注射用双黄连与生脉注射液对Hartley豚鼠与BN大鼠主动全身过敏反应的影响

目的:研究注射用双黄连、生脉注射液对Hartley豚鼠与棕色挪威(BN)大鼠的主动全身过敏反应(active systemic anaphylaxis,ASA)及其相关指标,为完善中药注射剂过敏性评价提供实验依据。方法:取Hartley豚鼠或BN大鼠随机分为卵蛋白(OVA)组、注射用双黄连(双黄连)组、生脉注射液(生脉)组、正常组。2种动物分别隔日ih受试药物致敏液3次,于致敏后第14天静脉注射相应的激发液,观察激发后30 min动物的全身过敏反应症状,苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理改变。放射免疫法检测BN大鼠在致敏前及激发后血清总免疫球蛋白E(Ig E)水平的变化、致敏激发后血清类胰蛋白酶变化。结果:对Hartley豚鼠或BN大鼠,OVA组、双黄连组动物均呈现过敏反应症状,肺组织病理切片显示均有明显淋巴细胞浸润等炎症病理表现,但双黄连组较轻。生脉组则未见过敏反应症状以及肺组织病理异常。与正常组比较,OVA组、双黄连组、生脉组大鼠激发后血清总Ig E水平显著升高(P0.05,P0.01)。与致敏前同组动物血清总Ig E水平比较,激发后OVA组、双黄连组血清总Ig E水平显著升高(P0.05,P0.01)。与正常组比较,OVA组、双黄连组大鼠激发后血清类胰蛋白酶水平显著升高(P0.01,P0.05),生脉组有升高趋势,但是无显著差异。结论:采用不同品种实验动物及增加相关检测的指标,能更全面评价注射用双黄连、生脉注射液潜在的致敏性。     

大鼠主动全身过敏试验方法的探讨

目的建立大鼠主动全身过敏试验模型,评价中药注射剂过敏反应。方法选用豚鼠和BN、F344、SD、Wistar4种品系大鼠,以卵白蛋白(OVA)、天花粉蛋白(TCS)、清开灵注射液、注射用灯盏花素为受试物,分别隔日腹腔注射致敏,共3次,于末次致敏后第14天静脉注射2倍致敏剂量激发。同时设生理盐水对照组。观察各组动物的过敏反应发生率及过敏反应症状。结果阳性药卵白蛋白和天花粉蛋白可引起豚鼠和大鼠发生过敏反应,发生率均为100%,豚鼠发生的过敏反应症状程度略高于大鼠。清开灵注射液可引起豚鼠和BN大鼠发生过敏反应,发生率分别为50%和100%。注射用灯盏花素导致F344、BN和SD大鼠发生过敏反应,发生率分别为100%、100%、83.33%,且F344大鼠呈现强阳性反应,而豚鼠则呈现阴性反应。结论大鼠可推荐作为主动全身过敏试验的动物模型之一,对致敏原的敏感性在动物不同品系间可能存在差异。     

不同品系大鼠对灯盏花素过敏反应差异性研究

目的:比较研究F344、BN、SD、Wistar四种品系大鼠对灯盏花素注射液被动皮肤过敏及其致敏血清中总IgE水平差异性。方法:四种品系大鼠分别随机分为正常对照组、OVA组、灯盏花素组。采用皮下注射给予不同药物致敏,观察各组大鼠被动皮肤过敏反应(PCA)皮肤蓝斑直径大小和阳性率,并检测致敏血清总IgE水平。结果:PCA结果显示,四种品系大鼠的正常组均无蓝斑出现;OVA组,F344、BN、SD、Wistar大鼠蓝斑直径(阳性率)分别为11.67±3.61(6/6)、47.33±5.72(6/6)、5.70±4.81(6/10)、17.90±3.84(10/10),与正常组相比均明显升高且具有显著统计学差异;血清总IgE水平检测结果显示,OVA组血清总IgE含量变化与PCA试验结果一致。对灯盏花素,F344、BN、SD、Wistar大鼠蓝斑直径(阳性率)分别为5.17±2.32(4/6)、2.00±1.79(0/6)、1.67±1.97(0/10)、0.00±0.00(0/10),与正常组相比仅F344大鼠显示出显著性差异;血清总IgE仅F344、BN大鼠血清明显升高,且以F344大鼠变化倍数更高。结论:四种不同品系大鼠对灯盏花素所致被动皮肤过敏反应敏感性及血清总IgE水平均存在一定差异,两者具有一定相关性,其中以F344大鼠最为敏感。     

Ⅰ型过敏试验动物模型比较研究

目的:通过观察速发型过敏反应发生时的敏感指标的含量变化,比较常用于中药注射剂速发型过敏反应的几种动物模型的优劣.方法:①以卵蛋白为致敏原,直接对SD大鼠、BN大鼠、豚鼠进行致敏和激发,通过观察过敏反应的症状,ELISA法测量血清中的IgE、组胺、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的含量变化.②SD大鼠皮下注射致敏后的动物血清进行被动皮肤过敏试验,观察大鼠皮下是否出现蓝斑以及蓝斑面积.结果:①在致敏和激发途径、注射卵蛋白的剂量、次数、间隔时间相同的情况下,SD大鼠、BN大鼠、豚鼠血清中IgE、组胺、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的含量与相应的生理盐水组比均具有显著性的差异.其中豚鼠血清中IgE、类胰蛋白酶以及β-氨基己糖苷酶的变化率均高于SD大鼠和BN大鼠.BN大鼠血清中的组胺变化率高于豚鼠和SD大鼠.②被动过敏试验显示:BN大鼠卵蛋白组在SD大鼠上可造成明显的蓝斑.结论:仅采用豚鼠作为评价中药注射剂过敏反应的动物模型尚不能完全反映注射剂是否能引起过敏反应,增加不同品种试验动物以及相关检测指标,能更加全面的评价中药注射剂的致敏性.     

不同剂量卵蛋白对豚鼠血清中IgE的影响

目的 :用豚鼠全身过敏性试验模型探讨不同剂量卵蛋白(OVA)的过敏性。 方法 :用不同剂量的卵蛋白致敏激发豚鼠,复制全身过敏性试验模型,观察过敏反应症状,ELISA检测不同剂量OVA组和空白对照组的豚鼠血清中OVA特异性抗体IgE的含量变化。 结果: 全身过敏实验阳性对照组(OVA)致敏率为100%,大部分过敏反应级别较高;阴性对照组的致敏率为0%;14 d时过敏反应无明显差异,21 d时过敏反应有统计学意义( P < 0.05);14 d时OVA组与对照组比,血清IgE值水平无明显差异,21 d OVA组与对照组比,血清IgE值水平显著差异(P<0.05)。 结论: OVA致敏原的剂量在一定浓度范围内与过敏反应指标IgE值呈现相关性。     

不同种动物用于中药注射剂致敏性评价的比较

目的:通过主动全身过敏试验,对Wistar大鼠、SD大鼠、BN大鼠、豚鼠4种品系动物进行药物致敏性评价比较。方法:实验分为生理盐水组、牛血清白蛋白(BSA)组、清开灵注射液组。分别隔日腹腔注射致敏3次,末次致敏后第14 d静脉注射2倍致敏量激发,观察各组动物的过敏反应情况,同时检测血清免疫球蛋白E(IgE)、组胺(HIS)含量,摘取肺、气管做病理组织学检查。结果:4种品系动物给予BSA及清开灵注射液后均出现了过敏反应;BN大鼠、豚鼠给予BSA后,血清HIS含量明显升高,而给予清开灵注射液后,血清HIS含量均无明显改变,且均产生气管和肺组织的过敏性病理改变。结论:豚鼠及3种不同品系大鼠均可用于过敏试验,但4种动物敏感程度不同。     

BN大鼠与豚鼠用于药物致敏性评价的比较

目的:比较豚鼠和BN大鼠过敏试验,以寻找用于致敏原检测的更为敏感的动物模型.方法:将白色豚鼠和BN大鼠(Brown Norway rat)分别随机分为2组:1正常对照组,2牛血清白蛋白组.牛血清白蛋白组于试验的1,3,5 d分别腹腔注射0.6%牛血清白蛋白以致敏,1 mL/次,共3次.对照组腹腔注射给予相同体积的生理盐水注射液.于末次致敏后第7,14天,牛血清白蛋白组分别静脉注射2.4%牛血清白蛋白1 mL/次以激发过敏;而对照组静脉注射相同体积生理盐水.分别于第1次及第2次静脉注射后,观察每只动物过敏反应情况,根据过敏反应症状评分,评价过敏反应强弱;并从眼眶静脉丛取血,分离血清,采用ELISA竞争试验法检测IgE含量;此外,采用激发后动物的血清,用SD大鼠进行被动皮肤过敏试验,计算蓝斑面积,测定并计算伊文思蓝染料的渗出量.结果:豚鼠第1次及第2次激发后,牛血清白蛋白组的过敏症状评分与对照组比较无明显差异;BN大鼠第1次及第2次激发后,牛血清白蛋白组出现明显的过敏反应,经非参数秩和检测与对照组比较均有显著性差异;被动皮肤过敏试验显示,BN大鼠牛血清白蛋白组血清在SD大鼠上可造成明显的蓝斑和伊文思蓝渗出量明显增加.而豚鼠牛血清白蛋白组的蓝斑不明显,伊文思蓝渗出量与对照组比较无明显差异.同种动物比较,牛血清白蛋白组和对照组血清IgE含量无明显差异.结论:BN在主动全身过敏反应和被动皮肤过敏反应中均显示牛血清白蛋白呈现阳性反应,而豚鼠反应不明显,因此,BN大鼠用于致敏原检测比豚鼠更为敏感.同时,BN大鼠在技术操作上比豚鼠更方便和容易.     

绿原酸致过敏反应的实验研究

目的研究绿原酸的致敏性。方法将实验动物分为阴性对照组、阳性对照组（卵清蛋白）、绿原酸组,通过大鼠皮肤被动过敏反应（PCA）试验和豚鼠主动全身过敏反应（ASA）试验对绿原酸的致敏性进行研究。结果PCA试验为阴性,ASA试验为阳性。结论绿原酸为潜在的过敏原。     

中药注射剂对I型变态反应试验的影响

目的:研究中药注射剂的过敏反应,测定致敏动物血清IgE抗体和组织胺含量,观察其与过敏反应是否具有相关性,为提高Ⅰ型过敏反应试验预测的准确性提供实验依据.方法:选用3种中药注射剂进行PCA,ASA试验和类过敏反应研究,用ELISA法对致敏动物血清进行血清OVA-sIgE、血清总IgE、组织胺水平检测.结果:3种中药注射剂的PCA试验结果为阴性,血清总IgE水平与生理盐水组无明显差异;3种中药注射剂+OVA(不引起过敏反应的剂量)的研究中双黄连注射液(SHL)、鱼腥草注射液(YXC)的PCA试验均为阳性,OVA-sIgE水平明显增加,清开灵注射液(QKL)的PCA试验为阴性,OVAsIgE水平增加不明显,各组血清总IgE水平增加不明显;3种中药注射剂的ASA试验结果为阳性,3种中药注射剂(临床剂量和临床等效剂量)均引起了豚鼠的类过敏症状,且反应强弱呈现剂量和注射速度依赖性,各给药组血清组织胺水平均较生理.盐水组明显增高,血清总IgE水平无明显差异.结论:SHL和YXC具有增加豚鼠对卵蛋白敏感性的作用,SHL,YXC,QKL均能引起豚鼠的类过敏反应,3种中药注射剂的过敏反应的发生与特异性IgE抗体和组织胺水平有相关性.     

3种品系大鼠对灯盏花素所致 被动皮肤过敏差异性研究

目的:比较F344,SD,Wistar 3种品系大鼠对灯盏花素诱导的被动皮肤过敏(passive cutaneous anaphylaxis,PCA)反应的差异性。方法:取3种品系大鼠随机分为阴性对照组、天花粉组、灯盏花素组。采用sc给药方式,分别给予各组动物不同的药物,进行大鼠同种或大鼠-小鼠异种PCA试验,检测给予灯盏花素后动物皮肤蓝斑吸光度(A),比较药物对F344,SD,Wistar 3种品系大鼠的A变化率。结果:大鼠同种PCA试验显示:3种品系大鼠注射灯盏花素25 mg.kg-1致敏后,F344大鼠皮肤蓝斑A为0.064±0.005 7,明显升高(P<0.05),SD,Wistar大鼠PCA反应均为阴性。大鼠-小鼠异种PCA试验显示:注射F344大鼠抗血清后,小鼠异种PCA反应为阳性,A为0.10±0.01(P<0.05),注射SD,Wistar大鼠抗血清后,反应均为阴性。结论:2种试验方法结果均显示,3种品系大鼠对灯盏花素的敏感性存在差异,其中以F344大鼠最为敏感。     

BN大鼠用于评价中药注射液速发型过敏反应模型的建立及适用性评价

以清开灵注射液、双黄连注射液、黄芩苷、绿原酸为受试样本,以豚鼠为对照,通过观察BN大鼠(brown norway rats)过敏反应的特异性来建立中药注射液速发型过敏反应的动物模型,并对两者在评价中药注射液过敏反应中的适用性进行比较.本研究以中药注射液为致敏原,直接对BN大鼠进行致敏和攻击后,通过观察过敏症状、过敏反应率、过敏反应程度、组胺释放量、靶器官病变率和病变程度的变化,来评价BN大鼠过敏反应动物模型.结果显示中药注射剂致敏后,BN大鼠出现明显的过敏症状、血清和组织中组胺含量明显增加,肺组织和气管出现明显的病理改变,同时以青霉素和天花粉蛋白为阳性对照,也出现速发型过敏反应的表现;BN大鼠的过敏反应发生率、过敏反应程度、靶器官病变率和病变程度均显著高于豚鼠.试验结果说明BN大鼠为评价中药注射液过敏反应的适宜动物模型,且其敏感性高于豚鼠.     

鱼腥草注射液致豚鼠全身主动性过敏反应的实验研究

目的：观察鱼腥草注射液对豚鼠全身主动性过敏反应的影响。方法：采用健康合格的豚鼠,体质量 250 ~ 350 g,隔日分别静脉注射牛血清白蛋白、不同批次的鱼腥草注射液、不同批次的聚山梨酯 80、不含聚山梨酯 80 的鱼腥草注射液。然后分别于第14 天、第21 天和第21 天、第28 天激发,观察各组动物过敏症状及血清组胺和总 IgE 含量的影响。结果：血清组胺和总IgE 的测定结果显示牛血清白蛋白组的组胺和总 IgE 的含量同阴性对照组比较,差异有显著统计学意义（P 〈 0.01）,三批鱼腥草注射液组、聚山梨酯 80 组和不含聚山梨酯 80 的鱼腥草注射液组与阴性对照组比较,差异无统计学意义（P 〉 0.05）。结论：不同厂家不同批次合格的含聚山梨酯 80、不含聚山梨酯 80 的鱼腥草注射液对豚鼠全身主动性过敏反应均无影响。     

不同针刺频度对致敏豚鼠血清总IgE影响的实验研究

目的:对针刺“大椎”治疗哮喘的时效性进行初步探讨。方法:将豚鼠随机分为空白组、模型组、每日针刺组、隔日针刺组和隔2日针刺组共5组,除空白组外均用卵清白蛋白致敏并激发哮喘。选“大椎”作为治疗穴位,以放免法检测各组血清总IgE。结果:各针刺组均可使致敏豚鼠升高的血清总IgE含量下降,但下降幅度有所差异,以隔日针刺组最为明显,与模型组相比有极其显著差异(P<0·001),其次为隔2日针刺组(P<0·01),再次为每日针刺组(P<0·05)。结论:针刺“大椎”穴使血清IgE含量明显下降,提示针刺“大椎”穴对支气管哮喘有治疗作用,且随治疗频度的不同,其疗效可能不同。     

鼻舒滴丸抗过敏作用及机理分析

目的 :研究中药鼻舒滴丸 (BSDW)对 2 .4-二异氰酸甲苯酯 (TDI)和组织胺造型豚鼠的影响及其作用机理。方法 :采用 10%TDI橄榄油溶液为致敏剂造成豚鼠变应性鼻炎模型 ,观察BSDW对豚鼠变应性鼻炎模型鼻部症状、病理组织学及对血和鼻粘膜中组织胺含量及血清IgE含量的影响。采用组织胺造成豚鼠休克模型 ,观察BSDW对组织胺造型豚鼠的症状影响。结果 :BSDW可显著减轻变应性鼻炎模型豚鼠鼻粘膜病理改变 ,与造型对照组相比可使鼻粘膜柱状上皮和固有层腺体增生显著减轻 ,固有层嗜酸性细胞、嗜中性白细胞、单核细胞浸润明显减少 ,纤毛明显修复。还可明显降低变应性鼻炎模型豚鼠血清IgE的水平 ,减少血清及鼻粘膜中组胺的含量 ,可显著延长变应性鼻炎模型和组织胺造型豚鼠喘息和惊厥出现的时间 ,明显减少豚鼠哮喘的次数及延长组织胺造型豚鼠休克死亡时间。结论 :鼻舒滴丸有明显的抗过敏作用 ,其抗过敏作用的机理可能与其能降低血清IgE的含量、抑制全血和鼻粘膜中组织胺的释放密切相关。     

吐温80及其配制的鱼腥草注射液致豚鼠过敏反应的实验研究

目的 评价2种吐温80及其配制的鱼腥草注射液静脉给药对豚鼠的致敏性.方法 采用全身主动过敏试验方法,豚鼠分别腹腔注射各组受试药液以致敏,致敏期间每日观察动物状态.末次致敏后第11天,各组豚鼠由足趾静脉注射2倍致敏剂量的相应药液进行激发,激发给药前15 min及激发后连续40 min观察豚鼠的反应,记录症状出现、消失时间,评价动物反应症状.激发停药后40 min取血,ELISA方法检测血浆IgE、组胺含量,并结合反应症状结果综合评价致敏性. 结果各组豚鼠致敏期间无异常反应,激发后综合判定致敏性,卵白蛋白阳性对照组、0.5%吐温80(1)组可诱发豚鼠过敏反应阳性,其他各组均未诱发豚鼠出现典型的过敏反应.结论 控制吐温80质量,并将浓度限定在0.25%及以下,可在保证药物增溶效果的同时避免过敏反应的发生.在进行豚鼠全身主动过敏试验时,以豚鼠反应症状为主要指标,血浆IgE、组胺升高为辅助指标综合判定致敏性,可在一定程度上提高试验的灵敏性.     

柴朴汤对支气管哮喘豚鼠支气管肺组织中Bcl-2表达的影响

目的:观察中药柴朴汤对哮喘豚鼠支气管肺组织中Bc1-2表达的影响.方法:40只健康豚鼠随机分为正常对照组,哮喘模型组,地塞米松组(0.001 g·kg-1),柴朴汤组(0.35 g·kg-1),每组10只.采用卵蛋白腹腔注射和雾化吸入激发建立哮喘模型,各组豚鼠均于激发前30 min予相应灌胃处理,隔日1次,共7次.末次激发24h后,处死各组豚鼠.检测各组豚鼠血液中嗜酸性粒细胞数及支气管肺泡灌洗液(BALF)中白细胞(WBC)数,嗜酸粒细胞(EOS)数及百分比;HE染色法观察各组豚鼠支气管肺组织病理改变;免疫组化法检测支气管肺组织中Bcl-2蛋白表达,原位杂交法检测支气管肺组织中Bcl-2 mRNA的表达.结果:柴朴汤组外周血中EOS数,BALF中WBC敷、EOS数及百分比均较哮喘模型组明显降低(P＜0.05).与哮喘模型组比较,柴朴汤组支气管肺组织中Bcl-2 mRNA及蛋白的表达有显著性差异(P＜0.05).地塞米松组与柴朴汤组比较,无明显差异.结论:柴朴汤可以明显降低哮喘豚鼠外周血和支气管肺泡灌洗液中EOS,减轻支气管肺组织的炎症反应,下调Bcl-2 mRNA和蛋白的表达水平.     

苏黄止咳胶囊改善哮喘豚鼠气道重塑的作用及其机制

目的探讨苏黄止咳胶囊改善哮喘豚鼠气道重塑的作用及其机制。方法36只豚鼠随机分为正常组,模型组,苏黄止咳胶囊低、中、高剂量组(1.5、3、6 g/kg),阳性对照组(沙丁胺醇,5 mg/kg)。除正常组外,各组豚鼠均腹腔注射1 mg/mL卵清白蛋白(OVA)和10 mg/mL Al(OH)_3混悬液1 mL,同时以1%OVA雾化致敏,隔天刺激1次制造哮喘模型,连续给药2周。末次给药后1 h,检测豚鼠的咳嗽潜伏期,HE染色分析豚鼠气管及肺组织病理形态,ELISA测定肺组织中白介素IL-4、IL-5和组胺水平,immunoblot法检测肺组织中相关蛋白变化,离体实验观察苏黄止咳胶囊对豚鼠支气管舒张率的影响,MTT比色法检测苏黄止咳胶囊(125、250、500μg/mL)和阳性对照组(氨茶碱,50μg/mL)对组胺诱导大鼠支气管平滑肌细胞(RBSMCs)细胞增殖的抑制率影响,免疫荧光法检测其对增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白的影响,immunoblot法检测其对酪氨酸激酶(JAK2)、信号传导与转录激活因子(STAT3)、蛋白激酶(Akt)、细胞周期相关蛋白的影响。结果与模型组比较,苏黄止咳胶囊延长哮喘豚鼠的咳喘潜伏期,改善气管平滑肌增厚、肺组织炎症及肺组织IL-4、IL-5、组胺水平;改善离体豚鼠支气管舒张率;有效抑制RBSMCs细胞增殖,改善PCNA、JAK2、STAT3、Akt及周期相关蛋白表达。结论苏黄止咳胶囊通过影响JAK/STAT信号通路来调控细胞周期相关蛋白抑制RBSMCs细胞增殖,改善支气管平滑肌增生,缓解气道重塑,从而发挥较好的平喘作用。