牛重体bFGF的纯化及生物,生化性能检测

目的 ｂＦＧＦ能刺激毛细血管内皮细胞的增殖与分化,与肿瘤的生长有密切的关系,其在血或局部组织中的含量对的诊断及治疗监测有意义。方法 用（ＮＨ３）ＳＯ４沉淀、ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０离子交换层析、肝素＿Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析方法分离提纯出ＢＦＧＦ,用ＨＵＶＣ和成纤维细胞测定了活性,并进行了ＰＡＧＥ和ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析,结果 产物ＰＩ〉８．９,分子量为１６４００,ＥＤ５０为８３ｐｇ／ｍｌ,     

肺癌患者血浆中血管内皮生长因子与碱性纤维母细胞生长因子表达

目的　研究血管内皮生长因子 (VEGF)与碱性纤维母细胞生长因子 (bFGF)在肺癌患者血浆中表达水平。方法　采用定量免疫酶标 (ELISA)方法 ,检测 92例肺癌患者及肺部良性疾病血浆中VEGF与bFGF的含量。结果　 84例肺癌与 7例肺部良性疾病血浆中VEGF含量分别为 2 0 1.5± 183.0pg/ml,10 2 .5± 6 2 .5pg/ml,两者差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;其中 4 4例腺癌和 7例小细胞癌的VEGF含量分别为 2 0 2 .3± 177.0pg/ml、381.4± 314 .3pg/ml,与其肺部良性疾病比较 ,差异均有显著性 (分别为P <0 .0 5、P <0 .0 0 1)。在 5 6例肺癌与 4例肺部良性疾病血浆中bFGF含量分别为 4 5 .4± 2 3.9pg/ml,5 0 .4± 2 7.2pg/ml,两者差异无显著性。结论　在肺癌患者血浆中VEGF的含量明显高于肺部良性疾病的含量 ,其中腺癌和小细胞肺癌差异有显著性。而肺癌与肺部良性疾病无明显差异     

牛垂体bFGF的纯化及生物、生化性能检测

目的 bFGF能刺激毛细血管内皮细胞的增殖与分化,与肿瘤的生长有密切的关系,其在血或局部组织中的含量对肿瘤的诊断及治疗监测有意义。方法 用(NH_4)SO_4沉淀、CM—Sephadex C—50离子交换层析、肝素—Sepharose亲和层析方法分离提纯出BFGF,用HUVC和成纤维细胞测定了活性,并进行了PAGE和SDS—PAGE分析。结果 产物PI>8.9,分子量为16400,ED_(50)为83pg/ml,最终纯化倍数为220000,产率为0.1mg每公斤垂体。结论 纯化产品为单一成份,纯度较高,且回收率达到国外文献报道的高值。     

间质成纤维母细胞与乳腺癌的发生发展研究进展

成纤维母细胞是乳腺癌间质的重要组成成分之一,该细胞与正常乳腺组织间质的成纤维细胞在生物学特性上存在明显的差异,不仅在肿瘤的发生、发展中起重要作用,而且与患者的预后密切相关.近年来,研究还显示乳腺癌相关成纤维母细胞与治疗效果有关,将成为乳腺癌治疗策略中不可忽略的一个方面.     

γ-干扰素对喉癌细胞株碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的：研究γ-干扰素（IFN-γ）对人喉癌细胞株Hep-2细胞碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）基因及蛋白表达的影响。方法：将IFN-γ以不同浓度[（1、10、100、1000、10000）U/ml]、不同作用时间[（0、12、24、36、48、60、72）h]作用于Hep-2细胞,用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖;用实时荧光定量PCR（Realtime-PCR）法测定IFN-γ（1000U/ml）不同作用时间[（0、2、6、12、24、36、48、60、72）h]细胞bFGFmRNA含量;用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫细胞化学方法测定与Realtime-PCR相同药物剂量和作用时间细胞培养上清液和细胞浆中bFGF蛋白含量。结果：细胞生长受到抑制,以高剂量组表现最为明显。不同浓度（1、10、100、1000、10000U/ml）IFN-γ作用不同时间[（0、12、24、36、48、60、72）h]后,从48h开始,（100、1000、10000）U/ml的IFN-γ对Hep-2细胞有明显的抑制作用,差异有显著性（P〈0.05）,但不随着浓度的增加而成正比。1000U/mlIFN-γ作用后,在2h后与对照组比,bFGFmRNA表达上调,差异有显著性（P〈0.05）,特别是48h后,有显著性差异（P〈0.01）。1000U/mlIFN-γ作用48h后,与对照组比较,Hep-2细胞浆中的棕色颗粒明显增多。结论：IFN-γ抑制Hep-2细胞分泌bFGF却,不抑制其合成。     

γ-干扰素对喉癌细胞株碱性成纤维细胞生长因子表达的影响

目的:研究γ-干扰素(IFN-γ)对人喉癌细胞株Hep-2细胞碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)基因及蛋白表达的影响。方法:将IFN-γ以不同浓度[(1、10、100、1000、10000)U/ml]、不同作用时间[(0、12、24、36、48、60、72)h]作用于Hep-2细胞,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法测定细胞增殖;用实时荧光定量PCR(Realtime-PCR)法测定IFN-γ(1000U/ml)不同作用时间[(0、2、6、12、24、36、48、60、72)h]细胞bFGFmRNA含量;用双抗体夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫细胞化学方法测定与Realtime-PCR相同药物剂量和作用时间细胞培养上清液和细胞浆中bFGF蛋白含量。结果:细胞生长受到抑制,以高剂量组表现最为明显。不同浓度(1、10、100、1000、10000U/ml)IFN-γ作用不同时间[(0、12、24、36、48、60、72)h]后,从48h开始,(100、1000、10000)U/ml的IFN-γ对Hep-2细胞有明显的抑制作用,差异有显著性(P<0.05),但不随着浓度的增加而成正比。1000U/mlIFN-γ作用后,在2h后与对照组比,bFGFmRNA表达上调,差异有显著性(P<0.05),特别是48h后,有显著性差异(P<0.01)。1000U/mlIFN-γ作用48h后,与对照组比较,Hep-2细胞浆中的棕色颗粒明显增多。结论:IFN-γ抑制Hep-2细胞分泌bFGF却,不抑制其合成。     

碱性成纤维细胞生长因子与肿瘤

碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)作为一种细胞丝裂原和促血管生成因子，在许多肿瘤的生长中起着重要的作用，许多实验研究提示肿瘤组织或患者体液中的bFGF水平能作为诊断或判断预后的指标，目前，阻止bFGF产生及抑其生物学活性的发挥，作为一种有效的抗肿瘤策略已得到广泛的发展，具有良好的应用前景。     

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体通过P-糖蛋白逆转乳腺癌MCF-7/ADM细胞多药耐药性的分子机制

目的:探讨碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic broblast growth factor,bFGF mAb)通过P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)对人乳腺癌多柔比星(adriamycin,ADM)耐药细胞株MCF-7/ADM多药耐药(multidrug resistance,MDR)性的逆转机制。方法:CCK-8(cell counting kit-8)法检测bFGF mAb对MCF-7/ADM细胞增殖的影响及其对化疗药物耐药的逆转作用;bFGF mAb作用后,FCM检测MCF-7/ADM细胞的细胞周期、P-gp的表达及细胞内罗丹明(rhodamine,Rho)123的荧光强度,实时荧光定量PCR检测MCF-7/ADM细胞中MDR1和碱性成纤维细胞生长因子(basic broblast growth factor,bFGF)mRNA的表达。结果:1μg/mL bFGF mAb对MCF-7和MCF-7/ADM细胞的抑制率分别为(19.87±1.05)%和(27.34±2.79)%,差异有统计学意义(P<0.01)。bFGF mAb可有效逆转MCF-7/ADM细胞对ADM、吉西他滨(gemcitabine,GEM)和奥沙利泊(oxaliplatin,OXA)的耐药性,逆转指数分别为4.46、4.25和2.18。bFGF mAb作用MCF-7/ADM细胞后,细胞阻滞于G0/G1期,P-gp表达下调,细胞内Rho123的荧光强度增强,MDR1和bFGF mRNA的表达下调,与未作用组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:bFGF mAb能抑制MCF-7/ADM细胞增殖并逆转其MDR,该作用机制可能与bFGF mAb下调MDR1/P-gp表达、抑制P-gp功能以及增加细胞内化疗药物浓度有关。     

碱性成纤维细胞生长因子在前列腺癌中的表达

目的探讨碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在前列腺癌中表达的临床意义。方法应用半定量RT-PCR技术和免疫组织化学方法,检测22例前列腺癌组织中bFGF的表达,并与正常的前列腺组织进行比较。结果前列腺癌组织中的bFGF表达高于正常的前列腺组织(P<0.05);bFGF表达升高的程度与前列腺癌病理分级和临床分期均无明显关系。结论前列腺癌组织中bFGF的表达高于正常前列腺组织,提示bF-GF与前列腺癌的发生发展密切相关。     

碱性成纤维细胞生长因子与肿瘤

碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)作为一种细胞丝裂原和促血管生成因子,在许多肿瘤的生长中起着重要的作用.许多实验研究提示肿瘤组织或患者体液中的bFGF水平能作为诊断或判断预后的指标.目前,阻止bFGF产生及抑制其生物学活性的发挥,作为一种有效的抗肿瘤策略已得到广泛的发展,具有良好的应用前景.     

肿瘤相关纤维母细胞的研究进展

肿瘤的生物学特性不仅是由癌基因和抑癌基因来调控的,还依赖于由其间质等构成的微环境。基膜、免疫细胞、毛细血管、纤维母细胞和细胞外基质(extracellular matrix,ECM)共同构成肿瘤间质,与创伤愈合过程中的间质相似,肿瘤间质亦为活化的间质(reactive stroma)。而纤维母细胞是活化间质中的主要功能细胞,其与肿瘤的发生发展的关系日益成为研究的热点。本文旨在探讨肿瘤相关纤维母细胞(carcinoma-associated fibroblasts,CAF)的生物学特点及研究进展及方向。     

p53基因碱性成纤维生长因子微血管密度检测用于判断垂体腺瘤侵袭性及评估预后的临床价值

目的探讨p53基因、碱性成纤维生长因子(b FGF)和微血管密度(MVD)检测用于垂体腺瘤侵袭性判断以及评估预后的临床价值。方法选取2009年3月至2014年3月收治的40例垂体腺瘤患者,按其手术后病理诊断结果分为侵袭组和非侵袭组,应用免疫组化方法检测p53基因和b FGF表达情况,对肿瘤组织内的MVD进行标记并计数;通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)对p53和b FGF的mRNA表达情况进行检测,分析侵袭组和非侵袭组间p53、b FGF和MVD的表达差异。结果侵袭组的p53和b FGF蛋白及mRNA表达水平相较非侵袭组均明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。侵袭组的MVD计数较非侵袭组也有显著提高,差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,侵袭组中,p53与b FGF的mRNA表达水平正相关(r=0.61,P<0.05);p53 mRNA的表达与MVD计数正相关(r=0.68,P<0.05);b FGF的mRNA表达水平与MVD计数正相关(r=0.82,P<0.05)。结论在垂体腺瘤的侵袭性判断以及预后评估方面,p53、b FGF和MVD是比较可靠的生物学指标,可用于临床诊治和预后参照。     

碱性成纤维细胞生长因子在宫颈癌中的表达及意义

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)在宫颈癌组织中的表达情况，探讨其与子宫颈癌的生长、浸润及转移的关系。方法：用免疫组织化学S-P法检测42例子宫颈癌组织中及5例正常宫颈组织中bFGF的表达情况。结果：bFGF在正常子宫颈鳞状上皮细胞中呈阴性或弱阳性表达，正常组织及肿瘤组织的血管内皮细胞、平滑肌细胞均呈弱阳性表达，肿瘤细胞呈不同程度的阳性表达。bFGF强阳性表达与肿瘤大小、病理分级、临床分期、淋巴结有无转移均有显著相关性(P＜0．05)。结论：bFGF在子宫颈癌组织中的表达与肿瘤的生长、浸润及转移密切相关，可作为反映子宫颈癌生物学行为的指标之一。     

碱性成纤维细胞生长因子治疗白血病化疗后口腔溃疡

目的　探讨碱性成纤维细胞生长因子在白血病化疗后口腔溃疡治疗中的疗效和安全性。方法　 60例病人随机分为两组 ,各 3 0例。治疗组口腔局部应用碱性成纤维细胞生长因子 ,配合常规处理 ;对照组单纯应用常规处理。结果　治疗组总有效率 86.7% ,对照组总有效率 46.7%。两组总有效率比较差异有非常显著意义 (P <0 .0 1) ,无严重不良反应。结论　碱性成纤维细胞生长因子治疗白血病化疗后口腔溃疡疗效好 ,安全可靠。     

纤维母细胞活化蛋白（FAP—alpha）研究的临床意义

肿瘤间质纤维母细胞，不同于静息状态成人正常组织的纤维母细胞，特征性地表达一种糖蛋白-纤维母细胞活化蛋白（FAPα），FAPα具有二肽酰肽酶及胶原酶蛋白水解活性，因而可以降解二肽，也可以降解凝胶及Ⅰ型胶原，间质降解是肿瘤细胞侵袭的基本条件之一。以FAPα作为肿瘤生物标记以诊断及治疗肿瘤正在成为一个新兴领域。     

人bFGF单克隆抗体的制备及MabF7对黑色素瘤B16的体外抗瘤效应

目的:制备抗人碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)单克隆抗体,并探讨其体外对黑色素瘤细胞B16的抗肿瘤效应.方法:以rhbFGF免疫Balb/C小鼠,用杂交瘤技术制备单克隆抗体;间接ELISA法筛选阳性杂交瘤细胞株,测定腹水型单抗的效价及其Ig亚类;用RT-PCR、细胞免疫组化和双抗体夹心等方法检测黑色素瘤B16细胞中bFGF的表达;用MTT法检测单抗MabF7对B16细胞的体外抑瘤效应;用流式细胞术及DNA琼脂糖电泳技术检测细胞凋亡.结果:共获得19株稳定分泌抗bFGF单抗的杂交瘤细胞株;ELISA效价＞105;除 MabF8、MabF9为IgG2a外,其余为IgG1;黑色素瘤细胞B16中有bFGF mRNA及其蛋白的表达,且可在细胞培养液中检测到bFGF;经蛋白A纯化的MabF7对B16细胞的抑制作用呈剂量及时间累计效应,抑制率为(39±4.12)%,P＜0.01.流式细胞术结果显示,随抗体浓度增加及作用时间延长,肿瘤细胞在G1期前出现明显的亚二倍体期;DNA电泳结果显示,抗体作用后的细胞DNA呈明显的梯度条带. 结论:MabF7具有体外抑制黑色素瘤B16细胞增殖作用,其机制与诱导细胞凋亡有关.     

血管内皮生长因子、碱性成纤维细胞生长因子在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的：探讨血管内皮生长因子（VEGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)在非小细胞肺癌（Non-small cell lung cancer,NSCLC)中的表达及临床意义。方法：应用免疫组织化学方法检测96例NSCLC组织中VEGF、bFGF蛋白水平的表达，其中36例应用RT－PCR技术检测上述基因mRNA表达。结果：NSCLC中VEGF mRNA主要表达分泌性VEGF121和VEGF165，阳性率分别为69．5％（25／36）和41．7％（15／36），bFGF mRNA阳性率为52．8％（19／36）；免疫组化显示VEGF、bFGF阳性表达率分别为55．6％（20／36）和58．3％（21／36），二者之间呈正相关（P＝0．002）；VEGF、bFGF表达与患者年龄、性别、病理类型、分化程度、TNM分期、肿瘤转移、生存期等临床资料之间无统计学意义。结论：VEGF、bFGF在NSCLC血管形成中起重要作用，且二者具有协同作用。     

碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体联合洛铂对肺腺癌A549细胞增殖和凋亡的影响

目的:研究碱性成纤维细胞生长因子单克隆抗体(monoclonal antibody to basic fibroblast growth factor,bFGF mAb)联合洛铂(lobaplatin,LBP)对肺癌A549细胞增殖和凋亡的影响及其可能机制.方法:CCK-8法检测药物对A549细胞活性的影响.Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡率.激光共聚焦显微镜观察细胞核的形态.Western blotting检测细胞内凋亡相关蛋白表达.结果:CCK-8法检测结果显示,细胞培养48 h后,bFGF mAb组和LBP组的细胞增殖受到抑制,但两药联用后的增殖抑制作用明显高于单用LBP及bFGF mAb(P＜0.05).Annexin V-FITC/PI结果显示,联合组早期、晚期凋亡率分别为(27.83±1.23)％和(39.32±1.01)％,与bFGF mAb的(6.25±0.19)％、(14.54±0.25)％和LBP的(16.54±0.39)％、(21.02±0.98)％相比,明显高于单药组的抑制率(P＜0.01).激光共聚焦显微镜显示联合用药诱导的细胞核裂解率较单用bFGF mAb及LBP的细胞核裂解率明显增多.Western blotting检测结果显示联合组BAX、Caspase-3、Caspase-9、PARP表达量较药物单用组明显增加,而Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达量明显降低.结论:bFGF mAb联合LBP通过抑制Bcl-2、cleaved-Caspase-3、cleaved-Caspase-9、cleaved-PARP表达,上调BAX、Caspase-3、Caspase-9和PARP蛋白表达,对肺腺癌A549细胞起到抑制增殖和诱导凋亡的作用.