转基因番茄口服疫苗的研究进展

<正>第1例转基因烟草表达链球菌变异株SpaA(surface protein antigen A)蛋白疫苗的成功研制[1],开启了利用植物表达动物病原抗原蛋白的新纪元。1992年,Mason等[2]提     

病毒转基因番茄疫苗研制现状

番茄（Lycopersicon esculentum）是一种优良的蔬菜品种,应用基因工程技术对番茄进行开发和改造已成为国内外研究的热点。本文综述了肝炎病毒、轮状病毒、呼吸道合胞病毒、HIV1病毒、狂犬病毒、诺沃克病毒、口蹄疫病毒、肠病毒71和植物花叶病毒等的转基因番茄的研制现状。     

PELA作为防龋基因疫苗投递系统的体外研究

为了解聚乳酸 -聚乙二醇共聚物(PELA)作为防龋基因疫苗的投递系统的可行性、有效性和安全性 ,作者用PELA包被本室构建的防龋基因疫苗pEGFPC1 pacA ,对DNA/PELA微球制备方法、微球特征以及体外转染进行了初步研究。微球采用改进的溶剂挥发法双乳液(W1/O/W2 )体系制备。 1.0 5mg/ml高纯度的重组质粒pEGFPC1 pacA水溶液作为内水相W1,PELA的二氯甲烷溶液作为油相O ,2 .0 %的PVA溶液作为外水相W2。用溶剂抽提法 (5 %的异丙醇水溶基金项目 :国家自然科学基金 ( 2 0 0 40 0 9) ;973项目作者单位 :610 0 41成都 ,四川大学华西基础医…     

改良品质的转基因番茄研制现状

番茄（Lycopersicon esculentum）是一种优良的蔬菜品种,应用基因工程技术对番茄进行开发和改造已成为国内外研究的热点。本文综述了延迟成熟品种、耐盐品种和耐寒品种的转基因番茄的研制现状。     

D,L-聚乳酸-聚乙二醇嵌段共聚物微球防龋基因疫苗的体外研究

目的 制备防龋基因疫苗的DNA／PEIA微球,并研究其在真核细胞中的表达情况。方法采用改进的溶剂挥发法双乳液(W1/O／W2)体系制备基因疫苗的DNA／PELA微球;测定了微球的形态大小、包封率及细胞毒性,将基因疫苗微球转染哺乳动物细胞,用流式细胞仪和RT-PCR测定在其中表达的情况。结果制备的DNA／PELA复合物多呈球状,平均粒径1．806μm,对细胞无毒性,可在体外转染哺乳动物细胞,并能正确地转录表达;结果证实基因疫苗微球转染效率低,提示微球中的DNA具有缓慢释放的特征。结论PEIA可作为防龋基因疫苗的投递系统,是一种安全、有效的释放体系。     

利用转基因植物生产口服疫苗

利用转基因植物生产口服疫苗,以其成本低廉、使用安全可靠、易推广应用已经成为植物疫苗研究中的热点。本文从转基因植物口服疫苗的作用机理、表达效果的验证、以及目前研究进展做一简要概述。     

病毒转基因植物疫苗研究进展

病毒转基因植物疫苗是一种新型病毒疫苗.本文综述了19种病毒转基因植物疫苗的构建及其作用机制等方面的研究进展.     

转基因植物口服疫苗研究的新进展

人和动物的许多疾病是通过病原微生物与消化道、呼吸道和生殖道的表面黏膜接触引起的，如乙型肝炎、伤寒、霍乱、痢疾和胃肠炎等。在发展中国家，因为缺少资金购买或生产昂贵的疫苗和医疗设备，患病情况尤为严重。用植物作为生物反应器来生产重要的、有经济价值的药用蛋白，不需要通过常规发酵反应器，仅仅依赖于农业，其成本低廉，容易形成规模生产，Fischer等将此技术特称为“分子农业”。目前，已成功研制出多种转基因植物生产的医疗药用多肽和蛋白质，尤其是作为口服疫苗在动物和临床应用中的试验成功，提示这种新的用药途径将对人类的健康起到重大的作用。     

可食性转基因植物疫苗的免疫学特性研究

转基因植物疫苗是疫苗研究的一个新热点,本文综述了转基因植物疫苗在体诱导的免疫学特点,包括实验动物和人免疫应答情况,讨论了未来转基因植物疫苗研究重点及将面临的问题和解决对策,并对其应用前景提出展望.     

转基因植物口服疫苗的免疫机制研究进展

植物作为新型的生物反应器正日益受到关注,转基因植物以其独有的可食(饲)性成为疫苗研究的热点之一。目前转基因植物口服疫苗的可行性已逐步得到证实,但相关的免疫机制尚在进一步的探索之中。实验证实植物细胞壁类似天然的“生物胶囊”,可在一定程度上保护表达在植物细胞内的疫苗抗原蛋白抵御消化道酶的作用。使疫苗抗原特异地定位表达于植物细胞的内质网、叶绿体等细胞器中,以及将抗原蛋白组装成病毒样颗粒,也均可增强其抗消化能力。适当选用免疫佐剂等可增强转基因植物疫苗免疫保护反应,选择合适的启动子等可提高目的基因在转基因植株中的表达量,这些均是增强转基因植物口服疫苗免疫保护反应、避免免疫耐受的可行策略。     

外源基因在转基因蚊虫中表达的研究进展

利用转基因技术对蚊虫进行遗传修饰使其密度下降或降低其传播疾病的能力是控制蚊媒传染病的一个新策略。其核心问题是外源基因在转基因蚊虫体内的表达。本文从转基因蚊虫的表达载体、外源基因表达特性及效应、转基因蚊虫研究存在的问题及发展前景等方面对该领域的研究进展进行了综述。     

HCMV pp150抗原基因在蚕豆中的遗传转化及鉴定

目的研制人巨细胞病毒（HCMV）口服疫苗。方法根据HCMV基质磷蛋白PP150基因序列设计引物，PCR法从HCMV AD169株基因组DNA中扩增出编码PP150抗原决定簇区域的基因片段。将Kozak序列插入pp150基因的起始密码子的上游，3＇端引入了内质网滞留信号KDEL序列，将修饰后的基因片段克隆进载体pBI121，构建了带潮霉素（Hyg）选择抗性基因的植物表达载体pCAMBIA1300／pp150和根癌农杆菌工程菌EHA105；采用叶盘法转化蚕豆，获得了5株抗性植株，通过PCR、Southern blot和RNA dot blot分析鉴定，确认了3株为转基因植株。通过ELISA和Western blot对这3株的蛋白萃取物进行分析，以鉴定其免疫学活性。结果这3株转基因植株表达的PP150蛋白具有免疫原活性。结论这些转基因植株为HCMV口服疫苗的研究提供了条件。     

转基因动物中基因转移和表达的分子机制

本综述着重讨论在转基因动物中外源基因转移及表达的分子机制,包括外源基因在宿主染色体上整合的分子基础及其影响因素;启动子、内含子、增强子、反式作用因子及载体等各种因素对外源基因在宿主内表达的调节。     

新型肿瘤疫苗研究现况及进展

肿瘤疫苗是肿瘤主动特异性免疫治疗(activespecificimmunotherapy)的核心.由于肿瘤细胞缺乏特异性抗原及必要的抗原呈递而使肿瘤疫苗制备非常困难.由于分子免疫学及基因工程技术的迅速发展,出现了转基因瘤苗、DC及B细胞瘤苗、核酸瘤苗、抗独特型瘤苗及HSP-多肽复合物瘤苗等新型高效瘤苗.本文就此作一综述,并介绍新的瘤苗制备和构建方法.     

B-7.1转基因细胞株的表达和检测

目的 构建B-7.1基因真核表达载体并导入CAK-1肾细胞癌细胞表达,为进一步研究基因的功能做材料准备.方法 采用RT-PCR方法,以正常肝脏组织cDNA为模板,扩增B-7.1基因全长读码框架,并构建到真核表达载体pCDNA3.1中,将其导入CAK-1肾细胞瘤细胞,对转染后的细胞进行RT-PCR和Western blo...     

PCR法检测转基因大豆毛状根的hbFGF基因

目的通过检测转基因大豆毛状根的人碱性成纤维细胞生长因子(hbFGF),为利用毛状根生产药物实现工业化提供实验基础。方法采用PCR检测方法,利用植物基因组DNA提取试剂盒,兔抗人bFGF单克隆抗体进行对转基因大豆毛状根hbFGF检测。结果用PCR检测转基因大豆毛根,并在60条Hyg抗性大豆毛状根中鉴定出19条大豆毛状根整合状hbFGF,阳性率为32%。兔抗人bFGF单克隆抗体检测表明,hbFGF在转基因大豆毛状根中稳定表达。结论转基因大豆毛状根能够稳定表达hbFGF基因,在工业生产中具有广阔的前景。     

人源鼻咽癌双价抗独特型抗体疫苗的制备及活性鉴定

目的:构建全人源鼻咽癌双价抗独特型抗体原核表达载体,并对其产物作初步鉴定。方法:利用分子克隆技术依次将G22,I50插入到原核表达载体pET25b(+)中,经菌落PCR,双酶切验证并测序。阳性重组子转化入表达菌株E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达后,表达的重组蛋白经His-tag纯化试剂盒纯化后复性。用Westernblot方法鉴定G22-I50双价蛋白的表达,ELISA方法分析其蛋白活性,并进一步观察其对外周血单个核细胞的刺激增殖情况。结果:构建的原核表达载体pET25b-G22-I50经测序验证,序列正确。双价蛋白G22-I50以包涵体形式高效表达,经纯化后纯度达90%以上。Westernblot鉴定表达的蛋白相对分子质量(Mr)约42000,与预期相符。ELISA鉴定复性后的蛋白已恢复活性,并能在体外刺激外周血单个核细胞的增殖。结论:成功获得了有活性的双价抗独特型抗体,为临床对鼻咽癌进行主动免疫治疗提供了理论基础。     

鼠源轮状病毒vp7基因的表达载体构建及转基因植物的研究

目的：构建表达鼠源轮状病毒抗原基因vp7的植物表达载体及植物转化研究。方法：抗原基因vp7经PCR扩增后直接克隆到PUC－T载体,双酶切目的片断和植物表达载体,以T4连接酶将目的片断与载体相连接,电转化方式将重组质粒转入农杆菌。结果：以重组农杆菌为介导将靶基因转入到马铃薯外植体。成功地将目的基因定向克隆到表达载体,并转入到农杆菌中;以农杆菌为介导获得抗性转基因马铃薯植株。结论：通过PCR检测,初步确定轮状病毒外壳蛋白基因vp7已成功地整合到马铃薯植株中。     

人源轮状病毒vp7基因的克隆与转基因植物研究

目的：克隆人源轮状病毒外壳蛋白vp7基因,以制备转基因植物疫苗。方法：用RT-PCR方法制备vp7基因,以植物高效表达质粒PBI121为载体,构建重组DNA质粒。重组体用载体上的通用引物为测序引物,鉴定克隆的正确性。再将鉴定过的重组质粒用农杆菌介导法转染马铃薯外植体,分别用PCR、Western blot法鉴定阳性转化植株中vp7基因的表达。结果：成功地将vp7转入马铃薯植株中,并且在转化植株中检测出了vp7的表达。结论：成功地构建了重组PBI121/hvp7质粒,获得表达外源基因vp7的转基因马铃薯。     

HBD-2转基因小鼠的建立及鉴定

人β防御素2（Human beta defensin 2，HBD-2）是人体抗菌肽的重要分子，体外试验研究证明具有广谱抗微生物活性，为开展其在整体水平上的功能研究，建立HBD-2转基因小鼠模型。用分子克隆方法构建了带CMV启动子的HBD-2全长cDNA真核重组表达质粒pCDNA3．1-HBD2，以此为摸板，PCR扩增出带CMV启动子和BGH polyA尾的HBD-2基因片段，用显微注射技术将此微基因导入小鼠雄原核中，于M16培养液培养后经输卵管移植到受体鼠体内让其怀孕产生子代小鼠。PCR法检测外源基因在小鼠基因组中的整合，RT—PCR和免疫组化法检测HBD-2在小鼠组织的表达。PCR检测结果显示17只F1代转基因鼠中4只检测到阳性信号，RT—PCR和免疫组化检测显示HBD-2在其F1代转基因小鼠生殖道、呼吸道、泌尿道以及血管内皮等组织部位广泛表达。实验表明HBIN2基因已整合到小鼠基因组且广泛表达，为进一步研究HBD-2的生物学功能及基因调控提供了有用的整体动物模型。