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1.
CD4+CD25+Treg细胞对B细胞的作用机制分析   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究CD4 CD25 调节性T细胞对B细胞作用机制.方法用尼龙毛柱法分离B细胞,用MACS磁珠分选法从Wistar大鼠脾脏淋巴细胞中分离CD4 CD25 Treg细胞,然后将分离纯化的Wistar大鼠Treg细胞负载SD大鼠抗原.以Trans Well Millcell-PCF分隔培养槽分隔或共培养Treg细胞与不同淋巴细胞组成的反应体系,然后向共培养体系中加或不加入Anti-TGF-β1、Anti-CTLA4的阻断方法,培养5天后用ELISA法检测不同组上清中的IgA和IgG分泌水平. 结果分隔培养组上清中的IgG和IgA水平分别为(4.7±1.1)、(10.5±1.7)μg/ml,与阳性对照组中IgG的含量(5.1±1.0)μg/ml以及IgA的(11.2±1.6)μg/ml相比没有显著差异(P>0.05).而与阳性对照组相比较,共培养组上清中的IgG和IgA水平明显降低(P<0.01),分别达到了(2.2±0.8)μg/ml和(5.4±0.9) μg/ml.在共培养体系中加入Anti-TGF-β1后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.1±0.5)μg/ml和(6.9±0.8)μg/ml;加入Anti-CTLA4后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.2±0.6)μg/ml和(7.2±0.9)μg/ml;两种阻断剂同时加入后,上清中的IgG和IgA的分泌水平分别达到(3.5±0.5)μg/ml和(7.4±0.6)μg/ml,三组分泌水平都较共培养组明显升高(P<0.05),但仍明显低于阳性对照组的水平(P<0.05). 结论CD4 CD25 Treg通过细胞-细胞间接触机制直接抑制B淋巴细胞反应,在这一过程中TGF-β1和CTLA4都发挥了一定作用.  相似文献   

2.
目的:探讨hCGβ粘膜避孕疫苗体液免疫的分子机制。方法:分别用1010个重组乳酸杆菌Lb.pIlac、Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜途径免疫6~8周龄BALB/c小鼠,3周后相同剂量加强免疫1次。间接ELISA检测加强免疫后2周阴道灌洗液中抗hCGβIgG和IgA抗体滴度;ELISPOT检测分泌抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞数;RT-PCR筛查小鼠子宫B细胞上18种趋化因子受体和相关趋化因子CCL25;FCM和ELISA分析CCR9/CCL25的表达。结果:经小鼠生殖道粘膜接种1010Lb.pIlac-hCGβ可在生殖道局部诱导产生抗hCGβIgG和IgA抗体,且以IgG抗体为主;局部存在抗hCGβIgG和IgA抗体分泌细胞,而以IgG抗体分泌细胞为主;粘膜免疫后,小鼠生殖道局部B细胞上CCR9表达增高,粘膜局部相应配体CCL25表达亦增高。结论:重组乳酸杆菌活疫苗Lb.pIlac-hCGβ经小鼠生殖道粘膜免疫可诱导有效的免疫应答;粘膜局部CCR9/CCL25可介导B细胞归巢至生殖道局部,这可能增强hCGβ粘膜避孕疫苗的避孕效果。  相似文献   

3.
目的 对IgA Fc受体(FcaR Ⅰ)介导的U937细胞吞噬IgA免疫复合物进行研究。方法 以异硫氰酸荧光素(FITC)标记的8.9NIP/BSA为抗原,与抗NIP的IgA或IgA抗体结合,分别形成IgA免疫复合物(IgA IC)和IgG免疫复合物(IgG IC),再与经佛波醇乙酯(PMA)刺激分化为单核细胞样的13937细胞孵育,流式细胞仪分析U937细胞吞噬IgA Ic和IgG IC的情况。结果 U937细胞表面:FcaR Ⅰ表达量高于3种IgG Fe受体(FcγRⅠ、FcγRⅡ、FcγRⅢ)。PMA刺激后细胞表面FcαRⅠ上调明显,吞噬IgAIC能力增加。FcαRⅠ介导的U937细胞对IgA IC的吞噬作用高于FcγRⅠ和FcγRⅡ介导的对IgG IC的吞噬作用,且这种吞噬作用是特异性的。在补体受体CRl和CR3作用下,U937细胞对IgA IC的吞噬作用有所增强。结论 FcαRⅠ介导单核细胞非常强的吞噬IgA IC的作用。  相似文献   

4.
目的:分析可诱导共刺激分子(ICOS)能否向成熟过程中树突状细胞(DCs)传递逆向信号及其对DCs功能的影响。方法:取小鼠骨髓细胞,体外诱导培养、纯化第5天不成熟DCs,以ICOSIg或对照IgG加LPS或CpG处理后,流式细胞仪检测DCs表型分子、吞噬功能及胞内细胞因子改变;以ELISA检测培养上清细胞因子变化;以[3H]-TdR掺入法探讨DCs抗原递呈功能。结果:与IgG对照组相比,ICOSIg联合LPS或CpG处理组DCs分泌TGF-β1的表达明显升高;ICOSIg作用于成熟过程中DCs,其吞噬功能与对照IgG相比近似或略有增强,但其抗原递呈功能受到部分抑制,可引起T细胞中IL-2、IL-10明显升高。结论:ICOS作用于成熟过程中的DCs后,促进DCs特异性分泌TGF-β1、部分抑制了DCs的抗原递呈功能,其机制可能是诱导了产IL-10 CD4+T细胞的生成;这种反向信号在不同机制诱导DCs成熟的过程中均可能存在。  相似文献   

5.
目的通过检测鼠疫组分疫苗免疫小鼠诱导的体液免疫应答,对其免疫原性进行评价。方法将小鼠随机分成4个实验组,免疫后5周内眦采血,检测血清中抗F1抗原和rV抗原IgG及IgA抗体;充分暴露气管,沿气管上端剪一楔形口,用PBS冲洗肺泡制备肺冲洗液,检测肺冲洗液中抗F1抗原和rv抗原IgG及IgA抗体。结果血清中可产生较高效价的抗F1抗原和rV抗原IgG抗体以及较低效价的抗F1抗原IgA抗体。肺冲洗液中可检测到抗F1抗原和rV抗原的IgG抗体,但无特异性IgA产生。结论鼠疫组分疫苗能诱导小鼠产生较强的血清抗体应答,肺冲洗液可检测到一定的IgG抗体,该疫苗有希望成为我国新一代鼠疫疫苗。  相似文献   

6.
在粘液腺分泌的液体中(如唾液、乳汁),IgA 是免疫球蛋白的主要类型。与粘液中的中性粒细胞上的IgA 受体结合后,IgA 能介导中性细胞的吞噬作用,但在体外IgA 不能介导外周血中的中性粒细胞的吞噬作用(尽管中性细胞上有IgA 受体)。已有报道,粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)能调节中性细胞的功能,改变细胞  相似文献   

7.
IgG刺激诱发的小胶质细胞Toll样受体4表达及细胞因子分泌   总被引:3,自引:1,他引:2  
目的:了解在体外培养条件下免疫球蛋白G (IgG) 刺激对小胶质细胞表达Toll 样受体4(TLR4)和分泌细胞因子的作用.方法:用不同浓度的IgG (2 mg/L、 20 mg/L、 200 mg/L)及脂多糖(LPS)(10 mg/L)刺激原代培养的大鼠小胶质细胞,24 h后以免疫荧光染色观察TLR4的表达,ELISA法检测培养上清中肿瘤坏死因子α(TNF-α)和γ干扰素(IFN-γ)的含量.结果:IgG直接作用于体外培养的小胶质细胞后,以剂量依赖的方式引起TLR4的表达和TNF-α的分泌,但未检测到IFN-γ含量的变化.作为阳性对照的LPS引起了小胶质细胞TLR4表达,并诱导了TNF-α及少量IFN-γ的分泌.结论:同种IgG刺激可使体外培养的小胶质细胞大量表达TLR4,可能通过MyD88依赖途径导致炎性细胞因子分泌.结果提示至少在中枢神经系统的固有免疫反应中,TLR4可能发挥识别病原体之外的蛋白分子,例如IgG的作用.  相似文献   

8.
当口服抗原时,抗原如何刺激IgA抗体呢?这可能与调节IgA应答的T淋巴细胞的特殊解剖分布有关。在研究IgM、IgG和IgE应答时,证实T细胞调节抗体生成(有些是辅助,有些是抑制)的概念。发现刀豆素A(ConA)在致有丝分裂浓度时可刺激T细胞抑制IgM和IgG合成。Elson等报导ConA能刺激小  相似文献   

9.
目的 评价二价轮状病毒灭活疫苗免疫效果,探讨其开发的可行性.方法 首先将G1型和G3型轮状病毒灭活疫苗等量混合制备二价疫苗,设立抗原量相等的G1型、G3型单价疫苗对照及PBS阴性对照,然后肌内注射免疫小鼠,通过ELISA检测血清和肠道中病毒特异性IgG和IgA、微量中和实验检测血清中病毒特异性中和抗体,ELISPOT分析免疫小鼠脾细胞中病毒特异性IFN-γ分泌细胞和IL-4分泌细胞的数量,评价二价疫苗的免疫效果.结果 与阴性对照组相比,二价疫苗显著诱发了G1和G3特异性血清IgG、IgA、中和抗体和肠道IgG、IgA.与单价疫苗组相比,二价疫苗诱发的G1特异性血清IgG和IgA、肠道IgG和IgA及血清中和抗体与G1单价疫苗组诱发的相应抗体间差异无统计学意义;但二价疫苗组诱发的G3特异性血清IgG(t=2.691,P<0.05)及中和抗体(t=2.561,P<0.05)却显著高于G3单价疫苗组诱发的相应抗体水平,其余G3特异性抗体水平两者无差异.同时,与阴性对照组相比,二价疫苗免疫小鼠脾细胞中IFN-γ和IL-4分泌细胞的数量均显著增加.与单价疫苗组相比,G1刺激产生的IFN-γ和IL-4分泌细胞的数量,二价疫苗组与G1单价疫苗组无显著差异;但在二价疫苗组,G3刺激产生的IL-4分泌细胞的数量显著高于G3单价疫苗组(t=2.327,P<0.05),而IFN-γ分泌细胞的数量两组无显著性差异.结论 二价疫苗可以有效的诱发免疫应答,疫苗不同成分诱发的免疫应答未发生干扰抑制,这些结果为临床二价轮状病毒灭活疫苗的开发提供了实验依据.  相似文献   

10.
目的:探讨雷公藤新碱对LPS诱导小鼠树突状细胞(DCs)分化、成熟过程及其分泌细胞因子的影响。方法:体外培养的C57BL/6小鼠骨髓DCs在LPS诱导成熟过程中,加入雷公藤新碱处理,流式细胞术检测DCs细胞表面MHCⅡ、CD80、CD86分子表达水平及DCs抗原吞噬能力,抗体芯片检测细胞因子的分泌情况。结果:与对照组相比,雷公藤新碱干预后DCs细胞表面分子MHCⅡ、CD80、CD86的表达水平明显降低,而抗原吞噬能力增强,培养上清中细胞因子分泌减少。结论:雷公藤新碱抑制LPS诱导的DCs成熟与分化,增加DCs抗原吞噬能力,并抑制其细胞因子分泌。提示雷公藤新碱可减轻DCs介导的炎症反应,为阐明雷公藤新碱在炎症性疾病治疗机制上提供理论与实践基础。  相似文献   

11.
脂多糖介导的血管平滑肌细胞血红素   总被引:1,自引:0,他引:1       下载免费PDF全文
目的:研究脂多糖(LPS)作用下的血管平滑肌细胞血红素加氧酶-1(HO-1)基因的表达,并探讨HO/一氧化碳(CO)调节通路在内毒素性血管调节功能障碍中的作用。方法:10mg/L、30mg/L及50mg/L的LPS与培养的大鼠主动脉平滑肌细胞(VSMC)共同孵育6h,以及10mg/LLPS与VSMC共同孵育9h和18h。分别观察细胞丙二醛(MDA)含量及乳酸脱氢酶(LDH)活性、台盼蓝染色法记录VSMC蓝染率的变化;Northern杂交测HO-1mRNA表达。结果:VSMCHO-1mRNA表达随LPS浓度的增大而增加,LPS50mg/L时HO-1mRNA表达比对照高176.7%;低剂量LPS(10mg/L)诱导VSMCHO-1mRNA的表达量随诱导时间的延长而增加,18h组HO-1mRNA的表达量比对照高195.6%。只有当LPS浓度增加至50mg/L及10mg/L孵育18h时,细胞台盼蓝摄取率、MDA含量与LDH活性明显增加、细胞出现损伤。结论:LPS可诱导VSMCHO-1mRNA的表达且具有浓度依赖性和时间依赖性,HO/CO可能为介导内毒素性血管平滑肌功能调节障碍的重要通路。  相似文献   

12.
目的探讨MRL/lpr小鼠中CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞(Treg细胞)对B淋巴细胞的影响。方法磁珠分选法选出MRL/lpr小鼠及Balb/c小鼠脾脏中的Treg与效应性T细胞(Teff细胞),以尼龙毛柱法分离B细胞;用2种小鼠的Treg细胞分别与MRL/lpr小鼠的B淋巴细胞(加或不加Teff细胞)组成共培养体系,5 d后用酶联免疫吸附法检测上清液中IgA及IgG的水平,计算抑制率;将两种小鼠的Treg细胞注入MRL/lpr小鼠,对照组注入生理盐水,3周后流式细胞法检测小鼠脾脏中CD19+CD27++浆细胞含量。结果两种小鼠Treg细胞对B细胞分泌IgA及IgG均有直接抑制作用,与Teff细胞共培养也能对B细胞IgA及IgG的分泌起抑制作用(总抑制作用),两种小鼠Treg细胞的直接抑制率无显著性差异,总抑制率均大于直接抑制率,且MRL/lpr小鼠的Treg细胞总抑制率显著降低;输注同系Treg细胞的MRL/lpr小鼠,3周后浆细胞的含量显著低于对照组及输入Balb/c小鼠Treg细胞组。结论 Treg细胞可直接或间接抑制MRL/lpr小鼠的B细胞分泌IgA和IgG,MRL/lpr小鼠体内Treg细胞对B细胞的抑制力低于正常对照。输注同系Treg细胞可减少MRL/lpr小鼠浆细胞的生成。  相似文献   

13.
目的 通过比较EB病毒抗体检测试剂盒血清学诊断鼻咽癌的准确性和检测结果的一致性,为试剂盒在临床上的使用选择和性能改进提供依据.方法 使用五厂家的EB病毒衣壳抗原IgA和IgG抗体检测试剂盒(VCA IgA和VCA IgG试剂盒)、核抗原I IgA和IgG抗体检测试剂盒(EBNA1 IgA和EBNA1IgG试剂盒)、早期抗原IgA和IgG抗体检测试剂盒(EA IgA和EA IgG试剂盒)以及Zta IgA抗体检测试剂盒,分别检测33例鼻咽癌患者(NPC)、30例健康体检者(HD)和41例非鼻咽癌的其他肿瘤患者(NNPC)血清或血浆样本.结果 A厂家的VCA IgA试剂盒灵敏度高于其他厂家同品种试剂盒,但对于NNPC特异度最低(36.6%);而D厂家VCA IgA试剂盒的特异度最高(97.6%),且对HD的特异度均大于90%.B和D厂家的EBNA1 IgA试剂盒间阳性、阴性符合率分别为92.1%和100.0%.A和E厂家的EA IgA试剂盒的灵敏度均较低而特异度高,试剂盒间阳性符合率低(39.4%),阴性符合率高(98.6%);而VCA IgG试剂盒的灵敏度高但特异度低.A和C厂家的EBNA1IgG试剂盒的灵敏度高(100.0%,97.0%)但特异度低(3.3%,13.3%).C厂家EA IgG试剂盒检测所有样本结果均为阴性.结论 五个不同厂家VCA LgA、EA IgA试剂盒诊断鼻咽癌的准确性和检测结果的一致性存在差异,特别是A厂家和其他国内厂家同品种试剂间差异明显,需根据临床目的进行选择.三家国产VCA IgA试剂盒的灵敏度需进一步提高.相反,EBNA IgA试剂盒诊断鼻咽癌的准确性和结果一致性较好.单独使用VCA IgG和EBNA1 IgG试剂盒血清学诊断鼻咽癌的特异度差,其判读界值可能需根据检测且的进行调整.  相似文献   

14.
目的探讨硫辛酸(LA)对脂多糖(LPS)激活的星形胶质细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10及相关趋化因子的影响。方法分离并鉴定新生C57BL/6小鼠大脑皮质星形胶质细胞,1μg/mL LPS刺激第2代星形胶质细胞,100μg/mL LA进行干预,Griess法检测NO的分泌,ELISA检测TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10炎性因子的含量,反转录PCR检测炎症趋化因子CC亚族趋化因子配体20(CCL20),单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)和巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1α)mRNA的表达。结果与正常组比较,LPS刺激星形胶质细胞后,NO、TNF-α、IL-1β、IL-6分泌显著升高,IL-10分泌下调(P0.05);LA能抑制LPS诱导的NO、TNF-α、IL-1β、IL-6的分泌,增加IL-10的分泌,与LPS组相比差异有统计学意义(P0.05)。LA能显著下调LPS所致的CCL20、MIP-1α、MCP-1 mRNA的分泌。结论 LA能抑制LPS激活星形胶质细胞所致的炎性反应,其作用与抑制炎性因子及趋化因子的分泌有关。  相似文献   

15.
目的检测所构建的沙眼衣原体(Ct)重组疫苗株口服免疫小鼠后,产生的体液免疫应答。方法将所构建的重组菌以5×108菌落形成单位(CFU)/只的剂量,口服免疫雌性Balb/c小鼠,随机分为7组,每组3只。于免疫后第2,7,14,21,28,35和42d各取1组,采集血清、小肠肠腔冲洗液和阴道冲洗液标本。分别以D型Ct和鼠伤寒杆菌临床分离株为抗原,检测各组血清、小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中特异性IgG,IgA和IgM。取抗D型Ct血清IgG阳性标本和阴道冲洗液IgA阳性标本,分别用于检测与C型Ct的交叉反应。结果在血清标本中,有抗D型Ct和抗鼠伤寒杆菌特异性IgG和IgM,在小肠冲洗液和阴道冲洗液标本中有抗上述两种抗原特异性IgG和IgA。抗D型CtIgG阳性血清标本和IgA阳性阴道冲洗液标本与C型Ct均有交叉反应。结论所构建的疫苗株免疫小鼠后,能够诱导Ct特异性IgG及IgA产生。  相似文献   

16.
LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞成熟的影响   总被引:6,自引:0,他引:6  
目的 研究LPS持续刺激对小鼠骨髓树突状细胞 (DC)成熟的影响。方法 小鼠骨髓细胞用GM CSF培养 7d ,持续刺激组全程加入LPS ,短期刺激组在最后 48h加入LPS ,对照组不加LPS。流式细胞仪检测细胞表型和细胞摄取抗原的能力 ,ELISA检测细胞产生的细胞因子 ,混合淋巴细胞培养检测细胞提呈抗原的能力。结果 用LPS持续刺激的小鼠骨髓DC表达MHCⅡ、CD86、CD80和CD11c等分子和分泌TNF α和IL 12 (p70 )的能力并未增加 ,吞噬FITC OVA的能力显著升高 ,刺激同种异基因T细胞和刺激同种同基因T细胞增殖的能力亦显著低于LPS短期刺激组。结论 LPS持续刺激可抑制DC的发育成熟 ,可能是持续严重感染时免疫功能低下的原因  相似文献   

17.
观察从Vero细胞与弓形虫速殖子共培养液分离的排泄-分泌抗原(Excreted-secreted antigens,ESA)鼻内免疫小鼠诱导的体液免疫应答及动态变化,为弓形虫复合黏膜疫苗候选抗原提供实验依据。BALB/c小鼠84只随机分为实验组和对照组,实验组以ESA为抗原(20μg/只),对照组用未接种弓形虫的细胞培养上清液20μL(μg/只),滴鼻免疫2次(间隔2周)。分别于2次免疫后第1、2、3、4、5、6、7周颈椎脱位处死小鼠。ELISA法测定血清IgG、IgA,粪便sIgA及肠液sIgA。结果表明,免疫组小鼠血清IgG、IgA和粪便sIgA及肠液sIgA均增高。血清IgG、IgA水平分别第5周、第4周达高峰,免疫后第1~7周(P<0.05)显著高于对照组。粪便sIgA第4周即达高峰,之后逐渐降低,至第7周仍(P<0.05)显著高于对照组。肠液sIgA第4周达高峰,第2、3、4周(P<0.05)高于对照组。可见,弓形虫ESA鼻内免疫BALB/c小鼠可有效诱导体液免疫应答,特异性抗体生成明显且可持续较长时间。  相似文献   

18.
本文报道取正常人混合血清纯化IgG,经断链后获得(Fc)5μ片段作为免疫原免疫动物,应用杂交瘤技术获得16株分泌抗人IgG McAb的细胞株。用琼脂双扩散、免疫电泳、ELISA等方法证实所分泌的McAb对人IgM呈高特异性。杂交瘤细胞诱生腹水的抗体效价在双扩散试验中可达1:256,在ELISA中可达10_(-7)。用被动血凝抑制试验及ELISA试验比较了其中4种McAb(M_5)、M_(1 2)、M_(2 3)、M_(2 5))的抗原结合力大小,表明M_(1 2)有较高亲和力。用ELISA固相竞争试验分析。证明该4种McAb针对同一抗原的不同决定簇。该16种McAb除M_(2 2)为IgA外,其余均属IgG1亚类。  相似文献   

19.
目的 研究负载滋养层细胞抗原对小鼠髓源性树突状细胞(DC)分化成熟过程的影响,获得致耐受性DC.方法 体外使用粒细胞巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导小鼠骨髓细胞定向分化、经LPS刺激获得成熟DC;通过外胎盘锥组织块培养法获得滋养层细胞,制备可溶性抗原,加入DC培养体系.流式细胞术检测DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ的表达,ELISA法检测DC分泌IL-10和IL-12的浓度,混合淋巴细胞培养评估 DC刺激同种T细胞增殖、活化的功能.结果 成熟DC表型为CD40high CD80highCD86highMHC-Ⅱhigh,分泌大量的IL-12和极少量的IL-10 ,体外能有效刺激T细胞的增殖;负载滋养层细胞抗原的DC表型为CD40midCD80lo wCD86lowMHC-Ⅱlow,在分泌大量IL-12的同时IL-10也明显升高,不能有效刺激T细胞增殖,并使T细胞分泌细胞因子呈现明显Th2偏倚.结论 负载滋养层细胞抗原后的DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ表达降低,刺激T细胞增殖能力下降;其自分泌和促使T细胞旁分泌的细胞因子呈现Th2偏倚,是一种耐受性DC.  相似文献   

20.
人IgG有4个亚类,B细胞的不同IgG亚类的表达,可能反映B细胞分化的不同时期。有些抗原和致裂原可以影响IgC亚类的分布。作者应用对各种IgG亚类特异的单克隆抗体,进行免疫荧光染色,检查了人B细胞和浆细胞所表达的IgG亚类。也检查了经多克隆B细胞激活剂脂多糖(LPS)和商陆致裂原(PWM)诱导的浆细胞所表达的IgG亚类。作者观察到,正常血的B细胞中,主要的IgG亚类为IgG_2,亚类的分布为IgC_2(48  相似文献   

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