LINC00707靶向miR-374a-3p对LPS诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响北大核心CSCD

目的:研究长基因间非编码RNA 00707(LINC00707)靶向miR-374a-3p对脂多糖(LPS)诱导的肺上皮细胞炎症因子释放和凋亡的影响。方法:采用10μg/ml LPS处理肺上皮细胞BEAS-2B建立细胞损伤模型,并分为对照组(Con)、LPS组、LPS+si-NC组、LPS+si-LINC00707组、LPS+miR-NC组、LPS+miR-374a-3p组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组、LPS+si-LINC00707+anti-miR-374a-3p组。RT-qPCR检测LINC00707和miR-374a-3p表达;ELISA试剂盒检测细胞培养液中IL-6和IL-1β水平;流式细胞仪检测BEAS-2B细胞凋亡率。双荧光素酶报告实验分析LINC00707和miR-374a-3p的靶向关系。结果:与Con组比较,LPS组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量、LINC00707表达显著升高(P<0.05),miR-374a-3p表达显著降低(P<0.05)。与LPS+si-NC组比较,LPS+si-LINC00707组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。与LPS+miR-NC组比较,LPS+miR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著降低(P<0.05)。miR-374a-3p是LINC00707的靶基因,LINC00707负调控miR-374a-3p表达。与LPS+si-LINC00707+anti-miR-NC组比较,LPS+si-LINC00707+antimiR-374a-3p组BEAS-2B细胞凋亡率、IL-6和IL-1β释放量显著升高(P<0.05)。结论:干扰LINC00707通过靶向上调miR-374a-3p抑制LPS诱导的肺上皮细胞凋亡和炎症因子释放。     

人鼻病毒1B感染致人肺支气管上皮细胞代谢组改变的研究

目的:探讨人鼻病毒1B (human rhinovirus 1B, HRV1B)感染对人肺支气管上皮细胞BEAS-2B代谢组改变的影响。方法:HRV1B感染BEAS-2B细胞6 h和12 h后,采用非靶向代谢组学技术研究BEAS-2B细胞代谢组的改变情况。结果:HRV1B感染BEAS-2B细胞6 h和12 h分别有93...     

A549肺癌细胞条件培养液促进人骨髓间充质干细胞的增殖和迁移

目的:探讨A549肺癌细胞对人骨髓间充质干细胞(hBMSCs)增殖和运动的影响.方法:以提取A549肺癌细胞和BEAS-2B正常人肺上皮细胞上清液制备条件培养基,培养的hBMSCs分别为A549组和BEAS-2B组;2组均添50 nmol/L趋化因子-8(CXCL-8),分别为A549 C组和BEAS-2B C组,若同...     

气道内高压力促进3种气道重塑相关因子的表达

目的探讨机械通气情况下气道内不同压力水平对气道重塑相关因子表达的影响。方法手术室经全麻行机械通气的42例慢性阻塞性肺疾病(COPD)作为COPD组和33例无基础肺疾病患者作为对照组。机械通气根据吸气峰压(PIP)水平又分为高、中、低压力组(分别为24、22和20 cm H_2O),呼气末正压均为5 cm H_2O。机械通气前及3 h后收集支气管肺泡灌洗液(BALF)。酶联免疫吸附法和Western blot法检测BALF中气道重塑相关因子成纤维生长因子2(FGF-2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达水平。结果 1)机械通气前COPD组BALF中的FGF-2、TGF-β1和MMP-9蛋白水平明显高于对照组(P0.01)。2)机械通气后对照组在高压力刺激下FGF-2、TGF-β1和MMP-9表达水平升高(P0.05);而COPD组压力刺激下上述3种蛋白表达升高更明显(P0.05),且高压力组中及低压力组(P0.05)。3)相关性分析显示,COPD组BALF中FGF-2、TGF-β1、MMP-9表达水平与气道压力成正相关(P0.01)。结论机械通气时气道内的持续高压力可能通过作用于气道上皮细胞内压力敏感通道进而提高气道重塑因子FGF-2、TGF-β1、MMP-9的表达水平,COPD患者尤为显著。     

N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸对人肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞转化的调节作用

目的:探讨N-乙酰基-丝氨酰-天门冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸(Ac-SDKP)是否通过对转化生长因子-β1(TGF-β1)介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路活化的调节,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向间质细胞转化,即上皮-间质转化(EMT),进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.方法:培养人A549肺泡Ⅱ型上皮细胞株,免疫细胞化学显色检测角蛋白、波形蛋白及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达;免疫印迹检测E-钙黏蛋白(E-cad)、波形蛋白及Rho相关卷曲蛋白激酶(ROCK)、血清反应因子(SRF)、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达;Real-Time PCR检测ROCK、SRF、α-SMA的表达情况.结果:在TGF-β1的诱导下,上皮细胞向肌成纤维细胞的形态改变,伴随着上皮标志物角蛋白、E-cad降低,而间质细胞标志物波形蛋白增高,α-SMA表达并增多.与对照组相比,TGF-β1诱导刺激组ROCK、SRF、α-SMA蛋白和基因表达水平上调,Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白表达上调.给予ROCK阻滞剂Y-27632、Ac-SDKP干预后,ROCK、SRF、α-SMA及Ⅰ型、Ⅲ型胶原表达显著降低.结论:Ac-SDKP通过阻断TGF-β1介导的ROCK/SRF/α-SMA信号转导通路,阻抑肺泡Ⅱ型上皮细胞向肌成纤维细胞的转化及胶原的合成,进而发挥其抗(矽)肺纤维化的作用.     

姜黄素抑制肺上皮细胞BEAS-2B真菌产生炎症细胞因子的作用

目的探讨姜黄素(Cur)抑制肺上皮细胞BEAS-2B真菌产生炎症细胞因子的作用。方法黄曲霉菌(AFT)感染肺上皮细胞BEAS-2B后,用不同浓度的姜黄素(10μmol/L、25μmol/L、50μmol/L)进行抗炎抑制作用。采用ELISA法检测细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TLR4和NF-κB的表达水平;采用Western blot和Real-time PCR检测重组高迁移率族蛋白B1(high mobility group box 1,HMGB1)、TLR4和NF-κB蛋白和m RNA表达。结果随着姜黄素剂量的升高,细胞上清液中炎症因子TNF-α、IL-Iβ、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、TLR4和NF-κB的表达显著降低(P0.05);HMGB1、TLR4和NF-κB蛋白和m RNA表达明显降低(P0.05)。结论姜黄素调节TLR4/NF-κB信号通路来产生抗炎作用,可以抑制真菌刺激肺上皮细胞BEAS-2B产生炎症细胞因子。     

葡萄籽原花青素抑制肺癌A549细胞侵袭和迁移

目的探讨葡萄籽原花青素(GSP)对肺癌A549细胞侵袭、迁移能力的影响。方法用台盼蓝法检测不同剂量GSP对BEAS-2B人正常肺上皮细胞的毒性作用;用(0、10、20、40、80)μg/m L GSP处理A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平;TranswellTM实验检测A549细胞的侵袭力;细胞划痕实验检测A549细胞迁移力;Western blot法测定A549细胞中表皮生长因子受体(EGFR)、上皮钙黏素(E-cadherin)、神经钙黏素(N-cadherin)的蛋白水平。结果 (0~40)μg/m L GSP对BEAS-2B正常肺上皮细胞无明显毒性作用,80μg/m L GSP毒性作用明显。GSP以剂量依赖的方式抑制A549细胞的增殖;细胞侵袭和迁移能力均显著下降;与对照组相比,Western blot结果显示GSP作用A549细胞后,EGFR和N-cadherin蛋白表达降低,E-cadherin蛋白表达升高。结论 GSP可通过抑制A549细胞EGFR、N-cadherin的表达并增强E-cadherin的表达,抑制A549细胞的增殖、侵袭和迁移。     

周期性机械牵张对人肺泡上皮细胞穿透素-3表达的影响

目的探讨人肺泡上皮细胞穿透素-3(PTX3)在呼吸机相关性肺损伤中的可能作用。方法应用FX4000T细胞应变加载系统,对体外培养的人肺泡上皮细胞A549周期性施加20%应变,频率为0.3Hz,加载时间为1、2、4、6h,然后采用实时定量RT-PCR检测肺泡上皮细胞PTX3表达的变化、Western blot检测分泌到培养液上清PTX3蛋白,同时检测细胞活性。结果(1)周期性牵张诱导肺泡上皮细胞表达PTX3;(2)牵张引起肺泡上皮细胞的凋亡;(3)PTX3的水平与肺泡上皮细胞的凋亡水平显著相关。结论本研究提示PTX3在呼吸机相关性肺损伤的发病机制中可能起重要的作用。     

转化生长因子β_1通过赖氨酰氧化酶调控低氧诱导的大鼠支气管上皮细胞间充质转化

目的:探讨转化生长因子β_1(transforming growth factor-β_1,TGF-β_1)是否通过赖氨酰氧化酶(lysyl oxidase,LOX)参与低氧诱导的大鼠支气管上皮细胞间充质转化。方法:24只SD大鼠随机均分为常氧组、低氧组以及低氧+β-氨基丙腈(β-aminopropionitrile,β-APN)组。体外培养大鼠支气管上皮细胞,分为常氧组、TGF-β_1组、TGF-β_1+SB431542(TGF-β_1受体拮抗剂)组、低氧组、低氧+SB431542组以及低氧+β-APN组。比色法测定并计算胶原蛋白交联,免疫组织化学法和Western blot检测大鼠支气管上皮细胞TGF-β_1、LOX、E-钙黏蛋白(E-cadherin)以及波形蛋白(vimentin)的蛋白表达。结果:在大鼠动物模型中,低氧组支气管上皮细胞TGF-β_1、LOX、vimentin蛋白表达以及胶原交联均明显高于常氧组,但E-cadherin蛋白表达则明显弱于常氧组,低氧对vimentin、E-cadherin蛋白表达以及胶原交联的影响均能被β-APN所逆转。离体细胞实验显示,常氧组大鼠支气管上皮细胞为铺路石状形态,TGF-β_1组和低氧组大鼠支气管上皮细胞形态逐渐向梭形上皮间充质细胞转化,而β-APN能逆转大鼠支气管上皮间充质细胞转化。TGF-β_1能诱导大鼠支气管上皮细胞LOX蛋白表达,呈浓度依赖性,并被SB431542所阻断。与常氧组比较,低氧组离体培养的大鼠支气管上皮细胞TGF-β_1、LOX和vimentin表达及胶原交联明显升高,SB431542能明显下调TGF-β_1或低氧诱导的大鼠支气管上皮细胞LOX和vimentin的表达及胶原交联;TGF-β_1组和低氧组离体培养的大鼠支气管上皮细胞E-cadherin表达减弱,SB431542能逆转TGF-β_1或低氧培养的大鼠支气管上皮细胞E-cadherin的表达。结论:TGF-β_1介导LOX表达,促进低氧诱导的大鼠支气管上皮细胞间充质转化。     

核心蛋白聚糖对TGFβ1诱导的人肾小管上皮细胞产生胶原的影响

目的:探讨核心蛋白聚糖对转化生长因子β1(TGFβ1)诱导的人近端肾小管上皮细胞(HK-2)Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响。方法:将体外培养的HK-2细胞分为:(1)阴性对照组;(2)10μg/LTGFβ1组;(3)TGFβ1(10μg/L) (10μg/L)核心蛋白聚糖组;(4)TGFβ1(10μg/L) (100μg/L)核心蛋白聚糖组。倒置显微镜下观察加入刺激因子48h后肾小管上皮细胞的细胞形态学改变;应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)观察不同浓度的核心蛋白聚糖对HK-2细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达变化的影响。结果:加入刺激因子48h后,(1)组细胞形态与正常HK-2细胞形态基本一致,大部分仍为椭圆形;(2)组细胞形态发生明显的变化,大部分细胞由椭圆形拉长为长梭形;(3)和(4)组,梭形样细胞明显减少,尤其是(4)组梭形样细胞减少更为明显。(2)组HK-2细胞Ⅰ型胶原mRNA表达上升到(1)组的27.86倍,Ⅲ型胶原mRNA的表达上升到(1)组的21.83倍。(3)和(4)组与(2)组相比,Ⅰ型胶原mRNA的表达分别下降了36.39%、53.36%,Ⅲ型胶原mRNA的表达分别下降了26.35%、47.96%(P<0.05),但仍未下降到正常水平。结论:核心蛋白聚糖能抑制TGFβ1诱导的人近端肾小管上皮细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达,可能是核心蛋白聚糖抑制肾间质纤维化的原因之一。     

TAK1通过调控p38 MAPK信号通路影响肾小管上皮细胞纤维化

目的:探讨转化生长因子β激活激酶1(TAK1)对肾小管上皮细胞纤维化的影响及机制。方法:以肾小管上皮细胞HK-2作为研究对象,用转化生长因子β1(TGF-β1)诱导肾小管上皮细胞纤维化,以real-time PCR和Western blot检测细胞中TAK1表达的变化。用TAK1 shRNA慢病毒感染肾小管上皮细胞,以real-time PCR和Western blot检测其对TGF-β1刺激下肾小管上皮细胞中TAK1表达的影响以检测干扰效果。ELISA法检测细胞分泌的I型胶原和III型胶原水平,Western blot法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、结缔组织生长因子(CTGF)和磷酸化的p38 MAPK(p-p38 MAPK~(Thr 180/Tyr 182))的蛋白水平。用p38 MAPK激活剂处理已敲减TAK1表达的肾小管上皮细胞,检测其对细胞分泌I型胶原和III型胶原的影响及对细胞中α-SMA、CTGF和p-p38 MAPK~(Thr 180/Tyr 182)蛋白水平的影响。结果:TGF-β1可以明显上调肾小管上皮细胞中TAK1的表达水平。TAK1 shRNA可明显下调TGF-β1刺激下的肾小管上皮细胞中TAK1的表达水平。TGF-β1处理后的肾小管上皮细胞分泌I型胶原和III型胶原增多,细胞中α-SMA、CTGF和p-p38 MAPK~(Thr 180/Tyr 182)蛋白水平升高。敲减TAK1表达可以明显抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞分泌I型胶原和III型胶原,减少细胞中α-SMA、CTGF和p-p38 MAPK~(Thr 180/Tyr 182)的蛋白水平(P0.05)。p38 MAPK激活剂处理可以逆转敲减TAK1表达对肾小管上皮细胞分泌I型胶原和III型胶原及α-SMA、CTGF和p-p38 MAPK~(Thr 180/Tyr 182)蛋白水平的抑制作用。结论:敲减TAK1表达能够通过抑制p38 MAPK信号通路而降低TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞纤维化水平。     

抑制Wnt/β-catenin信号和NOX4表达阻碍二氧化硅诱导肺上皮细胞损伤的修复

目的 探究Wnt/β联蛋白(β-catenin)信号和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(NOX4)相互作用对二氧化硅(SiO2)诱导的肺脏上皮细胞增殖的影响.方法 采用二氧化硅气道滴灌C57BL/6小鼠制备小鼠矽肺模型,免疫组织化学染色法检测矽肺模型小鼠肺组织NOX4的表达;二氧化硅刺激BEAS-2B人肺上皮细胞...     

细胞外调节蛋白激酶信号通路参与机械牵张诱导肺泡上皮细胞高迁移率族蛋白B1的表达调控

目的 探讨细胞外调节蛋白激酶（ERK）信号通路在机械牵张诱导肺泡上皮细胞（A549）表达高迁移率族蛋白B1（HMGB1）中的作用。 方法 肺泡上皮细胞A549分为A、B、C 3组,A组为对照组;B组A549细胞施加14%牵张应变,牵张时间为4 h;C组细胞的牵张模式与B组相同,只是于施加牵张前用ERK的特异性抑制剂PD98059预处理A549细胞2h。分别用免疫细胞化学染色和RT-PCR检测细胞HMGB1蛋白和mRNA的表达,用Western blotting检测ERK激酶的活性。 结果 A549细胞施加14 %牵张应变后,HMGB1蛋白和mRNA表达明显增加,ERK激酶活性明显增高（P＜0.05）;该诱导激活作用可被PD98059阻断。 结论 机械牵张通过ERK信号通路,调节A549细胞的HMGB1基因和蛋白表达。     

Apelin抑制TGF-β诱导的人肾小管上皮-间充质细胞转换

目的探讨多肽Apelin对转化生长因子β(TGF-β)诱导的人肾小管上皮-间充质细胞转换(EMT)的抑制作用及其机制。方法体外培养人近端肾小管上皮细胞,分别给予含TGF-β1(2μg/L)和/或不同浓度Apelin-13的培养基孵育细胞48 h,设立6个实验组(每组n=5):对照组、TGF-β组、TGF-β+Apelin(10-8,10-7和10-6mol/L)组和Apelin(10-6mol/L)组。刺激结束后,用免疫荧光染色观察细胞的上皮标志物E-钙黏素(E-cadherin)、间充质标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的分布和表达。Western blot检测细胞中E-cadherin、α-SMA及Smads信号通路的主要信号分子p-Smad2/3、Smad2/3和Smad-7的蛋白表达。RT-PCR法检测细胞外基质纤维连接蛋白(FN)、Ⅰ型胶原(Col-Ⅰ)及细胞自身Apelin和APJ受体的mRNA表达量。结果与对照组相比TGF-β组细胞为长梭形,E-cadherin的表达减少,α-SMA的表达增多,细胞外基质FN和Col-Ⅰ的mRNA表达量也显著升高;TGF-β+Apelin组上述效应被显著抑制,且呈浓度依赖性。与TGF-β组相比,TGF-β+Apelin组细胞活化型Smads的水平降低(P0.05),Smad7的表达增加(P0.05)。TGF-β组细胞自身APJ受体的表达量显著升高(P0.05),TGF-β+Apelin组上述效应受到抑制,且呈浓度依赖性。结论 Apelin干扰TGF-β/Smads信号通路从而抑制肾小管上皮细胞EMT;肾小管上皮细胞自身Apelin/APJ系统可能起到一定的代偿作用。     

CCN1在脂多糖诱导急性肺损伤中的表达调控和在炎症反应中的作用

目的:体内观察富半胱氨酸蛋白61(CYR61/CCN1)在正常肺组织中的表达定位和在脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤中的表达变化,体外研究LPS调控CCN1表达的分子机制和CCN1在LPS诱导炎症介质表达中的作用。方法:分别通过免疫组化(IHC)染色及免疫荧光法观察CCN1在小鼠肺组织和气道上皮细胞16HBE中的表达定位;气道滴注LPS建立小鼠急性肺损伤模型,IHC观察CCN1在肺组织中的表达变化;体外研究中,分别予气道上皮16HBE细胞以ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂预处理2 h后加入LPS刺激,通过RT-qPCR和Western blot检测CCN1的mRNA和蛋白表达变化;分别通过CCN1-siRNA和重组CCN1蛋白刺激16HBE细胞,qPCR检测炎症介质白细胞介素6(IL-6)、IL-8、转化生长因子β(TGF-β)和血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA水平。结果:CCN1在正常肺组织中以气道上皮表达为主,在LPS诱导的急性肺损伤小鼠气道上皮细胞中CCN1表达升高;LPS可刺激16HBE细胞中CCN1的表达水平升高,其中ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路特异性抑制剂可以不同程度逆转LPS诱导的CCN1表达升高。重组CCN1蛋白可以诱导16HBE细胞中IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成,干扰CCN1可以部分逆转LPS刺激后IL-6、IL-8、TGF-β和VEGF的mRNA合成。结论:气道上皮来源的CCN1在急性肺损伤中表达升高,其表达调控涉及ERK1/2、JNK、P38和PI3K信号通路;CCN1在介导LPS诱导的炎症介质表达过程中发挥了重要作用。本研究为未来急性肺损伤诊治的潜在靶点提供了一定的理论基础。     

锌离子对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响及机制

目的研究锌离子对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的肾小管上皮细胞转分化(EMT)的影响。方法常规培养肾小管上皮细胞、传代、分组:①正常对照组;②TGF-β1组(10ng/ml TGF-β1作用48h);③ZnSO_4作用组(30μM ZnSO_4作用24h后,加10ng/ml TGF-β1作用48h)。采用相差显微镜观察各组细胞表型改变,免疫荧光及Western blotting方法检测波形蛋白(vimentin)、上皮钙黏素(E-cadherin)、Ⅰ型胶原酶(collagenⅠ)蛋白表达。应用Western blotting检测p-Akt蛋白表达。结果 TGF-β1可以导致肾小管上皮细胞vimentin、collagenⅠ和p-Akt蛋白表达增高,使E-cadherin蛋白表达降低。ZnSO_4作用后可有效降低由TGF-β1导致的肾小管上皮细胞vimentin、collagenⅠ及p-Akt的高表达,同时使E-cadherin蛋白表达增多。结论 ZnSO_4阻抑TGF-β1所致的肾小管上皮细胞的EMT,其作用可能与PI-3K/Akt信号通路相关。     

肺痹方干预肺纤维化模型小鼠细胞外基质转化的机制

背景:肺组织损伤修复过程中,细胞外基质成分首先填补损伤肺组织,当其过度沉积时可形成肺间质纤维化。目的:探讨肺痹方对博莱霉素致肺纤维化小鼠细胞外基质转化的干预作用。方法:将60只C57BL/6雄性小鼠随机分为空白对照组、模型组、吡非尼酮组、肺痹方低剂量组、肺痹方中剂量组、肺痹方高剂量组,每组10只。除空白对照组外,其余5组腹腔注射博莱霉素[7.5 mg/(kg·d)]建立肺纤维化模型,连续注射10 d。造模后第1天各药物组灌胃给药[51.43 mg/(kg·d)]吡非尼酮,[6.43,12.86,25.72 mg/(kg·d)肺痹方],连续给药28 d。用药28 d后取肺组织,采用苏木精-伊红染色和Masson染色观察小鼠肺组织的形态学变化,ELISA法检测血清中转化生长因子β1、肿瘤坏死因子α水平,Western blot法检测肺组织中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的表达。结果与结论:①与空白对照组相比,各组小鼠血清转化生长因子β1水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,吡非尼酮组、肺痹方中剂量组、肺痹方高剂量组血清转化生长因子β1水平显著降低(P<0.05,P<0.01),肺痹方高剂量组降低最明显;②与模型组相比,用药各组血清肿瘤坏死因子α水平明显降低(P<0.01),用药各组之间两两比较差异无显著性意义(P>0.05);③与空白对照组相比,各组α-平滑肌肌动蛋白表达均不同程度增高(P<0.05,P<0.01);肺痹方高剂量组α-平滑肌肌动蛋白表达低于肺痹方低、中剂量组,差异有显著性意义(P<0.05);④与空白对照组相比,模型组、肺痹方低剂量组Ⅰ型胶原表达增高(P<0.05,P<0.01);与模型组相比,肺痹方中、高剂量组Ⅰ型胶原表达降低(P<0.05);⑤与空白对照组相比,各组Ⅲ型胶原表达均不同程度增高(P<0.05,P<0.01);肺痹方中、高剂量组以及吡非尼酮组Ⅲ型胶原表达明显低于肺痹方低剂量组(P<0.05,P<0.01);⑥结果表明,肺痹方可以减轻肺纤维化,抑制博来霉素诱导的肺纤维化小鼠细胞外基质转化,其机制可能与下调血清中转化生长因子β1、肿瘤坏死因子α水平,抑制肺组织中α-平滑肌肌动蛋白、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达有关。     

己糖激酶2通过抑制线粒体凋亡通路减少LPS引起的人肺上皮BEAS-2B细胞凋亡

目的:探讨脂多糖(LPS)诱导人正常肺上皮BEAS-2B细胞凋亡的分子机制,并对己糖激酶2(HK2)在该效应中的作用进行分析。方法:采用不同浓度的LPS作用于BEAS-2B细胞建立损伤模型,CCK-8实验检测细胞存活率; Hoechst 33342染色及Annexin V/PI双染法分析细胞凋亡水平;通过使用线粒体凋亡通路抑制剂或者外在凋亡通路抑制剂鉴定细胞凋亡通路;在BEAS-2B细胞中转染HK2过表达质粒以验证HK2对上述效应的影响。Western blot法确认HK2过表达效果;免疫荧光实验检测HK2亚细胞定位。结果:CCK-8实验结果显示,LPS以时间和剂量依赖性方式降低BEAS-2B细胞活力; Hoechst 33342染色结果表明,给予LPS处理后的BEAS-2B细胞核出现固缩和碎裂;同时Annexin V/PI双染实验结果表明,处于凋亡状态的细胞由2. 89%增加至42. 4%,细胞凋亡率明显升高(P 0. 05)。线粒体凋亡通路执行蛋白caspase-9特异性抑制剂可显著抑制细胞凋亡,而caspase-8抑制剂却无此效应。在BEAS-2B细胞的凋亡过程中伴随着HK2的表达下调,而HK2过表达可以有效阻止以上事件的发生。结论:己糖激酶2可通过抑制线粒体凋亡通路减少LPS引起的人肺上皮细胞凋亡。     

YKL-40调控支气管上皮分泌IL-8对支气管平滑肌细胞增殖和迁移的影响

目的:研究YKL-40介导支气管上皮细胞的炎症反应及对支气管平滑肌细胞增殖和迁移的影响。方法:体外培养支气管上皮永生细胞系(BEAS-2B)和原代人支气管上皮细胞(HBECs),用不同浓度的YKL-40刺激BEAS-2B和HBECs不同时间后,用Realtime PCR和ELISA方法检测炎症细胞因子的变化。YKL-40刺激BEAS-2B和HBECs 6 h后,更换新鲜培养基继续培养18 h后收集细胞培养液,命名为(YKL-40-BEAS-2B-CM、YKL-40-HBECs-CM),用于培养支气管平滑肌细胞(BSMCs)。24 h后检测BSMCs迁移能力的变化,72 h后检测BSMCs增殖能力的变化。结果:在BEAS-2B和HBECs中,YKL-40均能以浓度和时间依赖方式增强IL-8 mRNA的表达和IL-8的分泌,但对RANTES、Eotaxin,TNF-α没有影响。YKL-40-BEAS-2B-CM和YKL-40-HBECs-CM刺激BSMCs能显著增强其增殖能力和迁移能力,但去除YKL-40-BEAS-2B-CM和YKL-40-HBECs-CM中的IL-8后,则未见其可以明显提高BSMCs的增殖和迁移能力。结论:YKL-40通过调控支气管上皮表达和分泌IL-8参与了哮喘时的气道炎症反应,进一步通过影响支气管平滑肌细胞的增殖和迁移介导哮喘时的气道重构。抑制IL-8有望成为控制YKL-40介导的哮喘炎症反应和组织重构的有效干预措施。     

严重急性呼吸综合征肺部病变发展过程的形态观察

目的探讨严重急性呼吸综合征(SARS)肺部病变发展过程中组织形态和免疫表型的变化.方法对4例SARS的肺标本进行病理形态和1例超微结构观察,并作VG、Masson、网状纤维、地依红、PAS和天狼猩红组织化学染色及采用链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法作结蛋白、波形蛋白、细胞角蛋白(CK)、上皮膜抗原(EMA)、平滑肌肌动蛋白(SMA)、HHF-35、CD34、CD68、bel-2、第八因子相关抗原(FⅧRAg)、AE1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原免疫组织化学标记.结果依病程及病变损害程度分为3期.急性渗出期2例病程＜20 d.以急性渗出性肺泡炎、肺泡上皮细胞增生,坏变和肺透明膜形成、脱屑性肺炎为主要病变,局部有纤维母细胞增生;肺泡内渗出蛋白PAS阳性,网状纤维增多并断裂,纤维母细胞明显增多,结蛋白、波形蛋白阳性.纤维增殖期1例病程25 d.以增殖性间质肺炎为主,早期纤维化表现为机化性肺炎和血管周围机化性改变.网状纤维呈肾小球样增生,间叶细胞向肌纤维母细胞分化,结蛋白、HHF-35、SMA、波形蛋白呈强阳性;向平滑肌细胞分化结蛋白、SMA呈阳性,波形蛋白阴性;向纤维母细胞分化仅波形蛋白阳性,并见弹力纤维增多,断裂,胶原纤维增生.纤维化期1例75 d.以弥漫性纤维化,以纤维增生为主的伴蜂窝肺形成.天狼猩红染色胶原纤维显红色,波形蛋白和SMA弱阳性,Ⅰ、Ⅳ胶原纤维明显增多.各期巨噬细胞均增多,CD68阳性.结论SARS肺部病变可分为3期,随病程延长,肺纤维化进行性加重;肺泡壁原始间叶细胞,肺泡上皮细胞增生、损伤和增生的巨噬细胞在肺纤维化中起着重要作用.