附子多糖对H22和S180荷瘤小鼠的抗肿瘤作用研究

目的 :研究附子粗多糖和酸性多糖对S180、H2 2荷瘤小鼠的抑瘤作用并探讨其作用机制。方法 :采用水提醇沉法得到附子粗多糖和酸性多糖 ,通过腹腔注射和灌胃两种途径给药 ,以肿瘤生长抑制率和存活延长率为指标观察附子多糖对荷瘤小鼠 (S180和H2 2 )的抑瘤作用 ,并通过检测淋巴细胞转化能力、NK细胞活性、肿瘤细胞凋亡率、癌基因和细胞增殖指数 (PI)等指标探讨其抗肿瘤作用机制。结果 :附子粗多糖和酸性多糖对H2 2荷瘤小鼠肿瘤有显著的抑瘤作用 ,灌胃给药的抑瘤率分别为 4 5 30 %和 5 9 36 % (P <0 0 1) ,腹腔给药的抑瘤率分别为 4 9 6 5 %和 6 9 2 8% (P <0 0 1)。两种多糖对S180荷瘤小鼠肿瘤也有较显著的抑制作用。附子多糖对S180和H2 2荷瘤小鼠有延长存活时间的作用 (P <0 0 5或P <0 0 1)。两种多糖均明显增大了小鼠脾脏的重量 (P <0 0 1) ,提高了荷瘤小鼠的淋巴细胞转化能力 (P <0 0 5 )和NK细胞活性 (P <0 0 1) ,提高了抑癌基因p5 3和Fas的表达 (P <0 0 1) ,并且提高了肿瘤细胞凋亡率 (P <0 0 1)。结论 :附子粗多糖和酸性多糖有显著的抑瘤作用 ,其作用机制主要是增强机体的细胞免疫功能 ,诱导肿瘤细胞凋亡和调节癌基因的表达。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌H22细胞凋亡及Fas和FasL表达的影响

目的：观察扶正抑瘤颗粒含药血清诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡的作用和对细胞Fas、FasL表达的影响．方法：应用血清药理学方法，用不同剂量的含药血清与小氟肝癌细胞在体外共同孵育后，应用相差显微镜，流式细胞仪、电子显微镜对肿瘤细胞的生长和凋亡进行观察，用SABC法检测H22细胞Fas和FasL的表达结果：小鼠肝癌H22细胞经含药血清作用后，发生明显的形态学改变，相差显微镜下可见细胞体积缩小，折光性增强，染色质浓缩，核浆比例增大，密度增高，胞浆出现颗粒样物质。电镜下可见明显的凋亡形态变化，流式细胞仪可测到凋亡峰；SABC法显示，扶正抑瘤含药血清可上调小鼠H22细胞Fas的表达，而对FasL表达的影响不明显结论：扶正抑瘤颗粒能诱导H2：细胞发生凋亡，其机制可能与其上调H22细胞Fas的表达有关，     

生附片与不同品种贝母配伍的药效学比较研究

目的：观察生附片与不同产地贝母单用及配伍（1：1）应用药效学的差别，探讨中药“相反”药对配伍是否妨害治疗。方法：观察生附片与不同产地贝母配伍对大鼠体温，小鼠体温、胃排空、小肠推进及镇痛抗炎作用的影响。结果：1．生附片与浙贝母配伍连续给药12d后降低正常小鼠体温的作用较单用生附片显著减弱（P＜0．05）。2．生附片与浙贝或松贝配伍对抗安痛定致大鼠体温降低比单用生附片作用显著（P＜0．05或P＜0．01）；3．生附片和松贝配伍抑制胃排空作用较单用生附片显著（P＜0．05）；4．生附片与松贝母配伍抗胃溃疡作用较单用生附片组强；生附片与青贝配伍抗炎方面比单用生附片作用强。结论：生附片与不同品种贝母配伍在对动物体温、胃排空功能、抗胃溃疡、及抗炎方面药理作用的性质和强度依配伍的贝母品种不同而有不同程度改变，值得研究。     

荔枝核对小鼠S180，EAC细胞生长及调亡作用的实验研究

目的利用血清药理学的方法，观察荔枝核含药血清体外的抑制肿瘤细胞生长；并研究荔枝核对小鼠S180，EAC体内、外细胞生长及调亡作用。方法小鼠S180，EAC细胞混悬液用生理盐水按1：1进行稀释制成含瘤腹水混悬液，在给药前24h，每只小鼠腋窝皮下接种0.2ml。荔枝核水提液对小鼠S180，EAC抑瘤实验连续给药10d。测定肿瘤作用与细胞凋亡表达。结果荔枝核提取物30％含药血清高中剂量和20％含药血清高剂量对HepG2肿瘤细胞具有明显的抑瘤作用，Hochest染色肿瘤细胞出现凋亡形态；而流式细胞仪检测可见30％含药血清高中低剂量的促肿瘤凋亡率分别是63．3％，45．5％和23．8％，明显高于正常血清组。荔枝核水提物能够明显抑制S180，EAC肿瘤的生长（P〈0．05），荔枝核提取物对荷S180小鼠高剂量组的抑瘤率达到32．81％。对荷EAC实体瘤小鼠的肿瘤其抑瘤率达到30．62％；结论荔枝核具有抑制小鼠S180，EAC体内、外细胞生长的影响，促进肿瘤细胞的凋亡，从而表现抗肿瘤的作用。     

扶正抑瘤颗粒含药血清对小鼠肝癌细胞H22凋亡及细胞内Ca2+浓度的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)含药血清诱导小鼠肝癌细胞H22凋亡的作用及其对细胞内钙离子浓度的影响,探讨其抗肿瘤机制。方法:FYK含药血清孵育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,电子显微镜观察FYK含药血清诱导H22细胞凋亡的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,激光共聚焦显微镜测细胞内钙离子浓度的变化。结果:FYK含药血清能诱导小鼠肝癌H22细胞发生凋亡,同时使细胞内游离钙离子浓度升高,并与剂量和时间存在依赖性关系,细胞内钙离子浓度与相同时间点凋亡率呈正相关。结论:FYK含药血清可通过改变细胞内钙离子浓度诱导细胞发生凋亡,这可能是其抗肿瘤作用的机制之一。     

扶正抑瘤颗粒对小鼠肝癌细胞H22凋亡的影响

目的:研究中药复方扶正抑瘤颗粒药物血清对小鼠肝癌H22细胞凋亡的影响.方法:扶正抑瘤颗粒含药血清温育体外培养的小鼠肝癌H22细胞,利用光镜、电镜、流式细胞仪、原位末端标记(TUNEL)等方法观察其诱导小鼠肝癌H22细胞的凋亡作用.结果:扶正抑瘤颗粒含药血清可明显诱导小鼠肝癌H22细胞凋亡,随着培养时间的延长和用药剂量的增加,细胞凋亡率随之增加,与空白对照组比较P＜0.01或0.05.结论:扶正抑瘤颗粒药物血清可诱导肝癌H22细胞凋亡.     

四君子汤对小鼠膀胱癌抗肿瘤作用的实验研究

目的：探讨四君子汤对BTT739荷瘤小鼠的抗肿瘤作用。方法：BTT739肿瘤细胞接种T739小鼠，随机分组，①对照组：每日灌胃生理盐水0．2m1一次；②四君子汤组：每日一次四君子汤灌胃0．2ml；③MMC组每日一次腹腔给药1mg/kg；应用电镜，流式细胞分析技术检测细胞凋亡；测定四君子汤对荷瘤小鼠的抑瘤率，荷瘤生存时间，腹腔巨噬细胞活性。结果：四君子汤组小鼠肿瘤组织电镜下可见特征性凋亡细胞的出现，流式细胞仪检测出在G1期前出现凋亡峰；四君子汤组小鼠的抑瘤率为32％，荷瘤生存时间为33.3天，小鼠腹腔巨噬细胞吞噬率为32％。结论：在本实验条件下，四君子汤可以直接抑制小鼠膀胱肿瘤生长并可以诱导肿瘤细胞凋亡。研究证明四君子汤配伍三氧化二砷治疗小鼠膀胱癌具有良好的疗效．具有增效减毒的作用；并且四君子汤可以提高荷瘤小鼠的抗氧化能力^[2.3]，但其抗癌作用机制尚未阐明。     

蛇葡萄素钠体外协同卡铂抗小鼠肺癌Lewis细胞的作用

目的:研究蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞的体外抗肿瘤作用,初步探讨蛇葡萄素钠抑瘤作用机制。方法:应用MTT比色法测定蛇葡萄素钠单用及与卡铂联合用药对小鼠肺癌Lewis细胞增殖的抑制作用;使用流式细胞仪检测蛇葡萄素钠单用及与卡铂合用诱导细胞凋亡作用。结果:MTT实验结果表明,蛇葡萄素钠单用在12.5、25、50、100μg/ml浓度范围内对小鼠肺癌Lewis细胞的增殖具有浓度依赖性的抑制作用;6.25~50μg/ml的蛇葡萄素钠与卡铂3.12~25μg/ml联合用药对卡铂抑制Lewis细胞的增殖作用具有协同效应;流式细胞仪结果表明,蛇葡萄素钠25、50、100μg/ml与卡铂25μg/ml联合应用时,凋亡率显著增高。结论:蛇葡萄素钠单用在一定的浓度范围内对Lewis细胞增殖具有浓度依赖性抑制作用,蛇葡萄素钠与卡铂合用可以增强卡铂的活性,有协同抑制作用,蛇葡萄素钠可能是通过诱导凋亡而发挥其抗肿瘤作用。     

复合多糖抗肿瘤化疗后增效作用研究

目的：研究复合多糖与环磷酰胺联合抗肿瘤的增效作用及其机制。方法：用移植性肿瘤模型研究以正交实验配伍组成复合多糖的体内抗肿瘤活性；采用ELISA法测定IL-2、抑癌基因P27以分析复合多糖增效减毒的作用机制；采用透射电子显微镜观察药物作用下的肿瘤细胞形态变化。结果：复合多糖（香菇多糖100mg／kg、姬松茸多糖200mg／kg、茯苓多糖50mg／kg）在体内有一定的抑制肿瘤生长的作用，与环磷酰胺联合抗肿瘤具有增效作用，可增加IL-2的水平，可诱导肿瘤细胞凋亡，增强抑癌基因P27的表达。结论：复合多糖与环磷酰胺联合抗肿瘤具有增效作用。     

荔枝核对小鼠S_(180),EAC细胞生长及凋亡作用的实验研究

目的利用血清药理学的方法,观察荔枝核含药血清体外的抑制肿瘤细胞生长;并研究荔枝核对小鼠S180,EAC体内、外细胞生长及凋亡作用。方法小鼠S180,EAC细胞混悬液用生理盐水按1:1进行稀释制成含瘤腹水混悬液,在给药前24 h,每只小鼠腋窝皮下接种0.2 ml。荔枝核水提液对小鼠S180,EAC抑瘤实验连续给药10 d。测定肿瘤作用与细胞凋亡表达。结果荔枝核提取物30%含药血清高中剂量和20%含药血清高剂量对HepG2肿瘤细胞具有明显的抑瘤作用,Hochest染色肿瘤细胞出现凋亡形态;而流式细胞仪检测可见30%含药血清高中低剂量的促肿瘤凋亡率分别是63.3%,45.5%和23.8%,明显高于正常血清组。荔枝核水提物能够明显抑制S180,EAC肿瘤的生长(P<0.05),荔枝核提取物对荷S180小鼠高剂量组的抑瘤率达到32.81%。对荷EAC实体瘤小鼠的肿瘤其抑瘤率达到30.62%;结论荔枝核具有抑制小鼠S180,EAC体内、外细胞生长的影响,促进肿瘤细胞的凋亡,从而表现抗肿瘤的作用。     

蒙古黄芪和膜荚黄芪水溶性蛋白表达

目的:蒙古黄芪和膜荚黄芪都为药用黄芪,二者亲缘关系近,成分相似,药用价值尚未区分。该研究旨在建立蒙古黄芪和膜荚黄芪的水溶性蛋白表达谱,了解两种黄芪之间存在的差别。方法:样品采用水超声提取和丙酮沉淀的方法得到黄芪水溶性蛋白成分,质谱级胰酶酶解后的肽段经nano ESI-LC-MS/MS分析,采用Proteome Discoverer 1. 4软件比对豆科蛋白数据库鉴定蛋白,再使用非标记定量软件SIEVE分析蒙古黄芪与膜荚黄芪水溶性蛋白质表达的差异。最后运用生物信息学方法分析2种黄芪共有蛋白的分类、分子功能、参与的生物过程和信号通路。结果:蒙古黄芪鉴定特异性蛋白有920个,膜荚黄芪鉴定的特异性蛋白有717个,2种黄芪中共同表达的蛋白有472个,其中二者的差异表达蛋白有21个,如PR-10蛋白,NDK-1蛋白,谷蛋白A2,磷脂酶D等蛋白在两种黄芪中差异表达。蒙古黄芪高表达蛋白14个,膜荚黄芪高表达蛋白7个。结论:蒙古黄芪和膜荚黄芪的水溶性蛋白表达谱存在显著差异,特异性蛋白、差异表达蛋白和共同表达的蛋白可为今后两种黄芪的鉴别、药理作用机制的研究和寻找作用靶点提供参考。     

肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量测定

目的:建立肉豆蔻、麸煨肉豆蔻中总木脂素的含量方法.方法:采用紫外分光光度法,以去氢二异丁香酚为对照品,测定波长275 nm.结果:去氢二异丁香酚质量浓度在1.5～9.0 mg·L-1与吸光度呈良好线性关系,r=0.999 8,平均回收率97.6％(n=6),RSD 1.2％.结论:建立的方法简便、快速、重复性好.     

高效液相色谱法测定车前中桃叶珊瑚甙的含量

分别测定了不同品种车前中桃叶珊瑚甙的含量。流动相为甲醇-水(17∶83)。方法重现性和回收率较好,为车前研究提供了有效的方法。     

膜苞鸢尾和蓝花喜盐鸢尾的化学成分研究

目的 分别对鸢尾属2种植物膜苞鸢尾Iris scariosa和蓝花喜盐鸢尾Iris halophila var.sogdiana的根及根状茎的化学成分进行研究.方法 利用正、反相硅胶柱色谱、凝胶柱色谱、大孔树脂柱色谱、反相制备色谱等技术进行分离纯化,根据波谱学数据(MS、1H-NMR、13C-NMR、2D-NMR)进行化合物的结构鉴定.结果 从膜苞鸢尾的根及根状茎中分离得到6个化合物,分别鉴定为野鸢尾苷元(1)、尼鸢尾黄素-4'-[O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1′′′→6")-β-D-吡喃葡萄糖苷](2)、5,7,2'-三羟基-6-甲氧基二氢黄酮(3)、尼鸢尾黄素(4)、德鸢尾苷元(5)、鸢尾酚酮(6).从蓝花喜盐鸢尾的根及根状茎中分离鉴定了7个化合物:5,7,2'-三羟基-6-甲氧基二氢黄酮(3)、5,2 '-二羟基-6,7-二甲氧基异黄酮(鸢尾灵A,7)、鸢尾甲黄素B(8)、鸢尾甲黄素B4'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、鸢尾甲黄素B4'-[O-β-D-吡喃葡萄糖基-(1′′′→6")-β-D-吡喃葡萄糖苷](10)、山姜酮(11)和β-胡萝卜苷(12).结论 化合物9为新化合物,命名为喜盐鸢尾苷.化合物1～6是首次从膜苞鸢尾中分离得到,化合物3、7～12是首次从蓝花喜盐鸢尾中分离得到.     

厚朴与凹叶厚朴在湖北地区的生态适宜性研究＊

通过实地调查和文献研究，了解厚朴与凹叶厚朴在湖北地区的种植状况；采集45个野生分布点的海拔、经纬度数据，应用地理信息系统（GIS）提取各样点生境适宜度值，分析厚朴与凹叶厚朴在湖北地区的生长适宜性，为确定湖北区域内厚朴的适宜种植地提供科学依据。本研究结果表明，湖北西南部位于武陵山区的恩施地区及其周边适宜厚朴生长，适宜度值0.4~0.9；湖北东部位于大别山区的黄冈地区适宜凹叶厚朴生长，适宜度值0.8以上；湖北西北部位于武当山区的十堰地区，厚朴与凹叶厚朴均不适宜生长。     

长药隔重楼化学成分研究

目的研究长药隔重楼Paris polyphylla var.pseudothibetica根茎中的化学成分,为阐明其有效成分及扩大重楼属植物的药用资源提供科学依据。方法利用正相硅胶柱色谱、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20、正反相制备色谱等手段进行分离纯化,并通过1H-NMR、13C-NMR、ESI-MS等波谱技术进行结构鉴定。结果从长药隔重楼中分离得到了12个化合物,分别鉴定为:薯蓣皂苷元(1)、薯蓣皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(2)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、偏诺皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)]-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、β-谷甾醇(6)、豆甾醇(7)、胡萝卜苷(8)、豆甾醇-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(9)、山柰酚(10)、β-蜕皮激素(11)、蔗糖(12)。结论化合物1～9为首次从该植物中分离得到。     

中国沙棘叶黄酮类成分与生态因子相关性及其生态适宜性研究

为了解决野生藏药资源日益濒危问题,推动藏药野生资源保护与适宜区的发展和提供人工栽培种植新方法,该文采用HPLC对不同产地中国沙棘叶中槲皮素、山柰素、异鼠李素进行含量测定,应用偏最小二乘回归法(PLSR),分析不同产地中国沙棘叶中黄酮类化学成分与生态因子间的相关性。该文基于Maxent模型结合运用ArcGIS软件,对中国沙棘进行适宜区区划研究。分析得出不同产地间中国沙棘叶中槲皮素、山柰素、异鼠李素含量差异明显,且影响槲皮素积累的主导因子为海拔高度、1月份均降水量和8月份均降水量,影响山柰素含量积累的主导因子为海拔高度、最冷季度降水量、12月份均降水量和3月份均气温,影响异鼠李素含量积累的主导因子为8月份均降水量、1月份均降水量、最冷季度降水量和海拔高度;实验结果表明中国沙棘在我国地区分布的适宜指数为0~0.708,适宜区面积59.05万km~2,占全国总面积的6.13%,较适宜区面积达55.25万km~2,占全国总面积的5.73%。对中国沙棘叶黄酮类成分与生态因子的相关性及中国沙棘生态适宜性研究,该法操作简单可行、结果可靠,为藏药资源实现可持续开发利用提供了一种新思路。     

滇重楼丛枝菌根的研究

目的:研究滇重楼根部丛枝菌根真菌(AMF)侵染情况及根际土中AMF孢子的种类与数量.方法:采用Phillips和Hayman染色法挑选滇重楼丛枝菌根.同时,采用Gendemann的湿筛倾析法获得AMF孢子,进行形态学鉴定.结果:丛枝菌根真菌能侵染滇重楼根系并形成典型的丛枝菌根(AM),侵染率在35.3%～98.6%,且侵染强度较强.从滇重楼根际采集的10个土样中共分离出24种AMF,Acaulospora属11种,Glomus属7种,Gigaspora属3种,Scutellospora属3种,分别是附柄无梗囊霉、双网无梗囊霉、凹坑无梗囊霉、孔窝无梗囊霉、浅窝无梗囊霉、光壁无梗囊霉、柯氏无梗囊霉、多果无梗囊霉、波兰无梗囊霉、瑞氏无梗囊霉、细凹无梗囊霉、白色球囊霉、双型球囊霉、沙荒球囊霉、草莓球囊霉、纯黄球囊霉、微丛球囊霉、凹坑球囊霉、微白巨孢囊霉、珠状巨孢囊霉、分支巨孢囊霉、美丽盾巨孢囊霉、透明盾巨孢囊霉、吉尔莫盾巨孢囊霉.其中,双网无梗囊霉是滇重楼的优势种.结论:AMF是滇重楼丰产栽培中的一种潜在应用价值的生物资源.     

蒙古黄芪与膜荚黄芪种子形态特征及其鉴别方法的研究

目的为黄芪种子鉴定提供方法,为按中药材GAP原则制定相关标准操作过程(SOP)提供基础研究资料。方法采用肉眼直接观察、光学显微镜观察和电子显微镜进行扫描观察,比较蒙古黄芪和膜荚黄芪两种药用黄芪的种子形态特征和微观结构;通过萌发试验,比较二者的差异。结果通过肉眼和光学显微镜观察,两种黄芪种子的形态差异不明显,在电子显微镜下观察,两种黄芪种子的萌发孔形状、种脐和种皮的微观结构有明显差异;蒙古黄芪较膜荚黄芪种子硬实率高,萌发不整齐,萌发高峰滞后。结论在电子显微镜下能够对两种黄芪种子准确地做出鉴定,种脐、萌发孔、种皮的微观结构可作为鉴别两种黄芪种子的指标;种子硬实率和萌发动态规律可用于两种黄芪种子的辅助鉴别。     

七叶一枝花和滇重楼提取物的制备、表征及其体外溶血作用分析

目的:比较七叶一枝花和滇重楼提取物体外溶血作用强弱,探讨不同结构类型重楼皂苷的溶血作用特点。方法:采用75%乙醇对七叶一枝花和滇重楼根茎进行提取,采用大孔吸附树脂对各类物质进行富集,采用快速制备色谱技术对目标组分群进行定向制备,基于对照品对照和在线紫外吸收光谱对总取物、部位和组分进行化学信息表征,采用分光光度法测定各样品的溶血率。结果:根据质量浓度-溶血率曲线计算七叶一枝花和滇重楼总提物的50%溶血浓度分别为34.97,46.52 mg·L~(-1)。在2.5~10 mg·L~(-1)时,七叶一枝花部位中仅有70%乙醇洗脱部位(PPC-D)显示了较强溶血作用,滇重楼部位中70%乙醇和95%乙醇洗脱部位(PPY-D和PPY-E)均显示溶血作用。5.0,10 mg·L~(-1)时PPC-D的溶血率分别为78.00%和95.68%,PPY-D(PPY-E)的溶血率分别为31.86%和63.29%(15.82%和55.25%)。在2.5~5.0 mg·L~(-1)时,七叶一枝花的组分呋甾皂苷和薯蓣皂苷未显示溶血作用,偏诺皂苷组分在质量浓度为2.5,5.0 mg·L~(-1)的溶血率分别为5.89%和90.33%;滇重楼的呋甾皂苷组分同样未显示溶血作用,偏诺皂苷(薯蓣皂苷)组分在质量浓度为2.5,5.0 mg·L~(-1)的溶血率分别为0.51%和57.75%(4.29%和49.39%)。结论:七叶一枝花和滇重楼均具有溶血作用,其中七叶一枝花强于滇重楼;七叶一枝花溶血成分群主要为偏诺皂苷类,滇重楼溶血成分群为偏诺皂苷和薯蓣皂苷;两者呋甾皂苷均无溶血作用;总提物溶血作用强弱主要由其中所含偏诺皂苷和薯蓣皂苷类成分的绝对含量和相对比例来决定。