TfR⁃Ubi融合蛋白稳定表达株的构建及功能初测

目的：通过构建转铁蛋白受体?泛素（transferrin receptor?ubiquitin,TfR?Ubi）融合蛋白,研究胞内体蛋白分选机制。方法：首先扩增小鼠泛素和人源转铁蛋白受体基因,构建HA?TfR?Ubi表达质粒,转染A431细胞后,采用Western blot验证融合蛋白的表达。在稳定表达TfR?Ubi的A431和Hrs?KO MEF细胞株中,转铁蛋白刺激,免疫荧光法观察TfR?Ubi融合蛋白在细胞内的位置。结果：成功构建HA?TfR?Ubi表达质粒,免疫荧光结果提示TfR?Ubi融合蛋白被分选到晚期内体（late endosome）/溶酶体,Hrs?KO MEF细胞中TfR?Ubi融合蛋白分选受到影响。结论：TfR?Ubi融合蛋白在胞内体被分选,证明了泛素修饰改变了转铁蛋白受体的降解方式,为胞内体分选转运装置（endosomal sorting complex required for transport,ESCRT）分选机制研究提供了实验工具。     

多功能分子机器ESCRT的研究进展

20世纪中叶,研究者发现多种真核细胞晚期内吞体中存在大量的内腔囊泡,并称之为多囊泡体,但其形成机制一直未能阐明。直到21世纪初,转运必需内体分选复合物(endosomal sorting complex required for transport,ESCRT)在酵母和哺乳动物细胞中被鉴定出[1],开启了在分子水平上探索多囊泡体     

泛素介导的表皮生长因子受体的降解

表皮生长因子与其受体结合后,可导致受体的二聚化和自我磷酸化,诱发细胞内信号传导,控制细胞的一系列功能.受体激活的同时可引起受体的泛素化和内化,并在溶酶体进行降解以控制受体活性及信号传导的持续时间和强度.泛素连接酶Cb1及其相互作用蛋白CIN85,和运输所需要的内涵体分选复合物(ESCRT)在这个负向调节过程中起重要作用.由表皮生长因子受体或Cb1变异而引起的调节中断,可导致肿瘤发生.     

外泌体的产生及其生物学作用的研究进展

外泌体于1983年首次被发现,是由于细胞膜内吞形成内体,内体限制膜发生多处凹陷,向内出芽形成微囊泡,从而形成的具有动态亚细胞结构的多囊泡体。大多数类型的细胞均可分泌外泌体。构成外泌体的主要成分为蛋白质、核酸和脂质。外泌体有多种分泌途径,对细胞间通信、疾病的传播及组织修复具有重要的调节作用。外泌体与受体细胞的结合方式多种多样,外泌体可以将膜蛋白或其内容物转移至受体细胞,也可以直接与受体细胞膜融合;此外,外泌体上的跨膜蛋白还可以直接作用于受体细胞膜表面的信号分子。外泌体广泛存在于生物体的免疫应答反应中,外泌体可以通过介导促炎症反应来促进免疫反应,肿瘤细胞分泌的外泌体还可以抑制免疫反应。肿瘤细胞分泌的外泌体可以促进癌症的侵袭和转移,加快癌症部位的血管生成,有助于肿瘤微环境中的上皮间充质转化,并且增强肿瘤的耐药性。外泌体通过与受体细胞特异性结合的方式,传递各种生物学信息,发挥重要的生物学作用。本文分别就外泌体的产生机制、分离与鉴定、其对机体免疫过程和疾病的发生发展的作用等方面的研究进展进行综述。     

囊泡转运在肌萎缩侧索硬化中的作用研究进展

囊泡转运是细胞利用囊泡完成细胞与环境间或细胞内各细胞器之间物质运输的基本生理过程。近年来,越来越多证据表明囊泡转运障碍在神经退行性疾病发病中起到关键作用。错误折叠蛋白质在异常囊泡转运的介导下,通过内吞作用、内体-溶酶体途径运输、内体逃逸和外泌体释放等方式,实现其在细胞间的传播,进一步加速疾病进展。肌萎缩侧索硬化（ALS）是一种以上下运动神经元的选择性死亡为特征的神经退行性疾病,其多种致病基因均与囊泡转运密切相关,如C9ORF72、TARDBP、SOD1等,能导致囊泡转运功能障碍。因此,通过调控囊泡转运相关蛋白,能阻止错误折叠蛋白质的沉积和传播,从而起到延缓ALS疾病发展的作用。本文通过综述文献,阐述了囊泡转运在ALS中的重要分子机制,以期为理解ALS致病机制和寻找潜在治疗手段提供新的视角。     

微囊泡在组织再生中的研究进展

微囊泡作为新发现的细胞间信号传递分子引起越来越多的关注,它来源于细胞膜,含有与母细胞膜相似的脂类和蛋白质。通过介导配体-受体反应或传递胞质成分及细胞器等方式使母细胞与靶细胞发生联系。近年来研究发现微囊泡在组织再生中发挥着重要的生物学作用。现就微囊泡的生物学特性、与靶细胞的作用方式及在组织再生中作用的研究进展进行综述。     

巨噬细胞集落刺激因子受体激酶及其抑制剂的研究进展

巨噬细胞集落刺激因子受体（c-Fms）是原癌基因c-fms的编码产物,属于Ⅲ型受体酪氨酸激酶家族成员。巨噬细胞集落刺激因子与c-Fms结合,激活其酪氨酸激酶,在单核巨噬细胞系的存活、增殖、分化以及胚胎发育过程中发挥着重要的作用。c-Fms及其配体的过度表达,引起该受体介导的细胞信号通路异常激活,参与了肿瘤形成和炎症发生过程。因此,靶向c-Fms激酶的抑制剂能抑制受体的磷酸化,阻断受体介导的细胞信号通路,是治疗肿瘤、关节炎等疾病的潜在药物。     

脱唾液酸糖蛋白受体介导的肝靶向性基因转移方式的研究进展

受体介导的基因转移方式是近几年来发展起来的一种新的基因转移策略，和目前用于基因治疗的其他基因转移方式相比，具有其独特的特点。其中脱唾液酸糖蛋白是肝细胞表面独有的脱唾液酸糖蛋白受体的天然配体，其介导的肝靶向性基因转移在肝脏的遗传性疾病的临床前研究中发挥了重要作用。本文就脱唾液酸糖蛋白受体介导的基因转移及相关的某些肝靶向性的受体介导的基因转移的优、缺点作了综合性的评价，并总结了制备有效的配体-DNA复合物的常见方法和影响因素，及其在体内运输过程中的药物动力学特点。     

晚期内体的分选转运参与Ⅱ型腺相关病毒在IB3人支气管上皮转化细胞中的转导激活过程

目的确认Ⅱ型腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV2)是否能够在肺上皮细胞中经过囊泡分选过程进入晚期内体,并且进一步检测在内体中分离的腺相关病毒是否具有不同的转导活性,从而探讨内体转运系统在腺相关病毒感染动力学中的作用。方法以RAB7的GFP融合蛋白作为晚期内体的特异性标记,通过对Ⅱ型腺相关病毒进行荧光标记,在人支气管上皮转化细胞IB3中进行共聚焦显微成像的共定位分析。通过密度梯度离心和内体亲和沉淀对进入细胞内体的病毒颗粒进行分离,并对细胞进行二次感染时的活性在有或无RAB7影响因素的条件下进行比较分析。结果相当部分的Ⅱ型腺相关病毒在感染IB3细胞后能够进入晚期内体且进入晚期内体的病毒比未经细胞分选的病毒表现出更好的外源基因表达活性。结论提示Ⅱ型腺相关病毒在肺支气管上皮细胞中晚期内体的转运可能促进其转导的活化过程。     

趋化因子受体CCR5的研究进展

CCR5为趋化因子CC受体家族成员,属7次跨膜G蛋白耦联受体,配体为CCL3 (MIP-1α)、CCL4( MIP-1β)、CCL5( RANTES).CCR5主要表达于单核/巨噬细胞和淋巴细胞,与其配体介导CCR5+免疫细胞的趋化、募集过程.因此,多种免疫性疾病的发生和发展过程均有CCR5参与.CCR5是人类免疫缺陷病毒Ⅰ型(HIV-1)入侵时的重要辅助受体,而在肿瘤细胞和各类肿瘤相关间质细胞的表面也可见其表达,并介导肿瘤增殖、浸润等多种生物学过程.随着相关研究技术的发展,进一步加深了对CCR5的结构、功能、信号通路及其在相关疾病中的作用的认识.     

清道夫受体A与动脉粥样硬化

氧化修饰低密度脂蛋白在动脉粥样硬化的发生发展过程中起重要作用。介导氧化修饰低密度脂蛋白的受体种类繁多,尤其是清道夫受体A。本文就近年来有关该受体的结构、分布、调节、配体及其在动脉粥样硬化中的作用的研究作一阐述,以便进一步了解动脉粥样硬化的发生机制,探索防治途径。     

TRAIL及其受体与慢性肝病关系的研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体是肿瘤坏死因子家族的新成员,其介导的细胞凋亡作用在疾病发展中发挥重要地位。从近几年研究报道可以看出,肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体及其受体与慢性肝病发生发展及治疗的关系十分密切。特别是病毒性肝炎、肝硬化和肝癌。该文就此进行综述。     

间充质干细胞来源的胞外囊泡的研究进展

胞外囊泡(EVs),曾经被误认为是细胞垃圾碎片,近年来越来越多的研究发现它在细胞间信号传递中起着至关重要的作用,它通过介导配体-受体反应或传递胞质成分(蛋白、mRNA和microRNA)等方式与靶细胞发生联系而引起越来越多的关注。近年来研究发现间充质干细胞(MSCs)来源的EVs在多种疾病中发挥着重要的生物学作用,有可能成为替代干细胞治疗的新型物质。随着对EVs研究的深入,将来有望利用其特有的作用方式阐述疾病的发生、发展并研发新型的药物载体,达到诊断和治疗更多疾病的目的。现就EVs的生物学特性、与靶细胞的作用方式及MSCs来源的EVs在多种疾病中的治疗作用的研究进展做一综述。     

TRAIL及其受体在肝脏疾病中的作用研究进展

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是近年来发现的肿瘤坏死因子(TNF)家族成员之一,越来越多的证据表明TRAIL及其受体介导的细胞凋亡在多种肝脏疾病的发生发展中有着重要作用,TRAIL及其受体的发现为肝脏疾病的治疗提供了新的研究方向.     

阿尔茨海默病风险基因在内体-溶酶体系统中作用机制的研究进展

内体-溶酶体系统通过内吞作用介导蛋白质降解。神经元内体-溶酶体系统功能障碍及其引起的货物蛋白转运途径异常是阿尔茨海默病(AD)早期重要病理特征之一。全基因组关联分析表明, AD风险基因及其变异与内吞作用、脂质代谢及免疫反应过程有关, 内体-溶酶体系统在上述病理生理过程中发挥重要作用。本文对内吞作用、脂质代谢及免疫反应相关AD风险基因在内体-溶酶体系统中的作用及其如何导致AD细胞功能障碍进行综述, 为后续AD机制及治疗研究提供参考。     

Toll样受体与肝纤维化关系的研究进展

Toll样受体(TLRs)是细胞表面信号转导跨膜受体,能够识别作为配体的病原相关的分子模式。作为细胞膜上的跨膜信号传递分子,TLRs通过信号转导参与配体介导的肝脏内多种细胞的激活及多种细胞因子的分泌,参与肝纤维化的发生及发展过程。肝免疫细胞和肝星状细胞上被激活的TLRs在肝纤维化形成过程中具有重要作用。现就TLRs与肝纤维化关系予以综述。     

整合素在纤维化疾病中作用的研究进展

整合素作为细胞表面受体,通过与配体结合介导细胞间、细胞与细胞外基质间的黏附,进一步调控细胞的多种生物学行为,包括生长、增殖、迁移、分化和凋亡等。整合素与肿瘤、血栓性疾病、炎症以及感染性疾病等多种疾病密切相关,并可作为有效靶向治疗药物的靶点。在纤维化疾病中,整合素水平表达异常,并通过与细胞外基质结合激活不同的促纤维化信号通路,在纤维化形成过程中发挥重要作用。深入研究整合素在纤维化疾病中的作用,有助于研发预防甚至逆转纤维化疾病的药物,改善患者生存质量。     

TRAIL及其受体在自身免疫性疾病中的作用机制

肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体(TRAIL)是新的肿瘤坏死因子家族成员,共有5种受体,其配体-受体系统介导细胞凋亡。免疫细胞的凋亡异常与自身免疫性疾病的发生密切相关。以往研究主要集中在肿瘤的发生、发展和治疗等方面,近年来,TRAIL在免疫系统中的作用开始受到关注。现就TRAIL及其受体在免疫细胞凋亡中的作用及其与自身免疫性疾病发生和发展的关系予以综述。     

突触内吞关键蛋白Dynamin 的研究进展

囊泡循环为突触的基本生理功能,涉及到多个环节的参与,囊泡回收是整个突触囊泡循环的基础。研究 表明,网格蛋白介导的内吞作用是囊泡回收的主要途径,Dynamin(发动蛋白)在此过程中发挥重要作用。Dynamin是 一个分子质量约为100 kD的GTP酶,它在网格蛋白介导的内吞过程中发挥“剪刀”的作用,将网格蛋白包被小窝与 质膜分离。研究发现癫痫、阿尔茨海默病、中央核肌病等多种神经性疾病与Dynamin相关。本文从Dynamin的结构入 手,简要论述其功能、表达调控及相关疾病的研究进展。     

血小板活化因子参与血小板-中性粒细胞活化的研究

血小板活化因子是一种内源性脂类介质,在血栓形成、急性炎症等病理生理过程中起重要作用,血小板活化因子作为最强的血小板聚集诱导剂,一种很强的炎性因子,在参与血小板-中性粒细胞的活化中起着重要作用。许多血小板活化因子受体拮抗剂,可以拮抗特异性受体,抑制其对血小板-中性粒细胞的活化作用。研究表明,血小板活化因子参与血小板-中性粒细胞的相互作用,是多种细胞因子、化学介质参与其中的病理生理过程,不同配体-受体系统介导血小板-中性粒细胞的相互作用。