雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活性研究

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获得ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４３～６７Ｋｄ之间。经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５～５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓前角神经元表现出明显的体外成活作用。Ｄ蛋白带可能是一种有别于已知的ＳＣ源神经营养物质，其活性浓度达到了神经营养因子分子检测水平，值得深入研究     

培养中的雪旺氏细胞对脊髓前角神经元的营养作用

通过隔玻片ＳＤ大鼠瓦勒氏变性远段坐骨神经获得的雪旺氏细胞（ＳＣ）与胎龄１４天的ＳＤ大鼠胚胎脊髓前角神经元（ＳＡＨＮ）联合培养，用倒置显微镜、Ｎｉｓｓｌ染色、ＳＡＨＮ免疫学观察，证实培养中的ＳＣ具有维持神经元成活和促进突起生长的作用。在这二种神经营养因子作用下，脊髓前角神经元胞体增大，突起生长可达数倍胞体长度。为认识和研究运用神经营养学说促进神经再生提供了新资料。     

雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质的提取及体外生物活…

雪旺氏细胞（ＳＣ）分泌多种神经营养因子促进周围神经再生，但ＳＣ分泌的各种蛋白质对周围神经再生的影响尚未完全阐明。为此，从成年大鼠瓦勒氏变性坐骨神经中分离出ＳＣ，经培养获ＳＣ无血清条件培养液（ＳＣ－ＳＦＣＭ）。通过ＰＭ１０超滤浓缩、Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ和Ｂｉｏｔｒａｐ电洗脱，从ＳＣ－ＳＦＣＭ中分离出Ｄ蛋白带，分子量在４７－６７Ｋｄ之间，经ＭＴＴ检测，Ｄ带蛋白在２５－５０ｎｇ／ｍｌ浓度时对脊髓产角神经元     

雪旺氏细胞分泌蛋白质及其神经营养活性物质的生化分析

成年大鼠瓦勒氏变性神经来源的雪旺氏细胞（ＳＣ），经体外无血清分离培养，收集ＳＣ无血清条件培养液，用ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其超滤浓缩液（分子量大于１０ＫＤａ）中ＳＣ分泌蛋白，发现其含有１４条蛋白带，分子量从大于９４ＫＤａ至小于３４ＫＤａ。用免疫印迹技术、抗２．５Ｓ神经生长因子（ＮＧＦ）抗体鉴定证实ＳＣ分泌蛋白中含有ＮＧＦ。用Ｄｉｓｃ－ＰＡＧＥ（４℃）分离ＳＣ分泌蛋白带，分别经电洗脱、浓缩收集１０份蛋白区带，结合有髓腹侧运动神经元细胞培养、ＮＴＦｓ生物学活性鉴定，初步发现其中一组蛋白区带（Ｂ＋）含运动性神经营养因子（ＮＴＦ）活性，其分子量在６５ＫＤａ至３４ＫＤａ。     

神经生长因子和雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质促进周围神经再生的实验研究

在桥接大鼠坐骨神经２０ｍｍ缺损的肌移植体中，于术中、术后１０天、２０天分３次分别注Ａ２．５Ｓ神经生长因子（ＮＧＦ）纯品和雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质（５Ｃ－Ｄ－ＮＴＳ）。术后５个月经组织形态学、神经电生理和肌肉收缩功能测定等，发现两者均能促进周围神经再生，其中注入ＳＣ－Ｄ－ＮＴＳ组能增加再生有髓神经纤维的数目、直径和髓鞘厚度，提高腓肠肌Ｍ波幅值，增强比目鱼肌收缩力；而注入ＮＧＦ组仅增加再生有髓神经纤维数口。     

胶质细胞源性神经营养因子基因修饰的雪旺氏细胞修复大鼠周围神经缺损的实验研究

目的　从转基因角度探讨治疗周围神经损伤的有效方法。方法　成年Wister大鼠 4 8只 ,平均分为 3组。切断大鼠坐骨神经并形成 10mm长缺损 ,用硅胶管桥接两侧断端 ,管腔内植入胶质细胞源性神经营养因子 (glialcell linederivedneurotrophicfactor,GDNF)修饰的雪旺氏细胞 (schwanncells,SCs) ,正常SCs修复组和单纯硅胶管修复组作为对照 ,分别于术后 4、8、12和 16周对各组动物进行大体观察 ,肌电图测量 ,组织学切片观察 ,再生神经的神经电生理检测 ,GDNF免疫组化检测 ,组织学切片 ,观察和图像分析。结果　GDNF SCs组动物的神经传导速度、有髓神经纤维密度、神经组织面积、髓鞘厚度均显著优于SCs组和硅胶管组。结论　将GDNF基因修饰的雪旺氏细胞移植修复周围神经缺损 ,使局部释放的GDNF维持神经元存活 ,加快轴突再生速度以促进周围神经再生 ,此方法为将来治疗周围神经损伤提供了线索。     

植入自体雪旺氏细胞的胚胎神经修复上肢神经缺损

目的 研究修复上肢神经缺损新的手术方法。方法 应用植入自体雪旺氏细胞的胚胎神经复合型神经桥接体，修复上肢神经缺损46例（52条），术后1年进行神经功能评定。结果 本组46例随访40例，随访时间12－36个月，接Seddon的周围神经损伤术后恢复评定标准进行评定，优良率为69．57％。植入自体雪旺氏细胞的胚胎神经复合型神经桥接体移植，是一种修复上肢神经缺损的新方法，具有进一步深入研究和临床应用的前景。     

体外培养雪旺氏细胞的一种新方法

目的：介绍雪旺氏细胞体外培养的一种新方法；方法：先用IV型胶原酶和胰蛋白酶消化出生3天的SD鼠臂层神经和坐骨神经组织块后再将组织块贴壁培养。结果：雪旺氏细胞从组织块中“爬出”速度较直接组织贴壁培养方法快，且纯度较直接组织贴壁培养方法和酶组织块消化培养方法高。结论：先用酶消化组织块，后再将组织块贴壁培养雪旺氏细胞的方法简便可行，值得进一步推广。     

雪旺氏细胞基底膜与晚期神经再生

本文采用日本大耳白种兔１０只，将双侧腓总神经切断术后５个月（此时胫前肌运动终板已证实完全消失），取一侧远端退变的腓总神经３．２ｃｍ，将其放入液氮内冷冻并复温后再移植到对侧腓总神经上，经３、５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４５天及术后６０天，于近端吻合口远端１．０ｃｍ处取材，高压透射电镜观察．结果发现：雪旺氏细胞基底膜不但能长久存在，而且有很强的抗冷冻及热损伤能力；基底膜在诱导神经再生过程中起重要作用，再生轴突均位于移植神经的基底膜管内，未发现轴突在基底膜外生长；近端神经轴突在向远端生长过程中有扩张皱缩、狭窄神经鞘管能力．     

神经生长因子和雪旺氏细胞分泌的神经营养活性物质促进周围…

在桥接大鼠坐骨神经２０ｍｍ缺损的肌     

含有血运雪旺氏细胞的外膜管桥接神经缺损的研究

用含用血运雪旺氏细胞的外膜管桥接兔坐骨神经缺损４ｃｍ，术后６个月神经纤维沿着外膜生长良好，神经纤维排列规则，其复合运动电位，传导速度，波伏，横径平均值，与自体神经移植对比无差异，表明有血运雪旺氏细胞及有血运外膜管结合起来，对神经再生有更大促进作用。     

几丁质室内植入雪旺氏细胞对神经再生影响实验研究

采用生物材料几丁质制成的管道作为神经再生室，对大鼠坐骨神经缺损１２ｍｍ进行桥接。在几丁质室内植入粗品雪旺氏细胞（ｒｓｃ）和不植入ｒｓｃ，并与骨骼肌桥接进行了比较。术后４、８、１２周进行大体观察、显微解剖、神经电生理测试、辣根过氧酶（ＨＲＰ）逆行示踪、组织学检查和电镜观察。结果：植入和不植入ｒｓｃ在术后８周近端再生神经纤维均与远端纤维连接，但不植入ｒｓｃ再生神经的形态、方式和大鼠肢体功能的恢复明显优     

带蒂腱滑膜管羊膜雪旺氏细胞粗制品复合体修复神经缺损实验研究

用带蒂腱滑膜管与植入雪旺氏细胞的人羊膜基底膜组成复合体接兔胫神经15mm缺损，以神经原位移植作对照。经术后3个月的电生理及形态学观察，复合移植体内已形成一套完整的神经干样内、外血管系统；再生神经纤维可经复合体顺利长入远端神经，成熟良好，其传导速度、复合动作电位幅值及轴突数目恢复率，与神经原位移植对比无显著差异性（P＞0．05）。强调移植体血供、基底膜、雪旺氏细胞及神经再生室等局部微环境对神经再生的影响作用。