阳性细胞从0．38％上升到49．38％LDH释放实验证明对HLA—A*0201( )、IgHV1( )靶细胞有明显的杀伤作用，并且被IgHV1肽刺激出的CTL不能识别负荷IgHV3肽的靶细胞：结论IgHV基因FR抗原儿肽可以刺激产生具有HLA限制性的并且肽特异性的CTL，同时这样的杀伤作用具有家族特异性，以此为靶位有望对B淋巴细胞肿瘤进行家族特异性的免疫治疗。     

Eps8抗原HLA-A* 0201限制性CTL表位的预测和鉴定

目的:寻找并鉴定肿瘤相关抗原Eps8来源的HLA-A*0201限制性CTL表位,为临床开展基于Eps8表位的特异性免疫治疗奠定基础。方法:通过在线生物学软件从C-末端酶切位点、MHC-I类分子结合力及TAP转运效率3个方面初步预测Eps8抗原的HLA-A*0201限制性CTL表位,通过肽/MHC分子结合力及肽/MHC分子复合物稳定性实验初步验证预测结果,利用酶联免疫斑点检测(enzyme-linked immuospot assay,ELISPOT)方法检测候选表位刺激健康志愿者外周血单个核细胞(PBMNC)分泌IFN-γ的能力,以及LDH细胞毒实验验证其体外杀伤肿瘤细胞的功能,最后在HLA-A*0201/Kb转基因小鼠中检测候选表位的体内免疫功能。结果:通过在线生物学软件筛选得到4个候选表位。结合力实验结果显示,p360-368具有高结合力,p101-109、p276-284具有中等结合力。稳定性实验结果显示,该3个表位的DC50均大于8 h。LDH细胞毒实验中p101-109、p276-284、p360-368都能诱导产生特异性CTL,对靶细胞具有显著的杀伤效应,还能提高效应细胞分泌IFN-γ的水平。在HLA-A*0201/Kb转基因小鼠体内免疫功能检测中同样证实该Eps8抗原表位能产生强烈的免疫应答。结论:天然表位p101-109、p276-284、p360-368可能是Eps8抗原HLA-A*0201限制性CTL表位。     

慢性乙型肝炎病毒感染患者外周血特异性CD8~+T淋巴细胞检测的临床意义

目的研究慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染患者外周血特异性CD8+T淋巴细胞(CTL)频率的变化及临床价值。方法采用乙型肝炎病毒核心抗原(HBcAg)18-27表位肽-人类白细胞抗原(HLA)-A*0201五聚体及CD8单克隆抗体,设计流式细胞技术检测HLA-A2+6例、HLA-A2-12例非HBV感染者、HLA-A2+49例和HLAA2-42例HBV感染者外周血中针对该肽段的特异性CTL数量,占总计数CD8+细胞数百分比表示。结果 HLA-A2-HBV感染未抗病毒治疗者特异性CTL(0.30%～14.40%,中位数1.13%,n=20)与HLA-A2-非HBV感染者(0.33%～3.90%,中位数1.04%,n=12),差异无统计学意义(P>0.05),但显著低于HLA-A2-抗病毒治疗者(0.25%～20.30%,中位数2.11%,n=22,P<0.05);HLA-A2-抗病毒治疗者特异性CTL和HLA-A2+未抗病毒治疗者特异性CTL(0.20%～29.90%,中位数2.22%,n=20)均显著高于HLA-A2-非HBV感染者(P<0.01);HLA-A2+抗病毒治疗者特异性CTL(0.14%～39.22%,中位数1.33%,n=29)显著高于HLA-A2-非HBV感染者(P<0.05)。HLA-A2+未抗病毒组中血清HBV DNA<103 copy/mL、丙氨酸氨基转移酶小于40U/L者特异性CTL频率增高(P<0.05、0.01)。结论 HBV抗原肽-HLA-A*0201五聚体流式细胞技术能在体外直接检测外周血HBV特异性CTL频率的变化,其水平一定程度反映不同临床感染状态慢性HBV感染患者T淋巴细胞对特异性抗原表位免疫应答的差异。     

MAGE-12的HLA-A2限制性CTL表位肽预测及其三维结构构建

目的从理论上分析、预测黑色素瘤抗原(MAGE)-12的人类白细胞抗原(HLA)-A2限制性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)表位肽,并构建其三维结构。方法以肿瘤特异性抗原MAGE-12为研究目标,采用超基序法、量化基序法、多项式法、延展基序法与三维结构构建相结合的CTL表位预测方法。结果预测出的MAGE-12的表位中有4个符合HLA-A2限制性CTL表位要求。结论预测出的4个HLA-A2限制性CTL表位为MAGE-12的表位的可能性较大,经后续实验筛选、鉴定后,可用于基于MAGE-12的肿瘤治疗性多肽疫苗的设计研究。     

非小细胞肺癌患者癌胚抗原特异性细胞毒T细胞与临床疗效的研究

目的 通过对HLA-A0201限制性的特异性细胞毒T细胞(CTL)分析,研究晚期非小细胞肺癌患者化疗不同疗效与T淋巴细胞对特异性抗原表位免疫应答的差异.方法 鉴定HLA-A0201阳性的晚期非小细胞肺癌患者13例(Ⅲb期6例,Ⅳ期7例);给予吉西他滨+顺铂方案化疗,收集化疗前患者的外周血单个核细胞,采用酶联免疫斑点试验测定针对癌胚抗原表位肽的特异性CTL的数量和功能.结果 晚期非小细胞肺癌化疗有效患者外周血癌胚抗原(CEA)多肽特异性CTL数量和功能明显高于晚期非小细胞肺癌化疗无效患者.结论 肺癌特异性表位的CTL应答,在不同化疗疗效患者的应答特征不同.化疗有效的患者特异性CTL应答水平显著高于疗效无效者,肺癌特异性CTL应答与临床疗效有密切关系.肺癌特异性CTL在抑制肿瘤的过程中发挥着重要作用,这将有助于预测肺癌患者的临床转归和开拓肺癌的免疫治疗的新策略.     

LPS刺激来自人单核细胞的树突状细胞在调节自体CD4+CD25+T细胞活性作用研究

树突状细胞（DC）是现今被认为最具潜能的专职抗原呈递细胞.应用不同方法在体内诱导细胞毒T细胞（CTL）来识别肿瘤相关抗原的肿瘤免疫治疗研究已有报告.然而,在体内免疫治疗的有效性可能仅限制在局部或系统抑制CTL产生和功能.为了检测LPS刺激人单核细胞的DC来抑制自体CD4^＋CD25^＋T细胞能力,使用HLA-A2限制性p53264-272肽作为肿瘤抗原,用LPS（DC-LPS^＋）或不用LPS（DC-LPS^-）产生的DC分别与自体T细胞共同培养.结果显示：在DC-LPS^＋活化的T细胞的CD4^＋CD25^＋T细胞群比DC-LPS^-活化的T细胞要低.这个结果提示,DC-LPS^＋与CD4^＋CD25^＋T细胞群有关联,而且这种特性可能是由于T细胞对肿瘤相关抗原的调节作用.     

免疫球蛋白重链框架区九肽诱导抗急性B淋巴细胞白血病的细胞毒T细胞应答

目的 用免疫球蛋白(Ig)重链框架区几肽体外诱导抗急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)的细胞毒T细胞应答。方法 合成Ig重链可变区第1家族框架区3～11位置上的九肽QLVQSGAEV(IgHV13-11)，进行T2细胞结合实验。IgHV13-11负荷抗原呈递细胞(APC)，体外刺激HLA-A*0201正常外周血单个核细胞(PBMNC)，每周1次，共3次：HLA-A*0201／IgHV13-11四聚体监测培养细胞中IgHV1-311特异性CD8^ T细胞的增殖。对B-ALL初治患儿的7个IgHV基凶家族进行PCR扩增及PCR产物的测序，选IgHV1和IgHV3家族单等位基冈功能性重排克隆，并鉴定其HLA-A*0201位点。MTT比色法分析IgHV13-11，特异性CD8^ T细胞对HLA-A*0201^ IgHV1和IgHV3家族B-ALL细胞克隆的杀伤活性。结果 IgHV13-11可上调HLA-A*0201分子在T2细胞表面的表达1．63倍、HLA-A*0201*正常PBMNC中IgHV13-11特异性CD8^ T细胞的频率由2轮刺激后1．64％增至3轮刺激后82．57％。IgHV13-11特异性CD8^ T细胞在效靶细胞比(E：T)20：1时对IgHV1家族B-ALL细胞的杀伤率为18．24％，是IgHV3家族B-ALL细胞的1．8倍(P=0．01)。结论 体外诱导的Ig重链框架区九肽特异性CD8*T细胞可杀伤表达该肽的B-ALL细胞。     

HLA-A^＊0201／WTl五聚体联合胞内IFNγ染色在检测白血病患者外周血WT1特异性T细胞中的应用

本研究探讨五聚体及胞内因子染色在定性定量检测抗原特异性T细胞中的应用价值。用RT—PCR方法检测受试者WT1表达水平;用HLA—A＊0201／wTl五聚体及胞内IFNγ染色检测14例表达HLA—A＊020l的白血病患者全相合移植前后及其供者外周血中的WT1特异性T细胞。结果表明：14例供者中2例有低水平WT1表达,白血病患者均有不同水平的WT1表达。14例供者均未检测到WT1＋CD8^＋CTL和WT1^＋IFNγ^＋细胞;移植前14例患者中2例可检出WT1^＋CD8^＋CTL,3例检出WTl^＋IFNγ^＋细胞,二者间无明显差异（P=0．357）,而移植后均可检出WT1^＋CD8^＋CTL和WT1^＋IFNγ^＋细胞,明显高于移植前（P值均〈0．01）。移植后大部分患者均在30天内检出WT1^＋CD8^＋CTL和WT1^＋IFNγ＋细胞,但后者检出率高于前者（P=0．014）。14例患者中WT1^＋CD8^＋CTL峰值中位数为0．18％,而WT1^＋IFNγ^＋细胞峰值中位数为0．83％,明显高于前者（P=0．005）;WT1^＋CD8^＋CTL峰值中位时间为移植后75天,WT1^＋IFNγ^＋细胞峰值中位时间为移植后105天,但二者间无明显差异（P=0．455）。结论：五聚体及胞内IFNγ染色能有效检测白血病患者外周血中白血病抗原特异性T细胞;两种方法联合检测有助于抗原特异性T细胞的准确定性定量检测。     

可溶性HLA-A*0201-PR1复合物的构建与鉴定

为制备HLA-A＊0201-PR1四聚体,本课题构建了可溶性的HLA-A＊0201-PR1复合物。以原核表达的HLA-A＊0201-BSP融合蛋白为重链,β2-微球蛋白（β2m）为轻链,与人工合成的HLA-A2限制性抗原肽PR1（蛋白酶3的第169-177氨基酸,VLQELNVTV）进行共折叠复性,以生成可溶性HLA-A＊0201-PR1复合物。应用BirA酶对复性混和物进行生物素化,再经阴离子交换柱纯化,得到生物素化的可溶性HLA-A＊0201-PR1复合物。应用凝胶过滤高效液相色谱分析可溶性HLA-A＊0201-PR1复合物的生成率。利用HLA-A2构象特异性抗体（BB7.2）及链霉亲和素进行Western blot和ELISA分析,对生物素化的可溶性HLA-A＊0201-PR1复合物进行鉴定。结果表明：在折叠体系中,主要含有HLA-A＊0201-BSP聚合体、HLA-A＊0201-PR1复合物及β2m,其中可溶性复合物生成率约18%。获得的HLA-A＊0201-PR1复合物可在BirA酶作用下被有效生物素化。结论：成功地获得了生物素化的可溶性HLA-A＊0201-PR1复合物,为进一步制备HLA-A＊0201-PR1四聚体创立了基础。     

生物信息学预测GPⅡb／Ⅲa抗体CTL、Th的混合表位

背景:GPb/Ⅲa是特发性血小板减少性紫癜患者最常见的血小板糖蛋白,已证实该蛋白独特型抗体结合血小板后会激活补体,破坏血小板.目的:以GPⅡbⅢa抗体为靶抗原,应用生物信息学软件对其CTL,Th细胞表位进行多参数预测.设计、时间及地点:开放性实验,于2008-03/08在珠江医院血液科实验室完成.材料:GPⅡb/Ⅲa抗体的氨基酸序列由GENBANK公司提供.方法:分别应用SYFPEITHI,RANKPEP,BIMAS,SVMHC,PREDEP,MHCPRED,PROPRED软件对人和鼠源的血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体蛋白进行HLA-A*0201,HLA-A*1101,HLA-A*2401限制性表位预测,经去除能引起自身免疫的已发表的多肽,取前者覆盖后二者的多肽为混合CTL表位,再联合软件predTAP、TAPPred的TAP结合预测结果,以及NetChop、MAPPP、PAProC软件的蛋白酶切位点预测结果,取能包含二者的多肽为CTL修正表位.用基于肽MHC-Ⅱ结合的算法Syfpeithi,RANKPEP,Mhcpred,HLAPRED进行HLA-DR的Th表位预测,最后取Th表位覆盖CTL修正表位,得到CTL、Th细胞混合表位.结果:从1 740条多肽中筛选出5条人源抗人血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体的CTL、Th细胞混合表位肽,即Anti-GPⅡb/Ⅲa-Human的第1-15,24-38,50-64,65-81,109-121位:筛选出5条鼠源抗人血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体的CTL、Th细胞混合表位肽,即Anti-GPⅡb/Ⅲa-Mice的第1-15,26-40,46-60,68-82,93-107位.结论:根据血小板糖蛋白GPⅡb/Ⅲa抗体预测的CTL、Th细胞优势抗原表位,可用于制备特异性抗体,可成为特发性血小板减少性紫癜新疫苗研究的靶点.     

肝素酶CTL表位负载的树突状细胞疫苗体外抗肿瘤免疫效应研究

目的研究肝素酶(Hpa)多肽疫苗体外能否诱发肝素酶特异性CTL反应,为肝素酶多肽疫苗的临床应用提供理论依据。方法5条HLA-A2限制性肝素酶抗原表位[Hpa(525-533)(PAFSYSFFV)、Hpa(353-361)(PLLSDTFAA)、Hpa(277-285)(KMLKSFLKA)、Hpa(400-408)(PLPDYWLSL)、Hpa(405-413)(WLSLLFKKL)]分别负载正常人外周血来源(PBMC)的树突状细胞(DC),诱导肝素酶特异性细胞毒T淋巴细胞(CTL),采用4 h标准51Cr释放实验检测上述CTL对不同肿瘤细胞的免疫杀伤效应,采用ELISPOT方法检测肝素酶表位肽负载的DC疫苗刺激的效应细胞IFN-γ的释放。结果5条肝素酶多肽表位中,只有Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)体外可以诱导肝素酶表位特异性CTL反应,对Hpa阳性且HLA-A2阳性的KATO-Ⅲ胃癌细胞、U2OS骨肉瘤细胞、SW480结肠癌细胞具有明显的杀伤效应,对HLA-A2阴性的HepG2肝癌细胞和Hpa阴性的MCF-7乳腺癌细胞不具有杀伤效应,但对转染了HLA-A2的HepG2细胞和转染了肝素酶质粒的MCF-7细胞恢复杀伤效应,对自体淋巴细胞不具有杀伤效应,进一步研究表明,Hpa(525-533)、Hpa(277-285)和Hpa(405-413)表位肽可以促进CTL细胞IFN-γ的释放。结论人肝素酶特异性抗原表位Hpa(525-533)、Hpa(277-285)、Hpa(405-413)不仅能激发机体特异性的抗肿瘤效应,而且还能诱导一个非特异性抗肿瘤的良性循环,这种肝素酶多肽疫苗具有广谱、高效、特异、安全的优点,为肝素酶表位多肽疫苗的临床应用提供了理论依据。     

慢性 HBV 感染患者特异性细胞免疫功能与病毒载量的关系研究

目的：探讨慢性乙型肝炎病毒（HBV ）感染患者特异性细胞免疫功能与病毒载量的关系。方法选择51例慢性乙型肝炎患者（A组）、43例乙型肝炎肝硬化患者（B组）和40例体检健康者（C组）外,采用流式细胞术检测人类白细胞抗原A2（HLA-A2）,采用 HLA-A2限制的 HBVcore18-27抗原表位肽五聚体（Pro5MHC）法检测Pro5MHC、CD8双阳性细胞[HBV特异性细胞毒性 T 淋巴细胞（CTL）],并比较不同 HBV DNA水平患者各指标检测结果。结果 A组、B组HLA-A2阳性率均明显高于C组（P＜0．05）。随着 HBV DNA水平的升高,HBV特异性CTL水平逐渐减低（P＜0．05）,但CD8＋细胞水平无明显变化（P＞0．05）。 HBV DNA水平大于105 copies／mL的患者,Pro5M HC／CD8＋水平明显低于 HBV DNA水平为103～105 copies／mL的患者以及HBV DNA水平小于103 copies／mL的患者（P＜0．05）。结论 HLA-A2是乙型肝炎肝硬化的易感基因之一。 HBV感染患者体内HBV特异性CTL水平随着病毒复制程度的升高而减低。Pro5M HC／CD8＋可作为判断病毒复制程度的客观指标。     

负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽HLA-A^＊2402四聚体制备及鉴定

目的：构建负载人恶性黑素瘤相关抗原gp100抗原肽的HLA-A^＊2402四聚体并进行鉴定,为分析gp100抗原肽诱发的特异性细胞免疫应答创造条件。方法：以羧基端融合生物素化酶BirA底物肽的HLA-A^＊2402重链胞外域融合蛋白、人β2-微球蛋白、gp100 VYFFLPDHL抗原肽、PE-链亲和素为材料,制备HLA-A^＊2402/VYF四聚体;非还原SDS-PAGE鉴定四聚体四聚化程度;三色免疫荧光标记流式细胞术分析HLA-A^＊2402＋健康志愿者外周血gp100特异性CD8＋T细胞的频率。结果：HLA-A^＊2402/VYF四聚体形成率为83%,所制备的四聚体具有与HLA-A^＊2402＋供者抗原特异性CD8＋T细胞的结合活性,特异性CD8＋T细胞的频率为外周血总CD8＋T细胞的0.02%～0.06%。结论：成功制备HLA-A^＊2402/VYF四聚体并用于检测gp100特异性CD8＋T细胞,为研究HLA-A^＊2402＋黑素瘤患者免疫治疗的机制及疗效监测创造了条件。     

隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV多聚体重组表达及鉴定

目的重组表达隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体，以进一步探讨其免疫效应。方法选取隐球菌抗原表位GMFDGLSGV，引入Th表位PADRE及木马肽序列（RKKRRQRRR），并以RVKR序列作为接头，分别合成隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体全基因序列，经PCR扩增后分别插入融合表达载体pGEX-4T-1，将重组质粒转入大肠埃希氏菌BL21并以IPTG诱导表达，进一步经GST亲舍层析柱纯化，经SDS-PAGE和Western—blot鉴定重组表达蛋白。结果成功构建了隐球菌保护性表位GMFDGLSGV二聚体、四聚体、八聚体的表达质粒，并经IPTG诱导表达了大小约为32000，36000，42000的融合蛋白。结论隐球菌保护性肽表位GMFDGLSGV多聚体的重组表达为进一步开发隐球菌疫苗提供有价值的依据。     

人工抗原呈递细胞复合物体外诱导特异性T淋巴细胞活化的研究

本研究旨在以人工抗原呈递细胞（artificial antigen—presenting cells，amPfs）体外模拟树突状细胞生物学功能，探讨诱导特异性T淋巴细胞活化、增殖的作用。以磁性微珠为载体，选取慢性髓系白血病特异性抗原CML28作为目标抗原肽，通过抗原表位预测软件获取CML28表位序列（Vltfaedsv），并以该抗原表位与MHC分子（HLA—A2-Ig）偶联，作为第一信号分子，B7—1分子作为第二信号分子，将两种信号分子同时负载于磁珠表面，构建人工APC复合体；取HLA—A2^＋的健康骨髓捐赠者骨髓单个核细胞，以磁珠分选出CD8^＋T淋巴细胞并与人工APC复合体系统共培养。培养过程中加入羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（5，6-carboxylfluorescin diacetate succinimidyl ester，CFSE），并以此检测T细胞增殖，用流式细胞仪检测特异性T细胞增殖程度。结果发现：实验组中CML28一特异性T细胞增殖程度明显增高，实验组平均值为（17.34±0．35）％，对照组平均值为（2．25±0．43）％，两者比较差异显著（P〈0．01）。结论：人工APC复合体系统在体外能模拟人体抗原呈递细胞，刺激CD8^＋T特异性淋巴细胞活化、增殖。     

肿瘤抗原特异性细胞毒T细胞和肿瘤免疫治疗

肿瘤抗原特异性细胞毒T细胞(CTL)是重要的抗肿瘤细胞。本文介绍了抗原呈递及CTL识别的分子基础，并对肿瘤相关抗原(TAA)及T细胞表位的鉴定、肿瘤相关抗原肽诱导特异性CTL应答的免疫原性、肿瘤相关抗原肽疫苗治疗肿瘤的原理以及T细胞免疫应用前景做一综述。     

HLA-A~*0201/WT1五聚体联合胞内IFNγ染色在检测白血病患者外周血WT1特异性T细胞中的应用

本研究探讨五聚体及胞内因子染色在定性定量检测抗原特异性T细胞中的应用价值。用RT-PCR方法检测受试者WT1表达水平;用HLA-A*0201/WT1五聚体及胞内IFNγ染色检测14例表达HLA-A*0201的白血病患者全相合移植前后及其供者外周血中的WT1特异性T细胞。结果表明:14例供者中2例有低水平WT1表达,白血病患者均有不同水平的WT1表达。14例供者均未检测到WT1+CD8+CTL和WT1+IFNγ+细胞;移植前14例患者中2例可检出WT1+CD8+CTL,3例检出WT1+IFNγ+细胞,二者间无明显差异(p=0.357),而移植后均可检出WT1+CD8+CTL和WT1+IFNγ+细胞,明显高于移植前(p值均0.01)。移植后大部分患者均在30天内检出WT1+CD8+CTL和WT1+IFNγ+细胞,但后者检出率高于前者(p=0.014)。14例患者中WT1+CD8+CTL峰值中位数为0.18%,而WT1+IFNγ+细胞峰值中位数为0.83%,明显高于前者(p=0.005);WT1+CD8+CTL峰值中位时间为移植后75天,WT1+IFNγ+细胞峰值中位时间为移植后105天,但二者间无明显差异(p=0.455)。结论:五聚体及胞内IFNγ染色能有效检测白血病患者外周血中白血病抗原特异性T细胞;两种方法联合检测有助于抗原特异性T细胞的准确定性定量检测。     

DC/CIK免疫治疗的护理

肿瘤树突状细胞（DC）是体内最有效的专职抗原递呈细胞,通过MHCⅠ、Ⅱ类途径将外源性抗原呈递给CD3＋CD4及CD3＋CD8＋TC,诱导机体产生抗原特异性CTL,识别和杀灭肿瘤细胞,并抑制肿瘤血管生成,同时激发免疫记忆保护。