硒化乳酸菌胞外多糖对小鼠腹腔巨噬细胞免疫功能的影响

目的探讨硒化乳酸菌胞外多糖(Se-EPS)对小鼠腹腔巨噬细胞免疫活性的影响。方法从乳酸菌培养液中分离提纯乳酸菌胞外多糖(EPS),并将EPS与无机硒化剂反应,得到Se-EPS。采用体外细胞培养,测定Se-EPS对巨噬细胞吞噬能力,胞外一氧化氮(NO)与肿瘤坏死因子(TNF-α)分泌量的影响。结果 Se-EPS能够显著增强巨噬细胞的吞噬活性,NO和TNF-α的分泌量,并且在Se-EPS浓度为50～1000 g/ml之间呈浓度依赖性增加。结论 Se-EPS有助于促进巨噬细胞的细胞介导免疫反应、增强免疫反应的作用。     

雷公藤内酯醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌炎症相关因子的影响

目的:探讨雷公藤内酯醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞分泌炎症相关因子的影响。方法:分离纯化小鼠腹腔巨噬细胞,设置PBS组(PBS+生理盐水)、LPS组(LPS终浓度为10μg/ml+生理盐水)及LPS+雷公藤内酯醇组(LPS终浓度为10μg/ml,雷公藤内酯醇终浓度为10μg/ml);共培养24h后Griess试剂比色法及ELISA法分别用于检测培养上清中一氧化氮(NO)及白细胞介素-8(IL-8)含量;RT-PCR法检测细胞IL-8 m RNA表达量。结果:10μg/ml雷公藤内酯醇可显著下调LPS诱导的巨噬细胞NO及IL-8的产生(P0.05),抑制率分别为80.94%和44.19%;RT-PCR结果显示,10μg/ml雷公藤内酯醇可显著下调LPS诱导的巨噬细胞IL-8 m RNA的表达。结论:雷公藤内酯醇可能通过抑制LPS诱导的巨噬细胞中NO及IL-8的表达达到抗炎作用。     

低分子多糖对小鼠移植性肿瘤抑制作用的研究

目的探讨低分子多糖对小鼠移植性肿瘤抗癌作用的研究。方法体内抑瘤试验，体外细胞毒试验，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验，NK细胞活性试验。结果低分子多糖对小鼠移植性肿瘤的抑制率在30．31％～52．19％。对K562白血病细胞株半数抑制浓度IC50为20μg／ml，对Hela宫颈癌细胞株半数抑制浓度IC50为23．4μg／ml。并能明显提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬百分率和吞噬指数。结论低分子多糖对小鼠移植性肿瘤有一定的抑制作用。     

纳米ZnO颗粒对小鼠肺泡巨噬细胞吞噬功能和炎症反应的影响

目的:研究纳米ZnO颗粒对小鼠肺泡巨噬细胞吞噬能力和炎性因子的影响。方法:采用不同尺寸的纳米ZnO颗粒对小鼠肺泡巨噬细胞进行染毒,通过中性红法测定小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬能力,采用酶联免疫法测定炎性因子。结果:高浓度时(20μg/ml),小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬能力明显降低;浓度为5～20μg/ml时,TNF-α、IL-6和IL-8均显著升高,并且10～30 nm ZnO颗粒处理组TNF-α和IL-6升高显著高于其他ZnO颗粒处理组。结论:纳米ZnO颗粒降低小鼠肺泡巨噬细胞的吞噬能力并引起炎性反应。     

苜草素对巨噬细胞吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α分泌的影响

目的研究苜草素对小鼠巨噬细胞RAW264.7吞噬活性和NO、IL-6、TNF-α的影响,探讨苜草素对巨噬细胞免疫功能的影响机制。方法以不同浓度的苜草素和10 g/ml的脂多糖(LPS)分别处理巨噬细胞RAW264.7,采用中性红法测定巨噬细胞的吞噬活性,ELISA检测TNF-α分泌量。以不同浓度的苜草素处理LPS诱导的巨噬细胞RAW264.7,采用Griess分析法测定NO含量,ELISA检测IL-6分泌量,半定量RT-PCR方法测定巨噬细胞中iNOS、IL-6、TNF-αmRNA水平。结果苜草素在0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时能显著提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性(P<0.05);在0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著增加TNF-α的分泌量(P<0.01),显著降低LPS诱导的巨噬细胞NO产生量(P<0.05);在0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/ml时显著降低LPS诱导的巨噬细胞IL-6的产生量(P<0.01)。苜草素可抑制LPS诱导的iNOS mRNA和IL-6 mRNA的表达,增加TNF-αmRNA的表达。结论苜草素可以提高巨噬细胞RAW264.7的吞噬活性,在转录水平上影响小鼠巨噬细胞iNOS、IL-6、TNF-α的基因表达,对巨噬细胞免疫功能起调节作用。     

阿特拉津对小鼠腹腔巨噬细胞功能影响的体外研究

目的探讨阿特拉津(ATZ)体外染毒对小鼠腹腔巨噬细胞功能的影响,为其免疫毒性评价积累资料。方法分离培养小鼠腹腔巨噬细胞,经不同浓度(0~1000μmol/L)阿特拉津处理后,MTT比色法测定细胞活力,中性红(NR)法测定其吞噬功能,硝酸还原酶法测定NO含量,ELISA法测定TNF-α释放能力,DCFH-DA荧光标记流式细胞术测定活性氧含量。结果 MTT法测得ATZ对小鼠腹腔巨噬细胞的24、48、72 h染毒的IC50分别为(887.4±1.11)、(360.2±1.13)、(270.6±1.20)μmol/L。NR吸收法所测得各时间点IC50分别为(214.2±1.14)、(120.0±1.10)、(42.60±1.12)μmol/L。24 h及72 h染毒后,低浓度ATZ剂量组NO含量较对照组增加,高浓度剂量组NO含量较对照组出现下降趋势。72 h染毒后,低浓度ATZ剂量组(0.01、0.1μmol/L)TNF-α的含量高于对照组(P<0.05),但在1μmol/L及以上的ATZ染毒组TNF-α含量较对照组降低(P<0.05)。小鼠腹腔巨噬细胞在ATZ低剂量组(0.01、1μmol/L)染毒24 h和72 h时均能促使ROS的产生(P<0.05),但在100μmol/L剂量组里ROS释放量却降低。结论阿特拉津染毒可影响小鼠腹腔巨噬细胞的活性和吞噬功能,并可干扰其细胞因子/活性氧/活性氮的释放。     

大豆肽免疫调节作用实验研究

目的探讨大豆肽的免疫调节作用。方法ICR雌性小鼠,经口灌胃给药,剂量分别为0.37、0.73、2.20 g/kg·bw,连续30天后,进行细胞免疫实验(迟发型变态反应和ConA诱导的脾淋巴细胞转化实验)、体液免疫实验(抗体生成细胞检测和血清溶血素水平(HC50)测定)、巨噬细胞吞噬能力测定(碳廓清实验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验)和NK细胞活性测定。结果大豆肽能提高小鼠的血清溶血素水平(0.37、0.73、2.20g/kg·bw剂量组HC50与对照组比较分别提高了19.8、17.1、18.3,P0.01)、碳廓清吞噬指数(0.73 g/kg·bw剂量组吞噬指数与对照组比较提高了1.21,P0.01)及腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞百分率(0.73 g/kg·bw剂量组吞噬百分率与对照组比较提高了14%,P0.01)。结论大豆肽具有增强免疫力作用。     

灵芝孢子油对老龄小鼠免疫保护作用

目的探讨灵芝孢子油对老龄小鼠的免疫保护作用。方法将192只健康老龄(12月龄)SPF级昆明雄性小鼠随机分为A、B、C、D 4组,各组均随机分为4个小组,即对照组、低、中、高剂量组,每组12只。低、中、高剂量组小鼠经口灌胃分别为0.25、0.50、1.50mg/(kg·bw)的灵芝孢子油,对照组给予同体积的玉米油。灌胃容量0.02 ml/g,1/d。连续灌胃30d后,分别进行迟发型变态反应(DTH)实验、血清溶血素的测定、抗体生成细胞数的测定、碳廓清实验、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、淋巴细胞转化实验和NK细胞活性测定。结果灵芝孢子油暴露后,与对照组相比,中、高剂量组小鼠足跖肿胀度、淋巴细胞增殖能力、抗体生成细胞数、抗体积数、单核-巨噬细胞碳廓清能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数均具有统计学意义(P0.05或P0.01),而NK细胞活性无统计学意义(P0.05)。随着灵芝孢子油灌胃剂量的升高,上述指标均呈上升趋势。结论灵芝孢子油可以增强老龄小鼠的免疫保护作用。     

灵芝刺梨颗粒对小鼠免疫功能影响实验研究

目的评价灵芝刺梨颗粒对小鼠免疫功能的影响。方法按卫生部《保健食品检验与评价技术规范》(2003年版)规定方法进行实验,以0.083、0.167、0.500 g/kg的剂量经口给予小鼠灵芝刺梨颗粒30天,测定细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞吞噬功能指标,以及NK细胞活性。结果与对照组相比,0.083 g/kg剂量组胸腺/体重比值增高(P0.05);0.500 g/kg剂量组抗体生成细胞数增高(P0.01)。0.167 g/kg剂量组小鼠单核-巨噬细胞碳廓清能力增强,0.167,0.500 g/kg两个剂量组小鼠巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率(转换值)及吞噬系数均增高(P0.01);0.083 g/kg剂量组小鼠NK细胞活性(转换值)增高(P0.05)。各剂量受试物对小鼠体重增长、脾脏/体重比值、迟发型变态反应能力、Con A诱导的小鼠淋巴细胞转化能力、血清溶素水平均无明显影响(P0.05)。结论灵芝刺梨颗粒具有增强小鼠免疫功能的作用。     

小鼠腹腔巨噬细胞吞噬乳胶颗粒实验条件筛选

目的 建立和完善可靠、敏感、稳定的评价腹腔巨噬细胞吞噬功能方法.方法 取小鼠腹腔巨噬细胞与乳胶颗粒在不同培养条件下混合后定量加入24孔板,37 ℃,5%CO<,2>培养箱中孵育后,荧光显微镜下计数吞噬百分率和吞噬指数.结果 随培养时间(0.5,1,2,4 h)延长,腹腔巨噬细胞吞噬乳胶颗粒的吞噬百分率增加,不同培养时间的吞噬百分率之间差异均有统计学意义(P<0.05);随小牛血清浓度(2.5%,5%,10%)和乳胶颗粒浓度(0.25‰,0.5‰,1‰,2‰)增加,腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数升高,不同浓度小牛血清和乳胶颗粒下腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数之间差异均有统计学意义(P<0.01);贴壁处理后的腹腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数显著高于未经贴壁处理的细胞(P<0.01);在Balb/C、C57、昆明(KM)、ICR 4种品系小鼠中,Balb/c小鼠腹腔巨噬细胞吞噬百分率显著高于其他品系小鼠(P<0.01).结论 乳胶颗粒浓度为1‰、血清浓度为2.5%～5%、细胞贴壁2 h后吞噬培养2 h,选用Balb/c小鼠为该实验的最佳实验条件.     

急性糖负荷对单纯高脂血症患者炎症及氧化应激反应的影响

目的研究急性糖负荷后,单纯高脂血症患者血清炎症及氧化应激标志物水平的变化。方法单纯高脂血症患者(HLP组)55例及健康对照者(Con组)54例,进行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),检测空腹及OGTT-2 h血清炎症因子C-反应蛋白(CRP),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及白介素-6(IL-6),氧化应激指标丙二醛(MDA),过氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的水平。结果与对照组相比,空腹及OGTT-2 h时,HLP组血清CRP、TNF-α、IL-6和MDA水平升高,SOD和GSH-Px水平下降(P<0.001或P<0.05)。与空腹时相比,HLP组血清CRP、TNF-α、IL-6水平在OGTT-2 h时增高(P<0.05),SOD和GSH-Px水平降低(P<0.001,P<0.05);而对照组仅血清IL-6水平在OGTT-2 h时升高(P<0.05),MDA、SOD和GSH-Px水平下降(P<0.001,P<0.05)。结论急性糖负荷能够进一步加剧恶化高脂血症患者体内的炎症及氧化应激反应,可能在高脂血症致动脉粥样硬化等慢性疾病的发生发展中发挥了重要的作用。     

染料木黄酮对脂多糖诱导的RAW264.7细胞炎症因子、腺苷酸激活蛋白激酶磷酸化的影响

目的研究染料木黄酮(genistein,Gen)对脂多糖(LPS)诱导的巨噬细胞炎症因子产生和腺苷酸激活蛋白激酶(AMPK)磷酸化的影响。方法体外培养RAW 264.7小鼠单核巨噬细胞,加入1、5、10、50、100 mol/L的Gen共同培养,MTT法检测其对细胞活性的影响。将RAW264.7细胞随机分为4组:空白对照组不加任何药物,模型组加入终浓度为1 g/ml的LPS进行刺激,Gen高、低剂量组分别加入终浓度为10、5 mol/L的Gen预处理1h后,再加入终浓度为1 g/ml的LPS刺激,24h后收取细胞上清用酶联免疫(ELISA)方法检测TNF-α、IL-6含量,Westernblot检测AMPKα蛋白及其磷酸化的表达水平。结果 100 mol/L的Gen对体外培养RAW264.7细胞的增殖有影响,而其他浓度则无。LPS处理的RAW 264.7细胞与对照组比较,TNF-α、IL-6生成显著增多(P<0.01)、AMPKα磷酸化水平显著降低(P<0.01),而AMPKα总蛋白表达水平无差异(P>0.05)。Gen干预可减少LPS诱导的TNF-α、IL-6生成,上调AMPKα磷酸化水平的表达,与LPS组相比,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论 Gen能抑制LPS诱导巨噬细胞的炎症反应,减少TNF-α、IL-6生成,这可能与Gen促进AMPKα磷酸化,从而激活AMPKα有关。     

维生素C对镍诱导的肺泡巨噬细胞氧化损伤的保护作用

目的:研究维生素C(VC)拮抗Ni2O3的细胞氧化损伤的作用及对大鼠肺泡巨噬细胞iNOS诱导表达的影响。方法:采用体外细胞培养法测定在VC(25,50,100μmol/L)作用下,体外染镍肺泡巨噬细胞的死亡率及活力。同时观察细胞内丙二醛(MDA)、一氧化氮(nitricoxide,NO)和活性氧(ROS)的产生;超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、诱导型一氧化氮合酶(nitricoxidesynthase,iNOS)活力的变化以及应用RT-PCR法测定iNOSmRNA的表达。结果:在体外染镍肺泡巨噬细胞中加入不同浓度的VC后可降低该细胞的死亡率并提高细胞的活力,可减少MDA、NO和活性氧的产生,降低NOS的活性,提高SOD、GSH-Px、CAT的活性,iNOSmRNA表达也较镍组降低。结论:镍可致细胞脂质过氧化,VC可通过提高抗氧化酶的活性,抑制iNOSmRNA的表达,减少活性氧及NO的产生,拮抗镍对肺泡巨噬细胞的氧化损伤。     

肌醇六磷酸对溃疡性结肠炎大鼠保护作用的实验研究

目的 研究肌醇六磷酸（IP6）对溃疡性结肠炎大鼠的保护作用,并初步探讨其作用机制。方法 48只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、柳氮磺吡啶组、IP6低、中、高剂量组,采用葡聚糖硫酸钠诱导法构建溃疡性结肠炎大鼠模型,相应组分别以肌醇六磷酸钠0.5g/kg bw、1.0g/kg bw和2.0g/kg bw,柳氮磺吡啶0.5g/kg bw灌胃,连续10天。评估疾病活动指数（DAI）和结肠组织宏观损伤评分,结肠组织病理学观察,并检测结肠组织超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的活力,丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素1β（IL-1β）的含量。结果 与模型组比较,柳氮磺吡啶组和IP6低、中、高剂量组DAI、结肠宏观损伤评分降低,差异有统计学意义（F=33.637,P<0.001;F=33.369,P<0.001）,组织病理学观察溃疡性结肠炎明显改善,且结肠组织中MDA、TNF-α和IL-1β含量均降低,差异有统计学意义（F=85.892,P<0.001;F=359.605,P<0.001;F=66.698,P<0.001）,IP6高剂量组SOD活力和GSH-Px活力最高,差异有统计学意义（F=7.073,P=0.001;F=40.812,P<0.001）,且随IP6剂量增加而升高。结论 IP6明显改善溃疡性结肠炎大鼠肠道病变,与IP6可抑制促炎因子,增强抗氧化作用有关。     

氟对体外培养血管内皮细胞影响及硒干预作用研究

目的研究不同浓度氟对体外培养血管内皮细胞的影响及硒的干预作用。方法人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)置于37℃,5%CO2,饱和湿度条件下培养。在培养液中加入氟化钠,氟浓度分别为0、100、400、700、1000、2000μmol/L,同时加入硒,浓度为100 nmol/L。连续培养48 h后,收集细胞培养液与细胞。应用瑞氏-吉姆萨染色观察细胞形态,吖啶橙荧光染色测定细胞凋亡,四唑氮蓝(MTT)比色法检测细胞活性;检测超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性、丙二醛(MDA)含量;检测细胞培养液诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)活性、细胞iNOSmRNA、eNOSmRNA表达;检测细胞间粘附分子-1(ICAM-1)、血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)含量。结果在氟浓度100~700μmol/L加硒100 nmol/L,可明显减轻氟对细胞生长的抑制,恢复细胞形态的改变;使SOD、GSH-Px活性升高(P<0.05)、MDA含量下降(P<0.05);降低iNOS活性和iNOSmRNA表达(P<0.05),升高eNOS的活性和eNOSmRNA表达(P<0.05);减少CAM-1和VCAM-1含量(P<0.05,P<0.01)。结论氟可致血管内皮细胞形态改变、功能异常。适宜剂量硒补充可通过提高抗氧化功能,调整NO代谢,抑制粘附分子异常表达等途径拮抗高氟所致的血管内皮损伤。     

瓷厂及钨矿生产性粉尘对血管内皮细胞的损伤效应

目的 评价瓷厂和钨矿生产性粉尘对血管内皮细胞的直接损伤作用,探讨粉尘引发心血管疾病的机制.方法 以人脐静脉内皮细胞(HUVEC)株HUV-EC-C为作用细胞,以瓷厂、钨矿作业点收集的生产性粉尘为实验粉尘,以中国标准石英为对照,将粉尘配制成25、50、100、200、400μg/ml浓度与HUVEC共培养24 h,测定细胞乳酸脱氢酶(LDH)活力、细胞的活力噻唑蓝(MTT)、一氧化氮(NO)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的释放量.结果 瓷厂和钨矿作业点的生产性粉尘均能使HUVEC细胞培养液中LDH活力升高,释放NO及TNF-α水平升高,并随粉尘浓度升高呈现明确的剂量-反应关系.瓷厂和钨矿作业点生产性粉尘均能导致HUVEC细胞活力下降,呈剂量-反应关系.石英粉尘诱导HUVEC培养液中LDH活力升高的能力明显高于瓷厂和钨矿的生产性粉尘,差异有统计学意义(P＜0.05).瓷厂和钨矿生产性粉尘诱导HUVEC细胞活力下降及释放NO的能力相近且与标准石英相当.在较低剂量组(25、50、100μg/ml)时,瓷厂和钨矿生产性粉尘诱导TNF-α的释放量与标准石英相当,差异无统计学意义(P＞0.05),而在较高剂量组(200、400 μg/ml)时,标准石英诱导TNF-α的释放量明显高于瓷厂和钨矿生产性粉尘,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 不同来源的生产性粉尘及标准石英均能损伤血管内皮细胞,诱导TNF-α释放,引起不同程度的生物学效应.     

不同碘摄入水平对仔代大鼠脑组织抗氧化能力及相关基因表达的影响

目的通过研究不同碘摄入量的仔代大鼠脑组织抗氧化酶活力及其相关基因表达、过氧化产物含量,探讨碘对大鼠脑组织抗氧化能力的影响.方法将断乳后1个月的Wistar大鼠随机分为4组(即低碘组,适碘组,10倍碘组,50倍碘组),每组20只,分别饮用含不同碘浓度的水,每组每日总碘摄入量分别为＜1、6.15、61.5和307.5μg/d.饲养3个月后随机交配,仔鼠饲养28 d后,断头取其脑组织,称重,进行抗氧化酶活力及过氧化产物浓度测定,以RT-PCR方法检测抗氧化酶基因表达水平.结果与适碘组相比,大鼠脑内丙二醛(MDA)含量仅在低碘组明显升高(P＜0.01),超氧化物歧化酶(SOD)活力在低碘组升高(P＜0.05),在50倍碘组明显降低(P＜0.01);SOD/MDA在低碘组和50倍碘组均明显降低(P＜0.05,P＜0.01);谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力在低碘组、10倍碘组和50倍碘组降低(P＜0.05,P＜0.01),GSH-Px/MDA也明显降低(P＜0.01).与适碘组相比,在10倍碘组和50倍碘组SODmRNA表达降低,各组GSH-Px mRNA表达无明显变化.结论碘缺乏和碘过量都可对仔代大鼠脑组织抗氧化能力有影响,造成脑组织自由基损伤,且低碘组比高碘组损伤明显;SOD和GSH-Px活力受转录、翻译、翻译后修饰等多水平调控.