miR-200c通过下调TUBB3基因表达逆转老年肺癌患者顺铂耐药性的机制

目的探讨miR-200c逆转肺癌细胞顺铂耐药性的作用机制。方法 miR-200c模拟物转染肺癌A549细胞后,采用实时定量PCR法检测miR-200c的表达;采用细胞活力测定(MTS)法检测miR-200c对肺癌A549细胞顺铂耐受性的影响。采用流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡率的变化。采用Western blotting检测肿瘤细胞耐药蛋白survivin和Bcl-2蛋白的表达。通过生物信息学分析发现miR-200c下游靶分子TUBB3表达存在差异后,构建TUBB3 3′UTR的野生型和突变型荧光素酶报告载体,然后利用双荧光素酶活性分析miR-200c对TUBB3基因表达的结合位点和调控作用。通过Western blotting检测miR-200c对TUBB3蛋白表达的调控作用以及Bcl-2蛋白和肿瘤细胞耐药蛋白survivin的表达。采用SPSS 19.0统计软件分析实验数据。结果与对照组相比,miR-200c转染肺癌细胞株后,肺癌细胞对顺铂的敏感性呈明显增加趋势[IC_(50)分别为(37.3±3.1)和(15.3±3.3)μmol/L,P0.01]。过表达miR-200c的A549/DDP组的细胞凋亡率明显高于NC组(P0.01)。而肿瘤耐药相关基因Bcl-2和survivin蛋白表达降低。转染miR-200c mimics的A549/DDP细胞中TUBB3蛋白和mRNA的表达均下调(P0.01)。双荧光素酶活性分析显示miR-200c对TUBB3基因表达具有调控作用(P0.01)。这些结果均证实TUBB3为miR-200c的下游靶基因。pcDNA-TUBB3质粒转染后,过表达miR-200c的A549/DDP细胞株survivin和Bcl-2蛋白表达较miR-200c mimics组上调。结论 miR-200c可通过下调TUBB3基因的表达逆转肺癌顺铂耐药细胞的耐药性。     

miR-34a逆转非小细胞肺癌A549/DDP细胞对顺铂的耐药性及其机制

目的探讨过表达miR-34a对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂(DDP)耐药性的影响及可能机制。方法成功构建过表达miR-34a的真核载体p CDNA3.1+miR-34a后,将A549/DDP细胞分为对照组(无转染)、空转染组(转染空质粒)和过表达组(转染p CDNA3.1+miR-34a),采用实时荧光定量PCR(q PCR)法检测转染24、48、72及96 h后各组miR-34a水平;给予不同浓度DDP(2、4、8、16、32和64μg/ml)处理48 h后采用CCK-8法比较各组对DDP的敏感性,流式细胞仪PI/Annexin V双染法检测各组转染48、96 h后的凋亡率,分别采用Western印迹检测各组转染48、96 h后常见耐药基因的表达情况。结果 A549/DDP细胞的miR-34a水平均低于其亲本细胞A549和正常支气管上皮细胞系HBE(P0.05);与其余两组相比,过表达组转染后的miR-34a水平升高,且对A549/DDP细胞的增殖抑制率升高(P0.05);过表达组的半数抑制浓度均低于其余两组,过表达组转染48、96 h后的凋亡率高于其余两组,而转染48 h后的P-糖蛋白、多药耐药相关蛋白1及肺耐药相关蛋白的水平低于其余两组(P0.05);对照组和空转染组以上指标的差异均无统计学意义(P0.05)。结论 A549/DDP细胞中miR-34a水平较低,通过真核载体将其过表达后可抑制增殖率并提高其对DDP的敏感性,可能与其诱导凋亡及降低耐药基因的表达有关。     

自噬相关基因Beclin 1沉默对人肺癌A549细胞顺铂耐药性的影响

目的探讨应用RNAi技术沉默Beclin 1基因对人肺癌A549细胞顺铂(DDP)耐药性的影响。方法应用真核细胞转染技术将Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1重组质粒转入人肺癌DDP耐药A549/DDP细胞,通过RT-PCR和Western印迹检测Beclin-1基因表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞对DDP的耐药性及细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡。结果与空白对照组及空质粒对照组相比,重组质粒组Beclin 1mRNA及蛋白表达下降,凋亡率增加,对DDP的敏感性增加(均P<0.05)。结论 Psilencer 3.1-siRNA-Beclin 1转染人肺癌A549细胞后,可有效抑制Beclin-1基因的表达,增加人肺癌A549细胞对DDP的敏感性,促进细胞凋亡。     

内质网应激激活剂通过上调GRP78增加肺癌A549细胞对顺铂的敏感性

目的探讨内质网应激激活剂(TM)增加肺癌A549细胞对顺铂(DDP)敏感性的机制。方法 DDP和TM处理肺癌A549细胞,MTT法检测肺癌A549细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Western印迹检测凋亡相关蛋白Cleaved Caspase-7表达。结果不同浓度的DDP(0,10,20,50μmol/L)作用于肺癌A549细胞24 h,细胞存活率以剂量依赖的方式下降;TM诱导内质网应激后,提高了DDP(20μmol/L)诱导的细胞凋亡率(55.23%±2.31%,P0.05);同时检测到凋亡相关蛋白Caspase-7表达增加。结论 DDP能够诱导肺癌A549细胞凋亡,但是TM通过上调GRP78增加了肺癌A549细胞对DDP敏感性,联合应用TM和DDP有望成为治疗肺癌的新策略。     

MiR-21对肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨miR-21对肺癌细胞增殖与凋亡的影响。方法培养人肺癌细胞HBE、H460、A549和H446,将实验分为miR-21 inhibitor组、miRNA scramble组、空白对照组。荧光定量检测肺癌细胞H460、A549和H446 miR-21的表达;荧光定量PCR检测将miR-21 inhibitor和miRNA scramble转染到培养至对数生长期的人肺癌细胞H460后,对照组不转染的各组细胞的表达量;MTT实验检测转染miR-21 inhibitor后对细胞增殖的影响;流式细胞仪检测转染miR-21 inhibitor后对细胞凋亡的影响;Western印迹检测与凋亡相关蛋白的活性。结果肺癌细胞H460、A549和H446miR-21的表达显著高于正常肺癌细胞HBE(P<0.01),由于肺癌细胞株H460的miR-21表达在3个细胞株中高表达,因此选择肺癌细胞株H460做后续研究;将miR-21 inhibitor组和miRNA scramble组转染到肺癌细胞株H460后,荧光定量PCR显示,miR-21 inhibitor组的miR-21的相对表达量为显著低于空白对照组(P<0.01),miRNA scramble组的相对表达量与空白对照组无差异(P>0.05);MTT结果显示,转染4 d后,miRNA scramble组与空白对照组细胞增殖率无差异(P>0.05),而miR-21 inhibitor组显著低于空白对照组(P<0.05),且随时间延长,细胞增殖率逐渐下降;流式结果显示,与空白对照组和miRNA scramble组比较,miR-21 inhibitor组细胞的凋亡率显著升高(P<0.01);Western印迹显示,miR-21 inhibitor组Cleaved-caspase-3和Bax蛋白的表达显著高于miRNA scramble组和空白对照组,而miR-21 inhibitor组Bcl-2蛋白的表达显著低于miRNA Scramble组和空白对照组(P<0.05)。结论下调miR-21的表达,可抑制肺癌细胞H460的生长,增加细胞的凋亡,其作用机制可能与Bcl-2家族的调节有关。     

三叶青黄酮通过调控miR-497表达对肺癌细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨三叶青黄酮(RTHF)对肺癌细胞增殖、凋亡的影响及其对miR-497的调控作用。方法 体外培养人肺癌细胞A549,加入不同剂量的RTHF处理细胞;miR-NC、miR-497 mimics转染至A549细胞,anti-miR-NC、anti-miR-497转染至A549细胞后加入RTHF处理细胞;采用噻唑蓝(MTT)实验与流式细胞术分别检测细胞增殖及细胞凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测肺癌组织、癌旁组织及各组A549细胞中miR-497的表达量;Western印迹法检测B细胞淋巴瘤(Bcl)-2、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达量。结果 RTHF可明显提高细胞增殖抑制率、凋亡率及p21、Bax蛋白水平明显降低细胞周期蛋(Cyclin)D1、Bcl-2蛋白水平(均P<0.05);与癌旁组织比较,肺癌组织中miR-497的表达水平明显降低(P<0.05);RTHF可明显提高A549细胞中miR-497的表达水平(P<0.05);转染miR-497 mimics可明显提高细胞增殖抑制率与凋亡率及p21、Bax蛋白水平,明显降低Cyc...     

肺癌组织中miRNA-34a表达对肺癌细胞系A549增殖和迁移的影响

目的探讨肺癌组织中微小RNA(miR)-34a的表达情况及其对肺癌细胞系A549增殖和迁移的影响。方法 RT-PCR方法检测miR-34a在肺癌组织和肺癌细胞系A549中的表达情况。克隆形成实验检测miR-34a对肺癌细胞系A549增殖能力的影响;划痕实验检测miR-34a对肺癌细胞系A549迁移能力的影响。Target Scans软件预测miR-34a可能的靶基因,并采用荧光素酶报告基因实验验证预测的靶基因。Western印迹方法检测miR-34a对预测靶基因表达的影响。结果 miR-34a在肺癌组织和肺癌细胞系A549中的表达较正常组织显著降低(P0.01)。转染miR-34a可显著抑制A549细胞的增殖和迁移能力(P0.01),而转染miR-34a抑制剂可增加A549细胞的增殖和迁移能力(P0.01)。Target Scans软件预测miR-34a可能的靶基因为B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2),且得到荧光素报告实验结果证实。Western印迹结果显示转染miR-34a可显著抑制A549细胞中Bcl-2的表达(P0.01),而转染miR-34a抑制剂可增加A549细胞中Bcl-2的表达(P0.01)。结论 miR-34a可通过调节Bcl-2的表达而发挥肺癌抑制作用。     

miR-10b通过抑制KLF4表达诱导胃癌细胞对顺铂耐药

背景胃癌(gastric cancer, GC)化疗容易产生获得性化疗耐药.miR-10b能参与调节食管癌和鼻咽癌细胞顺铂(cisplatin,DDP)耐药,而在GC中其与DDP化疗敏感性的关系并不清楚.目的探讨miR-10b是否参与GC细胞对DDP耐药,以及其中的分子机制.方法采用DDP反复刺激SGC-7901和MGC-803细胞并浓度递增法构建SGC-7901/DDP和MGC-803/DDP细胞.检测SGC-7901/DDP和MGC-803/DDP细胞中mi R-10b和KLF4的表达.对SGC-7901和MGC-803细胞转染慢病毒携带的miR-10b过表达载体, MTT法检测miR-10b过表达对DDP敏感性的影响; Annexin V-FITC/PI染色法检测miR-10b过表达对DDP诱导的细胞凋亡的影响; RT-qP CR和Western blot检测miR-10b过表达对KLF4mR NA和蛋白表达的影响.进一步构建异体移植瘤模型,并给予DDP化疗后,宏观观察瘤体形态并称量瘤体质量.对SGC-7901和MGC-803细胞共转染miR-10b和KLF4后,MTT法检测细胞对DDP敏感性变化.结果与SGC-7901和MGC-803细胞比较, SGC-7901/DDP和MGC-803/DDP细胞中miR-10b表达水平显著增加(P 0.01),KLF4mRNA和蛋白水平显著降低(P 0.01).体外实验显示,过表达miR-10b促进GC细胞对DDP耐药,抑制KLF4表达(P0.01);在体实验显示, DDP治疗后, miR-10b组瘤体质量显著高于NC组(P0.01).过表达KLF4能部分逆转过表达miR-10b诱导的GC细胞对DDP耐药.结论miR-10b通过抑制KLF4表达促进GC细胞DDP化疗耐药,而miR-10b高表达产生的DDP耐药性可以被上调KLF4解除.     

蛋白酶体抑制剂MG132联合顺铂诱导肺癌A549细胞凋亡的机制

目的探讨蛋白酶体抑制剂(MG132)与顺铂(DDP)联合诱导肺癌A549细胞凋亡的机制及作用。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测不同浓度MG132、DDP对肺癌A549细胞的最适作用时间以及抑制率;通过Hochest33342染色法检测细胞形态变化;应用流式细胞术(FCW)检测MG132、DDP及两药联合作用于肺癌A549细胞的凋亡率;采用Western印迹检测药物干预前后细胞中促凋亡蛋白半胱氨酸蛋白酶(caspase)9、核转录因子(NF-κB)的表达情况。结果 MTT结果显示MG132、DDP能有效抑制细胞的增殖,呈浓度及时间依赖性;FCW结果显示MG132与DDP联合用药组作用于肺癌A549细胞凋亡率为(68.27±0.31)%,与MG132(22.13±0.36)%、DDP(25.76±0.25)%单用药组相比,细胞凋亡率明显提高(P<0.05)。Western印迹结果显示,与单用药组相比较,联合用药组凋亡相关蛋白caspase9表达明显增强,NF-κB表达显著减少。结论 MG132与DDP联合应用可明显提高细胞凋亡率,其机制可能是通过提高促凋亡蛋白caspase9的表达,并降低细胞NF-κB的表达而实现的。     

lncRNA ADPGK-AS1通过调控miR-217表达对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究lncRNA ADPGK-AS1和miR-217在非小细胞肺癌中的表达及其对非小细胞肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响。方法以癌旁组织为对照,qRT-PCR检测lncRNA ADPGK-AS1和miR-217在116例非小细胞肺癌组织中的表达水平,双荧光素酶报告系统验证ADPGK-AS1和miR-217的调控关系,在A549细胞中转染si-ADPGK-AS1和miR-217以抑制lncRNA ADPGK-AS1和过表达miR-217,MTT法和流式细胞术检测A549细胞增殖和凋亡,Western blot检测细胞中CyclinD1、p21、Bax和Bcl-2的蛋白表达水平。结果与癌旁组织相比,在116例非小细胞肺癌组织中lncRNA ADPGK-AS1的含量显著升高(P0.05),miR-217的含量则显著下降(P0.05);lncRNA ADPGK-AS1靶向负调控miR-217的表达;抑制ADPGK-AS1表达和过表达miR-217均可抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖并促进细胞凋亡,使细胞中CyclinD1和Bcl-2含量降低(P0.05),p21和Bax含量升高(P0.05);干扰miR-217表达逆转了抑制ADPGK-AS1表达对A549细胞增殖、凋亡的作用。结论 LncRNA ADPGK-AS1可能通过靶向miR-217促进非小细胞肺癌A549细胞增殖,抑制细胞凋亡。LncRNA ADPGK-AS1可能是非小细胞肺癌的潜在分子靶点。     

廿烷五烯酸协同顺铂对肺腺癌细胞株的影响

目的观察廿烷五烯酸（EPA）联合顺铂对肺腺癌细胞株A-549的抗增殖和诱导凋亡作用。方法A-549进行体外培养后分为A组和B组。B组分别加EPA15（B1组）、30（B2组）、60（B3组）μg/ml及顺铂30μg/ml（B4组）、顺铂30μg/ml＋EPA15μg/ml（B5组）、顺铂30μg/ml＋EPA 30μg/ml（B6组）、顺铂30μg/ml＋EPA60μg/m（B7组）,分别培养24、48、72、96 h。A组加培养液50μl。实验步骤两组相同。MTT法测A-549的生长抑制率,倒置显微镜、光学显微镜观察细胞形态,TUNEL法检测细胞凋亡率。结果①B1～B7（EPA在15～60μg/ml范围内）组,A-549均呈抑制生长,EPA与顺铂具有协同抗癌作用,并表现出浓度、时间依赖性关系。②光镜下B组A-549体积变小、变圆,核染色质浓缩或染色质块形成,部分细胞核脱落,细胞膜起泡形成凋亡小体;A组细胞生长旺盛,呈不规则形,核分裂象多见,细胞核规整,染成均一蓝色。倒置显微镜下,B组A-549体积变小、变圆,核染色质凝集,细胞间连接疏松,贴壁能力减弱;A组细胞贴壁生长良好,充分生长,透亮度好。③B1～B3组细胞凋亡指数（AI）依次升高,分别为5．57％±0．82％、11．68％±1．26％、24．53％±1．68％（P〈0．01）。结论体外实验中,EPA对A-549生长有抑制作用,呈明显的量效和时效关系;EPA与顺铂有协同作用。     

微小RNA-21在顺铂联合5-氟尿嘧啶抑制肺癌细胞株作用中的表达变化

目的探讨顺铂和5-氟尿嘧啶在体外联合用药对肺癌细胞株A549细胞存活率、细胞周期的影响以及在这过程中微小RNA-21(microRNA-21,miR-21)表达水平的变化。方法顺铂和5-氟尿嘧啶单药或联合用药处理肺癌A549细胞后,采用CCK-8法检测细胞存活率;倒置显微镜观察细胞形态变化;流式细胞仪技术检测细胞周期;实时荧光定量PCR检测miR-21的表达变化。结果顺铂和5-氟尿嘧啶单药对A549细胞的抑制作用都具有浓度依赖性,两者联合用药48h后细胞的存活率明显低于单药组(P0.05),并且细胞形态改变更加明显,悬浮、变圆的细胞也更多;顺铂处理A549细胞后,将细胞阻滞于S期和G2期,5-氟尿嘧啶阻滞A549细胞于S期,联合用药后细胞阻滞于S期和G2期;随着顺铂和5-氟尿嘧啶作用浓度的增加,miR-21的表达水平上调,联合用药后miR-21的表达亦上调,但趋势没有顺铂组明显(P0.05)。结论顺铂在体外联合5-氟尿嘧啶对A549细胞存活率的抑制有协同作用,同时可以上调细胞内miR-21表达水平。     

顺铂对胃癌细胞Bax和Bcl-2表达的影响

目的通过研究顺铂对人胃癌BGC-823细胞Bax和Bcl-2的影响,探讨顺铂对人胃癌BGC-823细胞增殖和凋亡的影响及可能的机制。方法用化疗药物顺铂以不同浓度、不同时间处理对数期生长的人胃癌BGC-823细胞,采用MTT法检测顺铂对BGC-823细胞增殖抑制率的影响,采用免疫印迹和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法检测Bax及Bcl-2蛋白和mRNA的表达。结果顺铂对人胃癌细胞BGC-823生长增殖具有明显抑制作用,其效应成浓度和时间依赖性（P〈0．05）。不同浓度的顺铂处理BGC-823细胞24小时后,Bax蛋白和mRNA水平成浓度依赖性增加（P〈0．05）,而Bcl-2蛋白和mRNA水平成浓度依赖性减少。结论经顺铂处理的人胃癌BGC一823细胞,不论是在转录水平还是在翻译水平均上调了Bax的表达,同时使Bcl-2表达下调,此途径可能为顺铂所诱导肿瘤细胞凋亡的机制之一。     

miR-515-5p靶向RING1增强NSCLC A549/DDP细胞顺铂敏感性分析

目的探讨微小RNA-515-5p(miR-515-5p)对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)细胞顺铂敏感性的影响及机制。 方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测BEAS-2B、A549及A549/DDP细胞中miR-515-5p的表达情况。A549/DDP细胞分为NC组、miR-515-5p组、si-RING1组及miR-515-5p inh+si-RING1组,CCK-8法检测A549/DDP细胞增殖活性,用WB检测RING1和凋亡相关蛋白的表达情况。用双荧光素酶报告基因系统验证miR-515-5p与RING1的靶向关系。 结果miR-515-5p在BEAS-2B、A549及A549/DDP中的表达水平分别为(1.00±0.03)、(0.61±0.03)、(0.31±0.04);A549/DDP细胞转染miR-515-5p mimics后,NC组和miR-515-5p组细胞在24、48、72和96 h时的OD₄₅₀值分别为(0.61±0.02)、(0.52±0.02),(0.84±0.02)、(0.68±0.04),(1.03±0.03)、(0.79±0.04),(1.08±0.03)、(0.86±0.04);以上指标组间差异均有统计学意义(P<0.05)。miR-515-5p组cleaved caspase-3、cleaved PARP和Bax表达水平显著高于NC组,Bcl-2的表达水平显著低于NC组。A549/DDP细胞转染si-RING1、miR-515-5p inhibitor后,NC组,si-RING1组和miR-515-5p inh+si-RING1组细胞在24、48、72和96 h时的OD₄₅₀值分别为(0.63±0.02)、(0.49±0.04)、(0.58±0.03)、(0.83±0.03)、(0.62±0.05)、(0.80±0.02)、(1.05±0.04)、(0.76±0.03)、(1.02±0.04)、(1.15±0.05)、(0.86±0.03)、(1.12±0.06);以上指标组间差异均有统计学意义(P<0.05)。si-RING1组cleaved caspase-3、cleaved PARP和Bax表达水平显著高于NC组和miR-515-5p inh+si-RING1组,Bcl-2的表达水平显著低于NC组和miR-515-5p inh+si-RING1组。 结论miR-515-5p通过靶向下调RING1的表达增强A549/DDP细胞顺铂敏感性。     

原发性肝癌不同血瘀证患者肝组织微小RNA表达差异的初步研究

目的对原发性肝癌中医辨证分型提供客观的量化标准。方法采用微小RNA（miRNA）芯片检测、实时定量PCR验证,对比观察原发性肝癌气虚血瘀证、肝郁血瘀证、肝胆湿热证及肝瘀痰结证患者（各3例,分别以证型命名组名）肝组织10种miRNA表达水平的差异;并与3例正常肝组织（正常组）进行比较。结果 miR-122-3p各证型组均明显高于正常组（P〈0.05）,气虚血瘀组明显高于其他各证型组（P〈0.05）;miR-30b-5p在肝胆湿热组明显低于其他各证型组（P〈0.05）,其他各证型组与正常组比较无显著性差异;miR-182-5p在气虚血瘀组、肝郁血瘀组和肝胆湿热组均明显高于正常组（P〈0.05）;miR-221-5p在肝胆湿热组和肝郁血瘀组明显低于其他各证型组及正常组（P〈0.05）,但这两组间无显著性差异;miR-221-3p在肝郁痰结组高于其他各证型组,但无统计学差异;miR-21-5p在气虚血瘀组、肝郁血瘀组和肝郁痰结组均高于肝胆湿热组和正常组,但无统计学差异。miR-222-3p、miR-214-3p、miR-491-3p、miR-422a各组间未见明显差异。结论原发性肝癌不同血瘀证患者肝组织miRNA水平存在显著性差异;本研究为原发性肝癌的中医辨证分型提供了客观的量化标准。     

miRNA-126靶向抑制A549细胞迁移和侵袭能力的研究

目的研究microRNA-126（miR-126）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响。方法利用脂质体介导法将十勾建的miR126过表达质粒转染至NSCI．C细胞株A549细胞（A549／miR-126组）,并设空质粒转染组（A549／MOCK组）和空白对照组（A549组）。利用RT-PCR技术检测3组细胞中EGFI。7（miR126的靶标）的表达水平,采川细胞划痕实验观察细胞迁移能力差异,采用Transwell小室法分析3组细胞侵袭能力的差异。结果RT—PCR检测A549／miR-126组、A549／MOCK组和A549组细胞中EGFI。7mRNA分别为2．32±0．088、1．43±0．026和1．00±0．000,差异有统计学意义（P〈0．01）;细胞划痕实验显示A549／miR—126组、A549jM（）CK组和A549组细胞平均迁移距离分别为3．0μm、2．65μm和0．5μm,平均抑制率分别为0、11．25％和83．75％,差异有统计学意义（P〈O．05）;Transwell小室实验显示,A549／miR126组24hr侵袭细胞数为（28．6±2．322）个,36h侵袭细胞数为（29．2±3．7683）个,A549／M（）CK组24h为（49．8±3．7014）个,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-126可上调EGFL7mRNA的表达,并可能通过表达产物EGFI。7蛋白抑制A549细胞的迁移和侵袭能力。     

氨溴索对大鼠胃内容物吸入性肺损伤细胞凋亡的影响

目的研究细胞凋亡在胃内容物吸入性肺损伤中的作用机制,并初步探讨氨溴索对肺损伤发生后细胞凋亡的影响。方法 30只健康Sprague-Dawley大鼠随机分为3组:对照组、损伤组、氨溴索组。采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bc12(B cell lymphoma/lewkmia-2)蛋白、Bax(Bc12 associated x protein)蛋白及Caspase-3蛋白表达;DNA原位末端标记(TUNEL)法测定肺组织细胞凋亡指数。结果与对照组比较,损伤组中Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达增多,细胞凋亡指数增高;Bc12蛋白表达减少;差异均显著(P<0.05)。与损伤组比较,氨溴索组Bax蛋白、Caspase-3蛋白表达减少,细胞凋亡指数降低;Bc12蛋白表达增高;差异均显著(P<0.05)。结论细胞凋亡参与了胃内容物吸入后肺损伤发病过程,氨溴索在吸入性肺损伤组织中发挥抗细胞凋亡作用,可能机制在于调控死亡信号通路中Bax/Bc12蛋白表达相关。     

肺癌细胞及组织中miR-181a、miR-200a、miR-200c表达变化及意义

目的：观察肺癌细胞及组织中 miR-181a、miR-200a、miR-200c 的表达变化,并探讨其临床意义。方法选择人肺癌细胞系NCI-H1299、NCI-H358、H460、A549及人正常支气管上皮细胞HBE,10例肺癌患者的癌组织及其相应癌旁组织。采用RT-PCR法检测各细胞系及组织中的miR-181a、miR-200a、miR-200c,并分析miRNA表达与临床参数的关系。结果 NCI-H1299、NCI-H358、A549细胞中miR-181a相对表达量均低于HBE细胞,NCI-H1299、NCI-H358、H460、A549细胞中miR-200a相对表达量均低于HBE细胞,NCI-H358、H460细胞中miR-200c相对表达量均高于HBE细胞,P均＜0．05。肺癌及癌旁组织中miR-181a和miR-200a相对表达量比较,P均＞0．05;肺癌组织中miR-200c相对表达量高于癌旁组织,P＜0．01。有淋巴结转移的肺癌患者miR-200a相对表达量低于无淋巴结转移者,P＜0．01;其余miRNA相对表达量与临床病理参数均无关,P均＞0．05。结论 miR-181a、miR-200a在肺癌细胞株中表达普遍降低,而miR-200c在肺癌细胞及组织中表达普遍升高,可能与肺癌的发病有关。     

Onco-microRNA miR-130b promoting cell growth in children APL by targeting PTEN

Objective:To study the expression of microRNA-130b(miR-l 30b) in children acute promyelocytic leukemia(APL) and its role for regulating PTEN expression.Methods:A total of SO children APL marrow tissues and IS normal marrow tissues between January and December in 2012 were collected into our study.The expression of miR-l30 b in APL and normal marrow tissues were detected by quantitative real-time polymerase chain reaction.MiR-l30 b inhibitor was transfected into HL-60 cells.Cell Counting Kit-8 assay and flow cytometry were used to measure cell proliferation and apoptosis.respectively.The expression of PTEN,a potential target of miR-130 b,and its downstream genes,Bcl-2 and Box,in transformed cells were detected by quantitative real-time polymerase chain reaction and western-blot Results:The expression of miR-l30 b was significantly higher in children APL marrow tissues than in normal marrow tissues(P0.05).Down-regulation of miR-1 30 b could significantly suppress cell proliferation and induce apoptosis in HL-60 cells(P0.05).PTEN expression was upregulated when miR-130 b was knocking-down(P0.05).As downstream genes of PTEN,the expression of Bcl-2 and Box were regulated as well.Conclusions:MiR-130 b is overexpressed in children APL marrow tissues and associated with cell growth.MiR-130 b may promote children APL progression by inducing cell proliferation and inhibiting apoptosis.     

miR-214通过抑制TOM1表达促进肝星状细胞活化和迁移

背景:肝星状细胞(HSCs)持续激活所致的细胞外基质过度沉积是肝纤维化发生、发展的关键环节。MicroRNAs(miRNAs)是一类重要的生物调节分子,为HSC的分化、增殖、凋亡、脂肪蓄积以及胶原生成所必须。既往对HSCmiRNAs表达谱的分析显示,miR-214在HSC活化过程中表达显著增高。目的:探讨miR-214在HSC中的生物学功能及其可能机制。方法:以real time PCR检测静息和完全活化状态大鼠HSC的miR-214 mRNA表达;应用miR-214封闭慢病毒载体感染HSC以敲除miR-214表达,以Transwell细胞迁移实验、蛋白质印迹法检测感染前后HSC迁移、活化能力的变化;应用荧光质粒报告系统对TargetScan(http://www.targetscan.org/)预测的miR-214靶基因进行验证。结果:miR-214 mRNA在HSC活化过程中表达显著增高(P<0.01)。miR-214敲除组HSC Transwell小室迁移细胞数较阴性对照组显著减少(P<0.001),HSC活化标记物α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白表达显著下调(P<0.01)。预测显示TOM1为miR-214的靶基因,并得到荧光质粒报告系统证实;miR-214敲除组HSC TOM1蛋白表达显著上调(P<0.05)。结论:miR-214参与促进HSC的活化和迁移,进而促进肝纤维化进程;miR-214在HSC中的生物学功能至少部分是通过抑制TOM1表达实现的。