慢性丙型肝炎自身免疫发病机制的研究

为探讨慢性丙型肝炎自身免疫的发病机制 ,用免疫学方法检测慢性HCV感染者、慢性HBV感染者和健康献血员的血清抗GOR ,ANA和TGA/TMA ,另检测部分慢性HCV感染者和健康献血员血清可溶性Fas(sFas)水平 ;用间接免疫荧光和流式细胞术检测部分慢性HCV感染者和健康献血员外周血淋巴细胞亚群及其凋亡百分率。结果显示 :慢性HCV感染者抗GOR ,ANA和TGA/TMA的阳性率及血清sFas浓度较正常对照组显著增高 (均为 P >0 .0 1) ,较慢性HBV感染者的抗GOR和ANA阳性率亦显著增高 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 ) ;慢性HCV感染者PBMCs及CD+ 3 T淋巴细胞凋亡明显高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ,其抗GOR阳性者CD+ 4T淋巴细胞及CD+ 19B淋巴细胞凋亡比抗GOR阴性者明显减少 (P <0 .0 1和P <0 .0 5 )。表明 :慢性HCV感染者存在自身免疫反应及淋巴细胞凋亡不均衡现象 ;CD+ 4T细胞及CD+ 19B细胞凋亡的减少在慢性HCV感染诱导的自身免疫反应中起重要作用。血清sFas水平升高可能是部分淋巴细胞凋亡减少 ,导致自身免疫的原因之一。     

丙型肝炎病毒感染外周血单个核细胞对丙型肝炎的影响

为了研究丙型肝炎病毒(HCV)感染外周血单个核细胞(PBMC)对丙型肝炎的影响,运用非同位素原位杂交法(NISH)和链酶亲和素-生物素(SABC)法分别检测20例慢性丙型肝炎患者PBMC中的HCV-RNA及其T淋巴细胞亚群,同时检测这些患者的肝功能指标。结果显示8例(40．0％)HCV患者的PBMC中的HCV-RNA呈阳性结果。HCV-RNA呈散在颗粒状或弥漫分布,主要位于胞浆中。HCV-RNA阳性组和阴性组的CD+4T细胞比例低于正常对照组,CD+8T细胞比例高于正常对照组,CD+4／CD+8比值下降;而HCV-RNA阳性组的CD+4T细胞比例则又低于阴性组,CD+8T细胞比例高于阴性组,CD+4／CD+8比值出现倒置(P<0．01)。两组的肝功能检查结果之间无显著差异(P>0．05)。提示HCV感染PBMC后引起T淋巴细胞亚群发生变化,使CD+4和CD+8T细胞功能下降或不能很好地协调作用,从而成为HCV持续感染的重要原因之一。HCV感染PBMC对肝脏炎症程度的影响可能不大。     

中国HGV/HIV合并感染者或HIV单一感染者T淋巴细胞表面CD25和GXCR3表达的研究

目的探讨T淋巴细胞表面CD25分子和趋化因子受体CXCR3,在丙肝病毒(HCV)单一感染,艾滋病病毒(HIV)单一感染和HCV/HIV合并感染过程中的表达及意义.方法分离HCV感染组(n=21),HIV感染组(n=14),HCV/HIV感染组(n=28)及正常对照组(n=30)人外周血单个核细胞.采用流式细胞术,计数CD4+和CD8+T淋巴细胞数,检测外周血CD4+CD25+T细胞百分含量和CD4+和CD8+T淋巴细胞表面CXCR3的表达水平.结果CD4+T细胞表面CD25的表达在HCV感染组轻度升高,而在HIV感染组及HCV/HIV合并感染组CD25的表达显著降低(P＜0.001).HIV感染组及HCV/HIV合并感染组CD4+T细胞表面CXCR3表达显著降低(P＜0.001),CD8+T细胞表面CXCR3表达显著升高(P＜0.001);HCV感染组CD4+及CD8+T细胞表面CXCR3表达轻度升高,但差异不显著.结论结果提示中国病毒感染者外周血T淋巴细胞表面CD25和CXCR3分子表达水平和机体免疫调节功能受到HIV感染的影响.     

慢性HCV感染患者外周血CD81、CD4表达的观测

目的    研究慢性丙型肝炎病毒（HCV）感染患者外周血CD81、CD4的表达,探讨CD81对患者机体免疫系统的调节作用。方法    选择HCV感染患者55例(感染组),健康对照25例（健康对照组）,采用流式细胞术检测其外周血CD81、CD4的表达水平,ELISA法检测血清中白介素 2（IL 2）的含量, RT-PCR法检测血清中HCV RNA的含量。结果    感染组CD81分子的表达水平与血清中HCV RNA的含量呈正相关（r=0.474, P＜0.01）。感染组外周血淋巴细胞中CD81+细胞和CD3+CD4+T细胞中CD3+CD4+CD81+T细胞的数量均高于健康对照组（P＜0.01）,且二者呈正相关（r=0.581, P＜0.01）;感染组CD3+CD4+T细胞的数量和血清中IL 2的含量均显著低于健康对照组（P＜0.05）,且两者呈正相关（r=0.378,P＜0.05）。结论    HCV感染后,HCV RNA的持续存在可能促进细胞表面CD81分子的表达;CD81分子高表达的同时,伴随CD3+CD4+T细胞数量降低,且分泌的细胞因子IL-2减少,参与患者机体的免疫调节。     

辅助性T细胞极化群体在慢性乙型肝炎病毒感染中的作用

目的 了解慢性乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染者外周血中辅助性Ｔ细胞（Ｔｈ）内干扰素－γ（ＩＦＮ－γ）、白细胞介素－４（ＩＬ－４）、和转化生长因子－β（ＴＧＦ－β）的表达情况,以测定Ｔｈ１／Ｔｈ２／Ｔｈ３细胞的百分率、探明Ｔｈ细胞各极化群体在慢性ＨＢＶ感染中的作用。方法 将３６例 性ＨＢＶ感染者分２例,慢性ＨＢＶ感染组和中度慢性乙型肝炎组,每组１８例患者。正常对照组１２名。常规分离外周血单个核然佛波二脂     

丙型肝炎患者外周血单个核细胞HCV和Fas抗原检测

目的：探讨丙型肝炎（丙型）患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）内丙型肝炎病毒抗原（ＨＣＶＡｇ）及Ｆａｓ抗原（ＦａｓＡｇ）表达状况及意义。方法：采用ＨＣＶ核心区及ＮＳ３区单克隆抗体,对２８例慢性丙肝患者ＰＢＭＣｓ进行免疫组化检测,并同步检测ＦａｓＡｇ。结果：ＨＣＶＡｇ及ＦａｓＡｇ阳性率分别为８５．７％（２４／２８）和８２．２（２３／２８）,经相关分析显示。两者表达呈显著正相关（ｒ＝０．５４６,Ｐ〈０．     

激活诱导细胞死亡在乙型肝炎发病机制中的意义

目的　研究激活诱导细胞死亡 (AICD)在乙型肝炎发病机制中的意义。方法　分离 10名健康献血员的外周血单个核细胞 (PBMC) ,设置加HBVDNA阳性血清组与加健康人血清对照组(HBVDNA阴性血清组 ) ,在体外培养 72h ,采用碘化丙啶染色法经流式细胞仪检测凋亡情况并相互比较 ;分离 14例慢性乙型肝炎、6例慢性重型乙型肝炎患者与 10例健康献血员PBMC ,在植物血凝素刺激下培养 72h ,采用碘化丙啶染色法经流式细胞仪检测凋亡情况并相互比较。结果　加HBVDNA阳性血清组培养PBMC凋亡率高于加健康人血清组培养细胞凋亡率 [(39 5 6± 7 0 3) %vs(2 7 5 7± 7 78) % ,P <0 0 5 ]。慢性乙型肝炎组PBMC凋亡率 [(30 5 7± 13 4 3) % ]高于正常对照组PBMC凋亡率 [(11 4 5± 5 2 7) % ,P <0 0 1],高于慢性重型乙型肝炎组PBMC凋亡率 [(13 5 9±6 4 4 ) % ,P <0 0 1]。结论　HBV感染可能具有诱导PBMC凋亡的能力 ,AICD可能是形成HBV慢性感染免疫耐受的一个重要机制。     

慢性乙型肝炎患者与肝癌患者血清可溶性Fas水平研究

目的：了解可溶性Fas(sFas)在肝癌细胞及慢性肝炎中的作用。方法：采用双抗体夹心ELISA法对18例慢性乙型肝炎（CH）患者、12例肝癌患者（HCC）和6例正常对照者（NC）血清sFas进行检测,并对CH患者血清sFas水平与肝细胞损害程度进行相关性分析。结果：HCC患者血清sFas水平比CH患者及NC组明显升高（均P＜0.01);CH患者血清sFas水平与NC组比较差异有显著性（P＜0.01)。CH患者血清sFas水平与血清ALT/AST,ALB,PTA呈负相关（P＜0.01),与血清总胆红素呈正相关（P＜0.01)。结论：sFas可阻止肝癌细胞凋亡的发生,而慢性乙型肝炎患者sFas与肝脏重症程度具有相关性。     

慢性HCV感染者血清白细胞介素-10水平的变化及其意义

目的探讨白细胞介素(IL)-10在丙型肝炎病毒(HCV)致病过程中的作用。方法用酶联免疫吸附法(ELISA)检测44例慢性HCV感染者、30例健康对照者血清中IL-10的水平。用定量PCR法检测血清HCV-RNA水平。结果慢性HCV感染者的血清IL-10水平明显高于健康人(P<0.001)并且与丙氨酸氨基转移酶(ALT)的水平呈正的直线关系(P<0.01);慢性HCV感染者中,肝硬化组IL-10的水平较慢性丙型肝炎组有所降低(P<0.01);慢性HCV感染者的IL-10水平与血清HCV-RNA水平无相关性(P>0.05)。结论机体的IL-10应答参与了慢性HCV感染者的肝脏损害过程,并且可能是影响丙型肝炎慢性化的因素之一;IL-10产生的降低可能与慢性HCV感染者的肝纤维化和肝硬化有关。     

慢性丙型肝炎患者血清自身抗体检测的研究

目的观察慢性丙型肝炎患者血清自身抗体检测结果,探讨自身免疫在丙型肝炎病毒(HCV)感染中的意义。方法回顾性分析北京大学第一医院慢性丙型肝炎患者自身抗体的阳性情况,并探讨HCVRNA含量、HCV基因型、肝硬化发生率、干扰素治疗应答率、年龄、性别及肝功能与自身抗体的关系。结果(1)69例慢性丙型肝炎患者中有20例出现自身抗体阳性,检出率为28.9%(20/69),自身抗体以低滴度为主,主要为抗核抗体,明显高于慢性乙肝组的自身抗体检出率4.3%(3/69,P<0.05);明显低于自身免疫性肝炎组的自身抗体检出率100%(P<0.05)。(2)慢性丙型肝炎患者自身抗体阴性、阳性组之间HCVRNA含量、HCV基因型比较差异无统计学意义。(3)慢性丙型肝炎患者经α干扰素抗病毒治疗后,自身抗体阳性组干扰素应答率(77.8%)高于自身抗体阴性组应答率(51.2%,P<0.05)。(4)自身抗体在年龄长者中检出率较高,差异有统计学意义(P<0.05),而与性别无关。(5)自身抗体阳性组肝硬化发生率(80%)高于阴性组(46.9%,P<0.05)。(6)自身抗体阳性的慢性丙型肝炎患者的血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、谷氨酸氨基转移酶(AST)、总胆红素(TBIL)以及γ球蛋白均高于自身抗体阴性患者(分别为191U/L±89U/Lvs113U/L±69U/L,169U/L±80U/Lvs98U/L±62U/L,78μmol/L±50μmol/Lvs51μmol/L±30μmol/L,200g/L±80g/Lvs160g/L±70g/L,均P<0.05)。结论HCV感染能诱导自身免疫反应,使患者血清出现多种自身抗体,自身抗体的检出率与肝硬化和年龄明显有关,检测其自身抗体及其滴度对丙型肝炎患者的临床诊疗具有指导意义。