甲状腺激素对慢性脑缺血大鼠海马细胞的保护作用和机制

目的明确甲状腺激素能否减少慢性脑缺血大鼠海马的细胞凋亡,及其作用是否通过上调Bcl-2的表达实现。方法将50
只成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、双侧颈总动脉永久性结扎术（2VO）组与缺血后T3干预组,分别于术后7 d与14 d处死,
对脑组织切片行Nissl染色观察海马CA1区的组织结构,TUNEL染色计算凋亡指数,Western Blotting检测Bcl-2的表达情况。
结果Nissl染色可观察到缺血后海马CA1区的细胞排列杂乱和神经元数量减少,三碘甲腺原氨酸（T3）干预组较之结构完整性
强,神经元数量多。缺血7 d三组齿状回的细胞凋亡指数从高到低依次为2VO组（20.868±2.090）、T3组（20.365±1.055）及假手
术组（17.714±2.553）,但差异无统计学意义（P=0.060）;此时海马Bcl-2的表达量从高到低依次为T3组、2VO组及假手术组。缺
血14 d齿状回的细胞凋亡指数以2VO组最高（66.532±3.249,P<0.001）,T3组明显降低（56.153±4.556,P=0.001）;此时Bcl-2的
表达量以T3组最多,2VO组最低。结论甲状腺激素可以减少缺血海马的细胞凋亡,其作用可能与上调海马Bcl-2的表达有关。
     

同种异体骨髓单个核细胞移植对急性心肌梗死后大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响

目的:探讨大鼠同种异体骨髓单个核细胞(bone marrow mononuclear cells,BM-MNCs)急性心肌梗死区内移植对大鼠心肌细胞凋亡及相关基因表达的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠24只,用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型后,分别将制备的培养基(对照组)和BM-MNCs悬液(移植组)由心外膜下植入梗死心肌周围.移植术后4周,超声心动图评价左室形态及功能,采用TUNEL法检测心肌细胞凋亡,免疫组化法检测心肌细胞中Bcl-2、Fas、FasL蛋白的表达水平,同时观察梗死区心肌内移植BM-MNCs及其周边区组织形态学特点.结果:移植术后4周,移植组左室收缩末期内径和左室舒张末期内径明显低于对照组(P＜0.01),左室射血分数、左室短轴缩短率明显高于对照组(P＜0.01).TUNEL结果显示:移植组心肌细胞凋亡指数(AI)明显低于对照组(P＜0.05).免疫组化结果显示:与对照组相比,移植组心肌细胞中Bcl-2蛋白平均光密度值显著升高(P＜0.05),Fas、FasL蛋白平均光密度值显著降低(P＜0.05),同时观察到移植组心肌梗死区内有BrdU标记阳性的BM-MNCs移植细胞存活.结论:同种异体BM-MNCs移植可以抑制心肌梗死后心肌细胞凋亡的发生,改善急性心肌梗死后的心脏功能,其机制可能与其调节Bcl-2、Fas、FasL的表达有关.     

骨髓单个核细胞对脑梗死小鼠神经元变性死亡的影响

目的研究骨髓单个核细胞（BMMNCs）对脑梗死小鼠神经元变性死亡的影响。方法将雄性昆明小鼠随机分为PBS治疗组和BMMCs治疗组。线栓法制作小鼠大脑中动脉栓塞（MCAO）模型;梯度离心法提取BMMNCs;酶联免疫吸附法（ELISA）评价常氧及低氧培养条件下BMMNCs分泌IL-10、VEGF和IGF-1的能力。脑梗死后6h经尾静脉注射BMMNCs或PBS,脑梗后1,4,7d采用神经功能损害评分表（mNSS）、免疫荧光法、Fluoro—JadeB（FJB）染色进行神经功能、小胶质细胞活性及神经元变性死亡数目的评估。脑梗死后7d,TTC染色评价脑梗死体积。结果（1）BMMNCs在常氧或低氧条件下培养24h后,低氧环境下BMMNCs分泌细胞因子（IL-10、VEGF和IGF-1）的能力明显强于常氧环境,差异有统计学意义（P〈0．05）;（2）与PBS治疗组相比,BMMNCs治疗组小鼠在脑梗死后第4,7天的mNSS评分、小胶质细胞的活性、神经元变性死亡数量均显著降低,差异有统计学意义（P〈0．05）;（3）BMMNCs治疗组小鼠脑梗死体积[（27．8±7．5）％]明显小于PBS治疗组[（37．1±6．9）％],差异有统计学意义0P〈0．05）。结论骨髓单个核细胞可通过分泌细胞因子IL-10、VEGF和IGF-1抑制小胶质细胞的活性,明显抑制脑梗死后神经元的变性死亡,减少脑梗死体积,促进神经功能恢复。     

骨髓单个核细胞移植治疗急性心肌梗死的研究进展

骨髓单个核细胞(BM-MNCs)是指骨髓中的细胞核为单个的细胞总称,是含有多种细胞成分的混合细胞群。目前的研究表明,移植的骨髓干细胞可以分化为心肌细胞,使心肌梗死瘢痕区血管和心肌再生,改善缺血心肌血供,改善心脏功能。本文就BM-MNCs在急性心肌梗死治疗方面的研究进展予以综述。     

脑缺血后细胞凋亡分子生物学机制的研究进展

<正>细胞死亡和其生长、分化、增殖一样,都是生命活动的正常组成部分。根据细胞死亡的模式不同,分为坏死(necrosis)细胞凋亡(apoptosis)两种类型。我们知道,多细胞生物的存活依赖于众多的分化良好的细胞类型。一旦发育完成,生物的存活依赖于维持和更新这些分化的不同类型的细胞。例如:血细胞持续地由造血干细胞不断更新。相反,神经细胞自我更新的能力非常有限,大多数神经元细胞的存活伴随着生物体的整个生命过程。在整个细胞系,细胞数目的控制是由细胞增生和细胞死亡这两个机制维持平衡的。这一生理机制若有障碍或异常,就有可能发生肿瘤,自身免疫性疾病和退行性病变等疾患。     

骨髓单个核细胞移植对急性心梗大鼠血流动力学的影响

目的:评价局部移植骨髓单个核细胞对急性心梗大鼠缺血心肌血管生成作用及血流动力学的影响.方法:将26只Lweis大鼠随机分为移植组(n=14)及对照组(n=12),结扎大鼠左冠状动脉,建立急性心肌梗死模型.将新分离的骨髓单个核细胞注射到大鼠的缺血心肌中(对照组大鼠注射等量无菌PBS),术后4周观察心肌血管数目,结合心脏血流动力学参数评价心功能的改善情况.结果:4周后移植组与对照组相比左心室舒张末期压力明显降低(P＜0.01),压力变化率最大值(dp/dt)明显升高(P＜0.01,P＜0.05).移植组心肌梗死区有明显血管增生,移植组和对照组心肌血管密度分别为(23.1±1.5)和(10.5±1.8)个/HPF,差异有显著性意义(P＜0.01).结论:局部移植骨髓单个核细胞能明显促进缺血心肌新生血管生成,增加缺血区灌注,并可在一定程度上改善其血流动力学指标.     

骨髓单个核细胞移植治疗2型糖尿病小鼠急性心肌梗死的研究

目的 研究骨髓单个核细胞(BMMNCs)对T2DM小鼠心肌梗死的疗效.方法 小鼠分为4组:正常小鼠注射盐水组(NS组),正常小鼠注射细胞组(NM组),糖尿病小鼠注射盐水组(TM组),糖尿病小鼠注射细胞组(TS组).取材后通过HE、Masson's、vWF、Isolectin、WGA免疫染色观察疗效.结果 正常组和糖尿病组细胞移植后VEGF表达水平相当,差异无统计学意义(P＞0.05);细胞组梗死面积较盐水组小,胶原面积较盐水组的少,血管密度较盐水组大,心肌细胞肥大较盐水组轻,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 骨髓单个核细胞对心肌损伤组织的修复、梗死边缘区细胞的肥大增生、血管新生方面有明显的改善作用.     

大鼠骨髓单个核细胞移植治疗心肌梗死

目的:探讨大鼠骨髓单个核细胞(mononuclear bone marrow cells,MBMCs)移植方法对梗死心肌的治疗效果.方法:无菌条件下取成年雄性近交系Wistar大鼠股骨和胫骨,常规抽取骨髓,分离制备MBMCs悬液.将成年雄性近交系Wistar大鼠46只随机分为空白对照组(组Ⅰ,n=10)、梗死对照组(组Ⅱ,n=18)、细胞移植组(组Ⅲ,n=18).用结扎冠状动脉左前降支的方法建立大鼠心肌梗死模型,在建模后2周分别将10μl MBMCs(6×106)悬液和等量磷酸盐缓冲液(PBS)植入组Ⅱ和组Ⅲ的梗死周边区.用心脏超声观察细胞移植后4周的心脏功能改变,用免疫荧光和免疫组化及电镜观察移植细胞在心肌梗死区及梗死周边区的存活、增殖和分化情况.结果:MBMCs移植4周后,移植组超声检查左室功能重建指标如左室射血分数(EF)、左室短轴缩短率(FS)、左室前壁厚度(LVAWT)均较梗死对照组改善明显(P＜0.05);移植组血流动力学检查指标如左室收缩压(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)和左室舒张压力时间变化最大速率(±dp/dtmax)也优于梗死对照组(P＜0.05).MBMCs移植6周后,大鼠心肌梗死区有移植细胞存活、增殖,并分化为有心肌细胞特征的细胞.结论:实验证实用MBMCs移植治疗心肌梗死,可以明显改善梗死后心脏功能.这一效果可能与MBMCs移植相关的心肌再生和新生血管形成有关.     

山楂叶总黄酮对大鼠脑缺血再灌注后细胞凋亡的保护作用

目的：探讨山楂叶总黄酮（FMCL）对脑缺血再灌注(CIR)损伤的保护作用及其可能机制。方法：将大鼠随机分为假手术组、模型组、阳性药组（舒血宁1.8 mg•kg^-1）及山楂叶总黄酮高、中、低（100 、30和10 mg•kg^-1）剂量组，采用线栓法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤模型；流式细胞仪检测神经细胞凋亡率；原位末端标记（TUNEL）法测定神经细胞凋亡；免疫组化染色观察凋亡相关蛋白Fas、细胞色素C(CytC)蛋白表达的变化。结果：与模型组比较，山楂叶总黄酮高剂量组TUNEL染色阳性细胞数明显减少（P<0.01），凋亡率明显下降（P<0.01）；与模型组比较，山楂叶总黄酮高和中剂量组CytC蛋白表达明显降低（P<0.05或P<0.01），Fas蛋白表达无明显变化。结论：山楂叶总黄酮可抑制脑缺血再灌注后神经细胞凋亡，其机制可能与抑制线粒体Cyt C通路的凋亡有关。     

骨髓基质细胞移植对缺血性脑损伤的修复作用及其机制的研究进展

1骨髓基质细胞的生物学特性 骨髓基质细胞（bone marrow stromal cells,BMSCs）是骨髓内造血干细胞以外的非造血干细胞,通常又称作间质干细胞（mesenchymal stem cell）、非造血干细胞（nonhematopoietic stemcell）或成纤维细胞集落形成单位（colony-forming-unit fibroblast）。最近几十年的研究发现BMsCs具有与其他干细胞一样的特性：具有自我更新的能力和多向分化潜能,处在不同的徽环境中能分化成多个细胞系,形成多种间充质细胞,包括成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、成肌细胞、纤维细胞、内皮细胞等,特别是能够横向分化（transdifferentiation）为神经细胞和胶质细胞。     

Autologous transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells on diabetic patients with lower limb ischemia

Objective： To study the efficacy and safety of autologous transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells on diabetic patients with lower limb ischemia. Methods： Fifty Type 2 diabetic patients with lower limb ischemia were enrolled and randomized to either transplanted group or control group. Patients in both group received the same conventional treatment. Meanwhile, 20 ml bone marrow from each transplanted patient were collected, and the mesenchymal stem cells were separated by density gradient centrifugation and cultured in the medium with autologous serum. After three-weeks adherent culture in vitro, 7.32×10^8-5.61×10^9 mesenchymal stem cells were harvested and transplanted by multiple intramuscular and hypodermic injections into the impaired lower limbs. Results： At the end of 12-week follow-up, 5 patients were excluded from this study because of clinical worsening or failure of cell culture. Main ischemic symptoms, including rest pain and intermittent claudication, were improved significantly in transplanted patients. The ulcer healing rate of the transplanted group （1 5 of 18, 83.33%） was significantly higher than that of the control group （9 of 20, 45.00%, P=0.012）.The mean of resting ankle-brachial index （ABI） in transplanted group significantly was increased from 0.61±0.09 to 0.74±0.11 （P〈0.001）. Magnetic resonance angiography （MRA） demonstrated that there were more patients whose score of new vessels exceeded or equaled to 2 in the transplant patients （11 of 15） than in control patients （2 of 14, P=0.001）. Lower limb amputation rate was significantly lower in transplanted group than in the control group （P=0.040）. No adverse effects was observed in transplanted group. Conclusion： These results indicate that the autologous transplantation of bone marrow mesenchymal stem cells relieves critical lower limb ischemia and promotes ulcers healing in Type 2 diabetic patients.     

人骨髓间充质干细胞定向移植对局灶性脑缺血大鼠行为学的影响

目的：探讨人骨髓间充质干细胞(MSCs)对局灶性脑缺血大鼠神经功能的影响。方法：采用密度梯度分离法、贴壁筛选法体外培养、扩增人MSCs，并用流式细胞术鉴定其免疫学表型；健康Wistar大鼠50只随机均分为正常对照组(A组)、假手术组(B组)、脑缺血/再灌注后无处理组(C组)、脑缺血/再灌注后移植无血清DMEM组(D组)、脑缺血/再灌注后移植人MSCs组(E组)，每组10只。D、E两组脑缺血周边区(右侧)分别移植无血清培养基5 μL和5-溴-2-脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)标记MSCs (4×10⁵• μL^-1) 5 μL；采用免疫组化技术检测BrdU 标记的人MSCs在局灶性脑缺血大鼠体内存活情况；采用前肢不对称 应用试验及姿势反射试验，观察各组大鼠术后1、3、7及28 d行为学变化。结果：成功地分离并纯化人MSCs；流式细胞术检测P3 MSCs结果显示，CD44、CD29均呈阳性表达，CD34、CD45、CD31均呈阴性表达；移植的人MSCs在局灶性脑缺血大鼠缺血周边区聚集并存活。各组大鼠行为学评分随着细胞移植后时间延长均逐渐降低，移植人MSCs组大鼠行为学评分较其他组显著降低 (P<0.05)，该组大鼠移植人MSCs后7 d时行为学评分低于同组内其他时间点(P<0.01)。结论：局灶性脑缺血周边注射人MSCs显著地改善大鼠脑缺血症状，前肢不对称应用试验可更客观地评价大鼠长时间运动功能变化。     

用骨髓间充质干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的研究进展

 干细胞是一类具有自我复制和多向分化潜能的细胞。近年来干细胞移植成为治疗性血管生成的研究热点,它能够促进缺血下肢的新血管生成,适用于内科疗效不佳、下肢远端动脉流出道差而无法进行下肢搭桥的患者及年老体弱或伴发其他疾病不能接受手术的患者。这种方法临床操作简单,虽然存在移植安全性、远期治疗效果、提高临床疗效等问题,但其较传统的治疗方法有着无可比拟的优越性,且发展空间广阔。本文综述干细胞移植治疗下肢缺血性疾病的有关进展。     

自体骨髓干细胞移植治疗下肢动脉缺血性疾病

目的了解自体骨髓干细胞移植治疗下肢动脉缺血性疾病的疗效.方法下肢动脉缺血性疾病病人45例共50条患肢,分为自体骨髓干细胞移植组和常规非手术治疗对照组,随访比较其疗效差异.结果随访满1年的自体骨髓干细胞移植组病人和对照组总体症状改善率分别为73.9%和33.3%,经比较有显著差异（P〈0.05）.结论自体骨髓干细胞移植是一种安全有效的治疗下肢动脉缺血性疾病的方法.     

低氧对人骨髓间充质干细胞增殖的影响

目的 探讨二氯化钴(CoCl2)诱导的化学性低氧对人骨髓间充质干细胞(hBMSC)增殖的影响.方法 采用密度梯度离心法分离、培养hBMSC;用流式细胞仪检测其表面标志物;用CoCl2建立化学性缺氧模型,分别采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法和流式细胞仪检测hBMSC在不同CoCl2浓度(0、100、150、300 μmol/L)和不同时间(0,12 h及1、2、4、6、7 d)的增殖情况,0 μmol/L CoCl2组为常氧组,后3个浓度组为低氧组.结果 化学缺氧12 h内,hBMSC增殖被抑制;1、2、4 d时各低氧组细胞增殖均高于常氧组,但300 μmol/L CoCl2组与常氧组比差异无统计学意义(P＞0.05);而100μmol/L CoCl2组(0.139±0.003、0.178±0.005、0.224±0.005)和150 μmol/L CoCl2组(0.202±0.020、0.224±0.019、0.263±0.004)增殖明显高于常氧组(0.134±0.005、0.167±0.004、0.206±0.005),其中150μmol/L CoCl2组1 d时增殖最显著(均P＜0.05).6 d时100、150 μmol/LCoCl2组细胞增殖(0.258±0.020、0.264±0.008)仍高于常氧组(0.248±0.004),但优势逐渐减弱(P＜0.05).7 d时这种低氧促增殖的效应消失.结论 CoCl2诱导的化学性缺氧可以促进hBMSC增殖.     

骨髓间充质干细胞治疗大鼠缺血性脑卒中的实验研究

目的研究骨髓间充质干细胞（BMSC）对大鼠缺血性脑卒中的治疗作用及治疗机制。方法采集人志愿者骨髓,密度梯度离心法分离、培养BMSC;建立大脑中动脉栓塞缺血2h再灌注大鼠模型,根据神经损伤评分将符合标准的60只脑缺血模型大鼠随机分为治疗组（BMSC移植组,48只）和对照组（D-Hanks液注射组,12只）,24h后在脑缺血边缘区皮层分别注射hBMSC悬液和D-Hanks液;移植后第4天开始进行粘贴物移除实验、转棒实验及Morris水迷宫实验的循环测试至第32天;治疗组分别在移植后1、2、3及4周分批次处死大鼠,通过免疫荧光技术动态追踪BMSC并检测细胞的迁移和分化。结果移植后第1、2周细胞大量存活并向病灶迁移,第3周细胞存活数量明显减少,第4周存活细胞极少;hBMSC在大鼠脑内没有明确表达微管相关蛋白（MAP）2、胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和半乳糖脑苷脂（Galc）等神经细胞的特异蛋白。治疗后1周水迷宫平均逃逸时间,治疗组为（69±10）8,对照组为（120±0）s,P〈0．05,至第4周两组差异无统计学意义（P〉0．05）。治疗后第10天转棒实验（10r／min）平均潜伏期,治疗组为（167±18）s,对照组为（37±19）s,P〈0．05,至实验终期差异仍有统计学意义。治疗后第13天粘贴物移除实验平均潜伏期,治疗组为（33±8）s,对照组为（84±13）s,P〈0．05,至实验终期差异仍有统计学意义。结论BMSC脑内移植可以显著改善脑缺血大鼠神经功能的恢复;移植细胞在大鼠脑内可以向病灶周围迁移,但是细胞存活有一定时限性;BMSC在大鼠脑内没有明确分化为经细胞。     

骨髓间质干细胞移植后大鼠缺血心肌的超微结构观察

目的 观察骨髓间质干细胞(MSCs)移植后大鼠缺血心肌组织的超微结构改变。方法 体外培养、纯化SD大鼠的骨髓MSCs,4’6-二脒-2-苯基吲哚(DAPI)标记,经尾静脉注射移植治疗大鼠急性心肌缺血,移植后1周和8周荧光显微镜下检测心肌组织中DAPI阳性细胞,透射电镜观察心肌组织的超微结构改变。结果 MSCs经传代培养至第3代后,均一性好。细胞移植后1周和8周,移植组的心肌组织中可见呈蓝色细胞核的DAPI阳性细胞,而对照组未发现阳性细胞。移植后1周,心肌组织的超微结构观察发现移植组的心肌梗死周边区域可见少量细胞,其形态类似于体外培养的骨髓MSCs;移植后8周,移植组梗死周边可见大量的毛细血管,其内皮细胞细胞“芽生”分割管腔开始形成新的血管,还可见少量“不成熟”的心肌细胞。结论 骨髓MSCs通过血液循环可向缺血心肌组织归巢并促进血管和心肌组织的再生。     

骨髓间质干细胞移植后大鼠缺血心肌的超微结构观察

目的观察骨髓间质干细胞（MSCs）移植后大鼠缺血心肌组织的超微结构改变。方法体外培养、纯化SD大鼠的骨髓MSCs，4’6-二脒-2-苯基吲哚（DAPI）标记，经尾静脉注射移植治疗大鼠急性心肌缺血，移植后1周和8周荧光显微镜下检测心肌组织中DAPI阳性细胞，透射电镜观察心肌组织的超微结构改变。结果MSCs经传代培养至第3代后，均一性好．细胞移植后1周和8周，移植组的心肌组织中可见呈蓝色细胞核的DAPI阳性细胞．而对照组未发现阳性细胞．移植后1周，心肌组织的超微结构观察发现移植组的心肌梗死周边区域可见少量细胞．其形态类似于体外培养的骨髓MSCs；移植后8周，移植组梗死周边可见大量的毛细血管，其内皮细胞细胞“芽生”分割管腔开始形成新的血管，还可见少量“不成熟”的心肌细胞。结论骨髓MSCs通过血液循环可向缺血心肌组织归巢并促进血管和心肌组织的再生。     

神经干细胞治疗缺血性脑卒中的进展

神经干细胞是一类具有自我复制更新能力、高度增殖潜能和多向分化潜能的细胞,通过外源性或内源性途径的神经干细胞疗法为缺血性脑卒中的治疗提供了一种新的途径。该文就神经干细胞及其治疗缺血性脑卒中的研究进展进行综述。     

Transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells for patients with lower limb ischemia

Background Many treatment options for lower limb ischemia are difficult to apply for the patients with poor arterial outflow or with poor general conditions. The effect of medical treatment alone is far from ideal, especially in patients with diabetic foot. A high level amputation is inevitable in these patients. This study aimed to explore the effect of transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells on the treatment of lower limb ischemia and to compare the effect of intra-arterial transplantation with that of intra-muscular transplantation.
Methods In this clinical trial, 32 patients with lower limb ischemia were divided into two groups. Group 1 （16 patients with 18 affected limbs） received transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells by intra-muscular injection into the affected limbs; and group 2 （16 patients with 17 affected limbs） received transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells by intra-arterial injection into the affected limbs. Rest pain, coldness, ankle/brachial index （ABI）, claudication, transcutaneous oxygen pressure （tcPO2） and angiography （15 limbs of 14 patients） were evaluated before and after the mononuclear cell transplantation to determine the effect of the treatment.
Results Two patients died from heart failure. The improvement of rest pain was seen in 76.5% （13/17） of group 1 and 93.3% （14/15） of group 2. The improvement of coldness was 100% in both groups. The increase of ABI was 44.4% （8/18） in group 1 and 41.2% （7/17） in group 2. The value of tcPO2 increased to 20 mmHg or more in 20 limbs. Nine of 15 limbs which underwent angiography showed rich collaterals. Limb salvage rate was 83.3% （15/18） in group 1 and 94.1% （16/17） in group 2. There was no statistically significant difference in the effectiveness of the treatment between the two groups.
Conclusions Transplantation of autologous bone marrow mononuclear cells is a simple, safe and effective method for the treatment of lower limb ischemia,