骨髓基质干细胞成骨分化影响因素研究进展

骨不连、骨组织缺损是外科临床常见的疾病之一.但目前临床主要应用的自体骨移植、异体骨移植及人工代替品移植因各自缺点限制了它们的应用.然而以骨髓基质干细胞(MSCs)为种子细胞的骨组织工程学异军突起,为骨缺损、骨不连的治疗开辟了一条崭新的道路.来源于骨髓的BMSCs在体外培养,扩增并诱导后有很强的成骨能力,并且容易分离,来源广泛应用安全方便,所以其作为骨组织工程首选的种子细胞日益受到重视.     

阿伦磷酸钠对大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响

目的在体外培养条件下观察阿伦磷酸钠对大鼠骨髓基质干细胞成骨分化的影响。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测阿伦磷酸钠对骨髓基质干细胞活性的影响;茜素红染色法来确定骨髓基质干细胞的成骨分化程度;碱性磷酸酶（ALP）活性检测;分光光度法来测定钙峰值,和免疫荧光流式细胞术测定CD44表达。结果0．1μg／ml、1μg／ml、10μg／ml阿伦磷酸钠对大鼠骨髓基质干细胞的细胞毒性不明显,都可以促进其增值和成骨分化,浓度为1μg／ml时作用最大,浓度为10μg／ml时作用明显降低。结论适当浓度的阿伦磷酸钠可以促进大鼠骨髓基质干细胞的增值和成骨分化。     

VEGF对兔骨髓基质干细胞成骨诱导及成骨细胞分化与增殖影响的体外研究

目的探讨体外条件下成骨诱导剂和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor,VEGF)的联合应用对兔骨髓基质干细胞(Bone Marrow Stromal Cells,BMSCs)成骨分化过程中细胞增殖和分化的影响,为骨组织工程研究提供实验基础。方法取2月龄新西兰大耳白兔,麻醉后抽取股骨骨髓进行BMSCs原代细胞培养,取生长良好的第三代BMSCs进行分组培养。空白组:完全培养基培养;对照组:完全培养基中加入成骨诱导剂;实验组:完全培养基中加入成骨诱导剂及VEGF(10ng/ml)。MTT法检测诱导BMSCs成骨分化过程中细胞生长与增殖情况并绘制生长曲线;倒置相差显微镜、光学显微镜及扫描电镜观察诱导BMSCs成骨分化过程细胞的形态特征;茜素红(Alizarin Red S,ARS)染色鉴定钙结节;碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)染色、ALP活性及RT-PCR检测I型胶原(Collagen typeⅠ,colⅠ)mRNA表达;免疫组化染色检测诱导后细胞中VEGF蛋白表达情况。结果 1诱导BMSCs向成骨细胞分化后细胞呈圆形或多边型,短柱状或立方形,细胞表面有短的突起与相邻细胞连接。2茜素红染色光学显微镜下可见实验组和对照组均有散在的红色团块即钙结节。3二组中ALP染色均可见细胞浆内有黑色的碱性磷酸酶颗粒,但实验组ALP染色阳性细胞数多于对照组(P<0.05)。4诱导培养的成骨细胞ALP活性测定实验组和对照组ALP活性早期较低,以后逐渐增高,第四天起,实验组明显高于对照组(P<0.05)。5MTT法检测细胞增殖状态,实验组细胞增殖速度高于对照组,6~8d细胞增殖速度加快,二组比较差异有统计学意义(P<0.05)。6RT-PCR检测成骨细胞colⅠmRNA表达,诱导后实验组和对照组均可见colⅠmRNA表达,实验组colⅠmRNA的表达强度高于对照组。7免疫组化染色显示BMSCs的VEGF蛋白呈阴性表达,而诱导分化后的成骨细胞实验组与对照组均可见有VEGF蛋白表达且实验组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论 1BMSCs在成骨诱导剂作用下可向成骨细胞诱导,成为骨组织工程中理想的种子细胞。2 VEGF可促进成骨细胞的增殖和分化,当与成骨细胞诱导剂联合应用时,能够提高成骨细胞的增殖能力、增强成骨细胞的ALP活性,二者的协同作用共同促进了BMSCs向成骨细胞的增殖和分化,将有望提高骨缺损修复的治疗效果。     

辛伐他汀对大鼠骨髓基质细胞成骨分化的影响

目的:研究辛伐他汀体内给药后对大鼠骨髓基质细胞在体外培养过程中成骨分化和增殖的影响,探讨其刺激成骨的作用机制. 方法:30只SD雌性大鼠,随机分为3组,每组10只. G1组(C)为对照组;G2组(SIM-10)给予辛伐他汀10 mg/(kg·d);G3组(SIM-20)给予辛伐他汀20 mg/(kg·d). 连续给药28 d后,取大鼠的骨髓细胞体外培养,诱导14 d后用RT-PCR和Western blot分别检测cbfa1 mRNA和蛋白表达的变化;收集上清液,检测细胞碱性磷酸酶;应用cell counting kit(CCK-8) 测定细胞增殖情况. 结果:辛伐他汀体内干扰28 d后,再经过骨髓细胞体外培养诱导14 d后,cbfa1因子的mRNA及蛋白表达水平均增高,呈剂量依赖关系. 上清液碱性磷酸酶表达增高,呈剂量依赖关系. 实验组与对照组比较,G2组(10 mg)组促进细胞增殖,而G3组(20 mg组)未见显著性差异. 结论: 辛伐他汀可促进骨髓基质细胞中cbfa1 mRNA和蛋白的表达,碱性磷酸酶活性增高,辛伐他汀刺激成骨的作用机制可能与此有关.     

RNA干扰Axin2对大鼠骨髓基质干细胞的成骨分化表达的影响

目的 通过对大鼠Axin2基因的RNA干扰(RNAi),探讨Axin2对大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞分化过程的影响.方法 取6周龄雌性SD大鼠双侧股、胫骨骨髓细胞,采用全骨髓培养法进行原代和传代培养.细胞传2代后实验组进行Axin2 mRNA干扰质粒转染,对照组进行阴性干扰质粒转染.转染48 h后换用成骨诱导分化培养基.诱导分化28 d后用 von Kossa方法进行细胞外基质矿化染色.采用适时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)技术检测诱导分化后第7、14天β-catenin、骨钙素(OCN)、frizzled-2、Lef-1、Wnt5a mRNA的表达水平.结果 对照组大鼠BMSCs经体外诱导后分化为具备矿化细胞外基质能力的成熟成骨细胞,而实验组BMSCs成骨分化不全;RQ-PCR检测显示,诱导分化后第7天实验组β-catenin、frizzled-2 mRNA表达水平显著低于对照组,而OCN、Lef-1、Wnt5a mRNA表达水平显著高于对照组;诱导分化后第14天实验组frizzled-2、Lef-1和Wnt5a mRNA表达水平均显著高于对照组(P<0.05).结论 对大鼠BMSCs Axin2进行RNAi后,BMSCs向成骨细胞分化晚期细胞外基质矿化能力减弱.     

利福平对兔脂肪干细胞增殖、成骨及黏附支架的影响

目的探讨利福平（rifampicin,RFP）对兔脂肪干细胞（rabbitadipose-derivedstemcells,rADSCs）增殖、成骨及黏附支架的影响,为后期RFP缓释系统与rADSCs的复合奠定实验基础。方法分离培养rADSCs,检测细胞周期及表面抗原CD44,成骨、成脂诱导后分别行茜素红及油红O染色。用利福平生长液干预rADSCs,按浓度分为0、10、20及30μg／ml4组,分别绘制细胞生长曲线、检测细胞凋亡率及碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,ALP）含量。制备同种异体脱钙骨支架,并复合各组rADSCs,计算细胞黏附率,扫描电子显微镜观察复合情况。结果rADSCs呈长梭形生长,G0／G1期占78．3％±4．2％,表面抗原CD44阳性表达。成骨诱导后茜素红染色及成脂诱导后油红O染色均为阳性。生长曲线示30μg／ml组第4-11天增殖能力较其他3组弱（P〈0．01）,细胞凋亡示30μg／ml组凋亡率高于其他3组（P〈0．01）,ALP检测示成骨诱导后第14天30μg／ml组ALP含量较其他3组少（P〈0．01）,细胞黏附率示30μg／ml组较其他3组低（P〈0．01）。扫描电镜观察30μg／ml组黏附的细胞数量少,形态松散。结论不影响rADSCs增殖、成骨及黏附支架的RFP临界浓度约为20μg／ml。     

间断流体力学对骨髓基质来源的成骨细胞分化及功能的影响

目的 观察间断流体力学刺激对骨髓基质来源的成骨细胞分化及功能的影响。方法 多孔钙磷陶瓷载体中种植骨髓基质来源的成骨细胞,采用间断旋转细胞培养方法产生流体力学刺激。体外共同培养4、7和14d。利用定量逆转录聚合酶链反应（RT－PCR）技术和生物化学方法检测成骨细胞显型蛋白（碱性磷酸酶,I型胶原,骨钙素,骨桥素,骨连接素,骨涎蛋白）的表达情况。静止细胞培养作为对照。结果 旋转细胞培养条件下,碱性磷酸酶活性和I型胶原mRNA表达水平明显增加,7d达到高峰。其他显型蛋白mRNA在4d时开始表达,7d达到高峰,14d开始下调。静止细胞培养条件下,碱性磷酸酶活性和I型胶原mRNA表达逐渐增加,14d达到最高。其他显型蛋白mRNA在7d时开始表达,14d达到最高。结论 间断旋转细胞培养方法产生流体力学刺激促进体外培养的骨髓基质来源的成骨细胞分化和功能发挥。     

巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化影响的实验研究

为探讨巴戟天对骨髓基质细胞向成骨细胞分化的影响,采用含药血清的方法体外培养骨髓基质细胞,分A组(巴戟天水提物组)、B组(巴戟天醇提物组)、C组(对照组)、D组(经典成骨诱导组)、E组(巴戟天水提物+经典成骨诱导组)、F组(巴戟天醇提物+经典成骨诱导组),观察各组碱性磷酸酶染色、茜素红染色、碱性磷酸酶比活性及骨钙素含量,结果显示碱性磷酸酶染色和茜素红染色反应强弱的顺序为F组＞E组＞D组＞B组＞A组,C组为阴性;碱性磷酸酶比活性和骨钙素(BGP)含量测定结果为:A、B、D、E、F组在同一时间点均高于C组(P<0.05),E组、F组在同一时间点均高于D组(P<0.05).说明巴戟天水提物及醇提物均能促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,且巴戟天醇提物的作用强于水提物.     

胎鼠皮肤间充质干细胞的体外培养及成骨分化研究

目的：分离、纯化胎鼠皮肤间充质干细胞(MSCs)，在体外培养、扩增并促其成骨分化，为骨组织工程学研究与骨质疏松症的细胞学治疗提供一种可能。方法：体外培养胎鼠皮肤MSCs，并在培养液中加入成骨诱导剂诱导培养，观察其成骨分化潜能。 结果：胎鼠皮肤MSCs传代培养第15代仍具有增殖能力,说明该细胞为干细胞源性;贴壁细胞在成骨诱导剂作用下,碱性磷酸酶(ALP)水平升高，ALP钙钴染色呈阳性反应，钙结节茜素红染色反应阳性。 结论：胎鼠皮肤MSCs具有很强的自我增殖能力，成骨诱导剂可促其向成骨分化。     

罗格列酮对小鼠胚胎成骨细胞增殖和成骨分化的影响

目的 体外观察罗格列酮对小鼠胚胎成骨细胞增殖和成骨分化的影响.方法 于中国科学院上海细胞库购买小鼠胚胎成骨细胞并传代,使用不同浓度下的罗格列酮（1、5 μmol/L）处理细胞,对照组用等量二甲亚砜（DMSO）;观察不同浓度罗格列酮下小鼠胚胎成骨细胞的细胞增殖状况;使用不同浓度罗格列酮的细胞培养基,培养7、14 d,行碱性磷酸酶染色;细胞培养7 d,Real-time PCR检测转录因子Runx2、成骨标志物碱性磷酸酶、骨钙素基因的表达.结果 实验组和对照组相比,小鼠胚胎成骨细胞的细胞增殖能力减弱.随着罗格列酮浓度的升高,碱性磷酸酶染色颜色逐渐变浅.聚合酶链式反应结果显示Runx2 mRNA表达分别下降了（54.7＆#177;8.2）%和（52.3＆#177;7.2）%,碱性磷酸酶 mRNA表达分别下降了（18.7＆#177;5.1）%和（37.8＆#177;8.5）% ,骨钙素 mRNA表达分别下降了（43.4＆#177;5.6）%和（60.4＆#177;4.3）%;差异均有统计学意义（P＆lt;0.05）.结论 罗格列酮能抑制小鼠胚胎成骨细胞的细胞增殖和成骨细胞分化,这可能就是2型糖尿病患者服用噻唑烷二酮类药物后并发骨质疏松的原因之一.     

体外定向诱导大鼠骨髓基质干细胞向心肌细胞分化的实验研究

目的：研究骨髓基质干细胞体外向心肌细胞分化的能力。方法：通过密度梯度离心和贴壁培养法分离大鼠骨髓基质干细胞,首先将第3代细胞用5-氮胞苷诱导24h,传至4代时再次诱导24h,当培养细胞汇合并形成肌管时传代;出现跳动细胞时用免疫细胞化学方法检测心肌特异性肌钙蛋白T(cTnT)的表达。结果：原代细胞首先形成细胞集落,10d后集落间接近汇合,传代细胞体积变大,5—7d传代1次,两次诱导后细胞呈梭形,约15d后细胞汇合并出现肌管,再传代时,细胞出现跳动。免疫细胞化学显示细胞表达cTnT。结论：骨髓基质干细胞在体外能够诱导分化为心肌细胞。     

Effect of IKVAV peptide nanofiber on proliferation,adhesion and differentiation into neurocytes of bone marrow stromal cells

This study examined the effect of IKVAV peptide nanofiber on proliferation, adhesion and differentiation into neurocytes of bone marrow stromal cells （BMSCs）. IKVAV Peptide-amphiphile was synthesized and purified. Then, hydrogen chloride was added to the diluted aqueous solutions of PA to induce spontaneous formation of nanofiber in vitro. The resultant samples was observed tmder transmission electron microscope. BMSCs were cultured with IKVAV peptide nanofiber. The effect of IKVAV nanofiber on the proliferation, adhesion and induction differentiation of BMSCs was observed by inverted microscopy, calcein-AM/PI staining, cell counting and immunofluorescence staining. The results demonstrated that IKVAV peptide-amphiphile could self-assemble to form nanofiber gel. BMSCs cultured in combination with IKVAV peptide nanofiber gel grew well and the percentage of live cells was over 90%. IKVAV peptide nanofiber gel exerted no influence on the proliferation of BMSCs and could promote the adhesion of BMSCs and raise the ra- tio of neurons when BMSCs were induced to differentiate into neurocytes. It is concluded that BMSCs could proliferate and adhere well and yield more neurons during when induced to differente into neurocytes on IKVAV peptide nanofiber gel.     

地塞米松对兔骨髓间充质干细胞存活增殖成骨的影响

目的:观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)的持续生存能力及地塞米松对其存活、增殖、成骨分化能力的影响。方法:提取兔BMSCs,予不同浓度(0、10-9、10-8、10-7、和10-6mol/L)地塞米松,分别于1、3、5、7 d时观察地塞米松对BMSCs增殖的影响,作用1～4周后检测碱性磷酸酶水平;分别饥饿0～7 d,复苏1、3和7 d后,观察BMSCs的持续生存能力。结果:培养1 d地塞米松10-6mol/L组测得的OD值结果最高,而对照组结果最低,培养3、5、7 d时,地塞米松10-9mol/L组测得的OD值最高;同时,在2～4周10-9mol/L组增加碱性磷酸酶活性最明显;复苏1和3 d,对照组与饥饿1～7 d之间差异有统计学意义(均P<0.05),复苏7 d,各组两两之间差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:BMSCs具有较强的持续生存能力,地塞米松对BMSCs有增加存活、促进增殖、成骨分化的作用。     

BICC1对骨髓基质细胞定向分化的调控作用研究

目的:探讨BICC1在骨髓基质细胞向成骨细胞及脂肪细胞分化过程中的作用。方法:构建Bicc1过表达质粒Bicc1-pcDNA3.1,以pcDNA3.1为对照,分别转染小鼠骨髓基质细胞ST2。对两组细胞进行成脂和成骨诱导,在成骨诱导14 d时碱性磷酸酶染色检测成骨分化情况,在成脂诱导5 d时利用油红O染色检测脂滴形成情况;采用qRT-PCR及Western blot技术检测细胞Bicc1过表达对成骨及成脂相关因子的影响。结果:酶切及测序结果显示Bicc1过表达质粒构建成功,将其转染到ST2细胞后,Bicc1 mRNA表达水平较对照组升高15.23倍（P＜0.05）。成骨诱导条件下,Bicc1过表达组ST2细胞碱性磷酸酶染色增强,成骨相关因子Osterix、碱性磷酸酶、Osteopontin、Runt相关转录因子2（Runx2）和骨钙素的mRNA和/或蛋白表达水平显著上升（均P＜0.05）。成脂诱导条件下, Bicc1过表达组ST2细胞中脂滴形成减少,油红OD520较对照组明显降低（P＜0.01）,成脂相关因子过氧化物酶体增殖物活化受体γ（PPARγ）、CCAAT增强子结合蛋白α（C/EBPα）、脂肪酸结合蛋白（FABP4/aP2）和adipsin的mRNA及蛋白表达水平显著下降（均P＜0.05）。结论:BICC1可促进骨髓基质细胞向成骨细胞分化,抑制其向脂肪细胞分化。     

Effect of rhBMP-2 and Osteogenic Revulsants on Proliferation and Differentiation of Bone Marrow Stromal Cells in Rats

The effects of recombinant human bone morphogenetic protein-2 （rhBMP-2） and osteogenic revulsants alone or in combination at different time points and in different dosages on proliferation and osteogenesis of bone marrow stromal cells （BMSCs） in SD rats were investigated. Rat BMSCs were cultured in vitro and induced by rhBMP-2 in different dosages （10, 50, 100 and 200μg/L） alone or in combination with osteogenic revulsants. MTT colorimetric assay was used to evaluate The proliferation, activity of alkaline phosphoric （ALP） and osteocalcin were measured at 3rd, 6th, 9th, 12th day respectively. The results showed that rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the differentiation of BMSCs towards osteoblast phenotype. The proliferation of BMSCs could be enhanced by rhBMP-2 in a dose-dependent manner. The expression of osteoblast phenotype was significantly higher by using both of them than by using them alone, which was verified by the activity of ALP and osteocalcin. It was suggested that the combined use of rhBMP-2 and osteogenic revulsants could promote the proliferation and simultaneously induce and maintain the expression of osteoblast phenotype of BMSCs in rats.     

柚皮苷对兔骨髓基质细胞成骨分化、增殖和迁移及对OPG/RANKL信号通路的调节作用

目的 探讨柚皮苷对兔骨髓基质细胞成骨分化、增殖和迁移及对OPG/RANKL信号的调节作用.方法 选用2～3月龄新西兰大白兔提取兔骨髓基质细胞,用不同浓度(0～1000μM)的柚皮苷处理细胞48 h,CCK-8试剂盒测量细胞活力.后续采用柚皮苷(0、10、25、50μM)处理细胞48 h,碱性磷酸酶(A L P)活性测量...     

辛伐他汀纳米脂质体对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响

目的:通过对骨形成蛋白-2(bone morphogenetic protein 2,BMP-2)和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达进行测定,研究纳米脂质体剂型对辛伐他汀(simvastatin,SMV)在骨髓间充质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSC)形成骨过程中的促进作用.方法:采用全骨髓贴壁培养法体外培养小鼠原代BMSC.以SMV原料药处理组作为对照组,分别设SMV药物浓度1μmol/L和2μmol/L为SMV低剂量组(SMV low dosage group,S1)和SMV高剂量组(SMV high dosage group,S2);将辛伐他汀纳米脂质体(simvastatin nano-liposomes,SMV-liposome)处理组作为实验组,根据SMV药物包载浓度1μmol/L和2μmol/L分别设为SMV-liposome低剂量组(SMV-liposome low dosage group,SL1)和SMV-liposome高剂量组(SMV-liposome high dosage group,SL2);此外,实验中所有涉及到不做任何处理的组,都作为空白组(blank).将SMV和SMV-liposome分别与BMSC共孵育48 h后,用碱性磷酸酶比色法测定其ALP比活性,用碱性磷酸酯酶显色试剂盒(BCIP/NBT alkaline phosphatase color development kit,BCIP/NBT Kit)检测其ALP蛋白表达量,用Western Blot检测其BMP-2蛋白的表达量.结果:细胞毒性实验结果显示,对照组与实验组在与BMSC共孵育48 h后,各组细胞生存率均高于84％,且组间差异无统计学差意义(P＞0.05).在给药浓度相同时,实验组ALP比活性显著高于对照组,其中S1组和SL1组ALP比活性分别为0.27±1.11和0.21±2.15(P ＜0.001),S2组和SL2组ALP比活性分别为0.63±1.64和0.72 ±2.88(P ＜0.05).ALP BCIP/NBT染色结果表明,与对照组相比,实验组ALP染色更深,且组内呈现剂量依赖性.实验组BMP-2蛋白表达量显著高于对照组.同时,ALP比活性、ALP BCIP/NBT染色及BMP-2蛋白表达结果表明,对照组和实验组内均呈现剂量依赖性,即高剂量组结果优于低剂量组.结论:纳米脂质体剂型能显著提高SMV促进BMSC的成骨分化作用.     

急性白血病骨髓基质细胞对HL-60细胞增殖、分化的影响

目的 为探讨急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的影响。方法 骨髓基质与白血病细胞共培养，采用MTT检测基质对白血病细胞的粘附，流式细胞仪检测粘附的HL-60细胞周期，非特异性酯酶及过氧化物酶染色观察白血病细胞分化及绘制白血病细胞生长曲线。结果 白血病骨髓基质对HL-60细胞的粘附率及粘附的白血病细胞处于G0／G1期比例均明显高于正常骨髓基质；正常骨髓基质对HL-60细胞的生长抑制作用及诱导分化作用均明显强于白血病基质。结论 急性白血病骨髓基质对HL-60细胞的增殖、分化作用均存在异常。     

Effects of endothelin-1 on differentiation of cardiac myocyte induced from rabbit bone marrow stromal cells

Background Cardiomyocyte transplantation for the therapy of myocardial ischaemia is being paid close attention. However, how the microenvironment controls the differentiation of transplanted bone marrow stromal cells （BMSCs） is unknown. Endothelin-1 （ET-1）, a cytokine, increases during myocardial infarction, but it is not known whether ET-1 is responsible for the fate of transplanted BMSCs. In the present study, we investigated the effects of ET-1 on differentiation and maturation of induced rabbit BMSCs, in vitro, to elucidate the cellular biological mechanisms.     

脉冲电磁场对脱钙骨基质诱导人骨髓干细胞成骨分化的影响

目的观察脉冲电磁场(pulsed electromagnetic fields,PEMF)对脱钙骨基质(demineralized bone matrix,DBM)诱导人骨髓间充质干细胞(human mesenchymal stem cells,hMSCs)成骨分化的影响,探讨可能的发生机制。方法提取1例健康14周岁男性骨髓间充质干细胞,培养至第3代,以1×104/孔接种至8块24孔板,以1×105/孔接种至2块6孔板,各分成4组:细胞对照组(C组)、细胞+材料组(CD组)、细胞+脉冲电磁场组(CP组)和细胞+材料+脉冲电磁场组(CDP组)。CD组和CDP组加入一块5mm×5mm×3mm大小的DBM,CP组和CDP组给予PEMF(频率15Hz,场强5Gs)照射;各组分别于种植后第1、7、14、21天进行碱性磷酸酶(ALP)活性、骨钙素(OC)浓度等指标检测,在第21天进行钙结节茜素红染色,光镜观察。结果CD组、CP组和CDP组ALP活性及OC浓度在种植7d后均明显升高(P0.01);在14d时CD组和CDP组ALP活性达到最高值,第7、14天时CDP组ALP活性较CD组、CP组均显著升高(P0.01),仅在第14天时CD组ALP活性较CP组显著升高(P0.01);CDP组OC值在7、14、21d时均较CD组、CP组显著升高(P0.01),仅在第21天时CD组OC浓度较CP组显著升高(P0.01);21d时形态学观察显示钙结节数量CDP组明显多于CD组和CP组(P0.01),CD组明显多于CP组(P0.01)。结论PEMF与DBM联合对hMSCs的成骨诱导要强于PEMF或DBM的单独作用,且随着磁场应用时间的延长更加明显。另外PEMF对DBM诱导hMSCs成骨分化具有明显的协同效应,可能是通过PEMF增强hMSCs对BMPs等成骨活性因子的反应性来实现的。