冷冻对小鼠2-4细胞胚胎细胞骨架结构的影响

目的探讨胚胎冷冻技术对小鼠2-4细胞胚胎细胞骨架结构的影响。方法用抗骨架蛋白actin的单克隆抗体进行免疫染色,激光共聚焦显微镜观察经过慢速冷冻小鼠2-细胞、4-细胞胚胎的细胞骨架结构的状况。结果以丙二醇为冷冻保护剂,采用慢速冷冻-快速解冻的方式冷冻小鼠2-细胞、4-细胞胚胎对胚胎细胞骨架结构的分布特点没有明显影响,荧光强度定量分析表明冷冻胚胎荧光强度与未冷冻胚胎的荧光强度相比,差异无统计学意义(P0.05)。结论冷冻对小鼠2-细胞和4-细胞胚胎的细胞骨架结构没有明显影响。     

Hemi-straw玻璃化与程序化冷冻小鼠不同发育阶段胚胎的效果

目的:探讨半细管(Hem i-straw)玻璃化方法与程序化方法冷冻不同发育阶段小鼠胚胎的效果。方法:采用慢速程序化方法与玻璃化方法冷冻小鼠原核期胚胎、卵裂期及早期囊胚期胚胎。解冻后观察存活率、囊胚形成率。结果:采用玻璃化方法冷冻小鼠卵裂期与早期囊胚期胚胎的存活率为92.7%与95.5%,显著高于玻璃化冷冻原核期胚胎的存活率79.8%与程序化冷冻的各组(均P<0.01)。程序化冷冻早期囊胚的存活率仅为50.2%,显著低于其他组(均P<0.01)。经培养后囊胚的形成率比较,程序化冷冻组内无显著性差异(P>0.05),但均显著低于玻璃化冷冻组(均P<0.01)。玻璃化冷冻卵裂期与早期囊胚组的囊胚形成率高达90.1%与92.2%,显著高于原核期胚胎玻璃化冷冻组69.5%(均P<0.01)。结论:胚胎行冷冻保存时,玻璃化冷冻效果较程序化冷冻好,且选择早期囊胚可获最佳冷冻效果。     

影响胚胎冻融的临床因素和妊娠结局分析

目的:探讨新鲜周期中有无剩余胚胎冷冻的相关因素和胚胎冻融移植周期影响妊娠的临床因素,比较冷冻周期和新鲜周期出生婴儿状况。方法:回顾性分析2003年1月～2005年12月在南京鼓楼医院生殖医学中心行IVF/ICSI的妇女,根据取卵后有无冷冻胚胎分为有冷冻胚胎组(A组)和无冷冻胚胎组(B组);新鲜周期失败的妇女根据胚胎解冻移植后妊娠与否分为妊娠组(a组)和未妊娠组(b组)。结果:共1593个新鲜周期和817个冷冻周期纳入研究,结果发现:①A组较B组患者年轻(29.91岁vs31.97岁),平均获卵数多(14.23vs9.03);②胚胎冻融结局主要与患者年龄相关,与血清E2水平、子宫内膜厚度和胚胎受精方式无显著相关性;③冷冻周期与新鲜周期出生婴儿状况相比无显著差异。结论:年轻和获卵数较多的患者,有冷冻胚胎的可能性较大;胚胎冻融结局主要与患者年龄相关,与血清E2水平、子宫内膜厚度和胚胎受精方式无显著相关性;冷冻周期出生婴儿状况与新鲜周期相比无显著差异。     

人类冻融胚胎应用的探讨

目的：探讨冷冻胚胎的临床应用，提高试管婴儿成功率。方法：取IVF与ICSI剩余胚胎，采用慢速冷冻法冻存，快速解冻后用于临床，探讨其效果。结果：从1998年起实施31例胚胎冷冻，复苏后胚胎存活率达71．0％，妊娠率达22．2％。结论：采用冻融胚胎技术可以提高一次取卵的总妊娠率。     

冷冻胚胎经序贯共培养用于建立人胚胎干细胞系

目的:利用长期冷冻人卵裂期胚胎经序贯共培养形成的囊胚建立人类胚胎干细胞系。方法:将冷冻≥10年的卵裂期胚胎复苏后,采用单层卵丘细胞序贯共培养至囊胚期,经辅助孵出,置鼠胚胎成纤维细胞(MEF)饲养层全胚培养,原代培养6d后加入20%MEF条件培养基培养至形成原代克隆。观察人胚胎干细胞集落的生长状态并通过碱性磷酸酶染色、Oct-4基因表达、核型分析及体外分化实验等方法进行生物学鉴定。结果:9枚冷冻卵裂期胚胎经序贯共培养,有6枚发育到囊胚期,最终获得1株胚胎干细胞系。经鉴定该细胞系具有碱性磷酸酶活性、表达Oct-4胚胎干细胞特异标记、形成拟胚体、在体外形成具有自动节律性的心肌细胞、并具有46,XY核型等5种特性。结论:冷冻胚胎经序贯共培养能够改善胚胎发育潜能,有助于建立人胚胎干细胞系。     

Cryoloop和CPS超速玻璃化冷冻人三原核胚胎效果比较

目的:比较冷冻环(Cryoloop)和闭合型拉细麦管(CPS)超速玻璃化冷冻方法冻存人早期卵裂期胚胎的效果差异,以期建立1种有效的超速玻璃化冷冻方法。方法:将人三原核孕卵发育形成的126个6-10细胞胚胎随机分为3组:对照组30个、Cryoloop组36个和CPS组60个。通过形态学观察,比较胚胎复苏后存活率;经罗丹明123染色,激光扫描共聚焦显微镜摄片分析,测定复苏后存活胚胎线粒体跨膜电位(△Ψm)。结果:Cryoloop组复苏后胚胎存活率达100%,显著高于CPS组(P<0.05);Cryoloop组△Ψm显著高于CPS组(P<0.05),而与未冷冻对照组相比,无明显差异(P>0.05)。结论:Cryoloop超速玻璃化冷冻法获得了更高的胚胎存活率和胚胎活力,该方法更适于冷冻人早期卵裂期胚胎。     

高海拔地区新鲜与冷冻胚胎移植妊娠结局随访结果分析

目的了解在高海拔地区新鲜胚胎与冷冻胚胎移植患者的妊娠结局及新生儿状况是否存在差异性。方法通过对多胎率、分娩方式、流产率、异位妊娠率、新生儿性别比、体重以及出生缺陷等指标的进行整理、统计和对比分析,观察高海拔地区新鲜与冷冻胚胎移植患者妊娠结局之间是否存在差异。结果高海拔地区新鲜胚胎与冷冻胚胎移植患者临床妊娠后多胎率、剖宫产率、流产率、异位妊娠率、新生儿性别比、体重及出生缺陷率等差异均无统计学意义(P0.05)。结论初步认为在高海拔地区新鲜胚胎和冷冻胚胎移植妊娠结局和新生儿状况之间无差异,但仍需扩大样本量等进一步观察分析研究。     

全部胚胎冷冻患者取卵后卵巢恢复情况及妊娠结局的相关因素分析

目的:探究在行体外受精助孕技术中行全部胚胎冷冻的患者取卵后卵巢恢复时间及不同时间间隔后行冻融胚胎移植的妊娠结局。方法:采用前瞻性队列研究,随访了2017年7月至12月期间于山东大学附属生殖医院行辅助生殖助孕技术助孕、行全部胚胎冷冻的53例患者,比较取卵后第1次月经周期第2~4日血雌二醇的水平,对比患者取卵后第2次月经周...     

胚胎卵裂球数及取卵后2天和3天冷冻对冻融胚胎移植临床结局的影响

目的：探讨胚胎卵裂球数及取卵后2天（D2）和3天（D3）冷冻对胚胎的复苏效果以及冻融胚胎移植（FET）临床结局的影响。方法：回顾性分析2010年1月—2012年5月行FET的417个周期的临床资料,分别按胚胎冷冻的时间（D2/D3）、卵裂球数、移植优质胚胎数进行分组,比较各组的胚胎复苏效果及临床结局。结果：D2≥4-细胞组的胚胎复苏率和卵裂球全存活率显著高于D2＜4-细胞组（89.35% vs. 79.11%,42.01% vs. 30.22%,P＜0.05）;D3≥6-细胞组的胚胎复苏率和卵裂球全存活率显著高于D3＜6-细胞组（86.52% vs. 72.43%,41.13% vs. 31.07%,P＜0.01）。D2组冷冻胚胎复苏后的优质胚胎率（56.84%）高于D3组（48.82%）,但D3组FET临床妊娠率（38.52%）高于D2组（27.61%）,差异均有统计学意义（P＜0.05）,2组间胚胎复苏率和流产率差异无统计学意义（83.50% vs. 79.44%,10.81% vs. 10.09%,P＞0.05）。随着移植优质胚胎数的增加,临床妊娠率和多胎率增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：D2≥4-细胞和D3≥6-细胞的胚胎冻融效果较好,D3冷冻胚胎的FET临床结局优于D2冷冻胚胎。     

不同胚胎冷冻方法对冻融胚胎移植患者临床结局的影响

目的:比较人卵裂期胚胎玻璃化冷冻和慢速冷冻解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率,评价两种方法的有效性。方法:选择2009年7月～2010年3月在辅助生殖中心行F-ET的89例患者,将其分为玻璃化冷冻组(46例)和慢速冷冻组(43例),比较解冻后胚胎复苏率、卵裂球完整率、种植率以及临床妊娠率。结果:玻璃化冷冻组与慢速冷冻组比较具有较高的胚胎复苏率(92.7%vs.66.1%)、卵裂球完整率(89.2%vs.61.4%)、种植率(21.1%vs.4.7%)以及临床妊娠率(47.8%vs.23.3%)。结论:玻璃化冷冻法解冻后胚胎复苏率高,卵裂球完整性好,胚胎具有更好地发育潜能,是人卵裂期胚胎冷冻的有效方法。     

体外受精-胚胎移植中非优质胚胎移植价值的评价

目的通过分析新鲜移植周期与冷冻移植周期中非优质胚胎移植的相关数据,探讨非优质胚胎移植的价值。方法收集2013年1月-2014年1月在该院接受并完成第一周期长方案体外受精-胚胎移植(IVF-ET)治疗的318个新鲜胚胎移植周期及2012年1月-2014年1月行冻融胚胎移植的667个周期不孕症患者的临床资料。比较新鲜移植周期与冷冻移植周期临床妊娠率、胚胎种、植率、生化妊娠率、早期流产率、多胎率、宫外孕率及抱婴率等指标的差异。结果新鲜胚胎移植周期中,优质胚胎组临床妊娠率高于非优质胚胎组。非优质胚胎组临床妊娠率随着胚胎移植数目的增加而增加,移植3个胚胎时,其临床妊娠率接近优质胚胎组(分别为43.6%和44.0%)(P0.05)。冻融胚胎移植中,冷冻前后均为优质胚胎组的临床妊娠率高于非优质胚胎组。未受损的非优质胚胎的临床妊娠率随胚胎移植数目的增加而增加。胚胎冻融后发生部分冷冻受损的胚胎临床妊娠率最低,增加冷冻损伤胚胎的移植数目并不能提高临床妊娠率。结论在新鲜胚胎移植周期中,当无优质胚胎时,移植非优质胚胎成功率也较高,不应放弃。非优质胚胎冻融复苏后,应选择卵裂球完好的胚胎移植,放弃有破损的胚胎。     

玻璃化冷冻胚胎解冻后卵裂球损伤与增殖对移植影响

目的冻融胚胎移植是人类辅助生殖技术发展期间较为重要的组成部分之一,而玻璃化冷冻技术是其中最为有效的方法,具有安全、可靠和易操作等特性,是目前胚囊及卵裂期胚胎的首选冷冻手段。为提高冻融胚胎移植成功率,本研究分析玻璃化冷冻胚胎解冻后卵裂球损伤与增殖对移植结局影响。方法收集2016-01-20-2019-01-20焦作市妇幼保健院生殖中心玻璃化冷冻胚胎解冻1 700个,按照复苏后卵裂球损伤情况的不同分为两组,存在损伤情况的作为观察组(1 401个),无损伤情况的作为对照组(299个),对各组移植后的临床妊娠率和移植率进行对比分析。结果观察组移植成功率为49.18%,低于对照组的59.53%,差异有统计学意义,χ2=10.568,P=0.001;妊娠率为57.18%,低于对照组的67.98%,差异有统计学意义,χ2=5.823,P=0.016。1 401个复苏后卵裂球中,有胚胎卵裂球生长占比最高,为48.11%;无胚胎卵裂球生长占比最低,为6.00%;有胚胎卵裂球融合占21.48%;无胚胎卵裂球融合占24.41%。结论玻璃化冷冻胚胎解冻后,其妊娠率和移植率会受到卵裂球损伤影响。     

影响人类胚胎冷冻保存结果的因素

自第一次人类胚胎冷冻成功并获妊娠至今已有十多年的历史,探求人类胚胎冷冻保存的影响因素一直是该领域的重要课题之一。影响人类胚胎冷冻保存结果的因素众多,主要有胚胎的质量和分裂阶段、母体年龄及移植时机以及冷冻保护剂和冷冻融解程序等几方面,其中,尤以胚胎质量及母体年龄起重要作用。在多种冷冻方法中,现较多采用慢速冷冻、快速融解方法,但其它方法也有其优势;蔗糖等非渗透性保护剂和渗透性保护剂联合使用常取得较好效果。胚胎质量、分裂阶段、移植数目等也影响最终结果,随着其它技术如胞浆内单精子注射(ICSI)、辅助孵化的不断成熟,进一步提高了冷冻融解胚胎的妊娠率和植入率。母体年龄及选择最佳的胚胎移植时机是决定冷冻胚胎能否发生妊娠的最后关键因素。     

胚胎培养液中sHLA-G的表达及其对IVF-ET妊娠结局的影响

目的:探讨胚胎培养液中可溶性白细胞抗原-G(soluble leukocyte antigen-G,sHLA-G)的表达与早期胚胎发育的关系及其对IVF-ET妊娠结局的影响。方法:留取第3天移植及冷冻后的胚胎培养液,采用ELISA检测sHLA-G的表达水平。结果:1Ⅰ级胚胎与Ⅱ级胚胎培养液中sHLA-G表达水平相比较,差异无统计学意义(P>0.05),Ⅰ级和Ⅱ级胚胎培养液中sHLA-G表达水平均明显高于Ⅲ、Ⅳ级胚胎(P<0.05)。2双原核不同细胞数≤4细胞、5~6细胞、7~9细胞对应胚胎培养液中sHLA-G表达水平有增高趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。3妊娠组胚胎培养液中sHLA-G的表达水平显著高于非妊娠组(P<0.05)。结论:胚胎培养液中sHLA-G的表达水平可作为预测胚胎质量及妊娠结局的参考指标之一。     

玻璃化冷冻人类早期胚胎的研究进展

人类胚胎已经成功冷冻保存并在辅助生殖技术（ART）中起重要作用，目前多采用慢速冷冻-快速复温方法冷冻保存人早期胚胎，并取得较高的胚胎存活率，但此法需要昂贵的仪器、耗时，并且对于囊胚冷冻效果差。近年发展的玻璃化冷冻因其简单、快速、不需要昂贵仪器等优点越来越受到重视。就玻璃化冷冻在人类早期胚胎冷冻保存中的应用及其影响因素作一综述。     

影响冷冻胚胎移植结果的相关因素分析

目的探讨影响冷冻胚胎移植结果的相关因素。方法回顾性分析2004年1月-2006年5月在本生殖中心进行的96个冷冻胚胎移植周期中患者年龄、受精方式、胚龄及冻胚移植周期的方案、子宫内膜厚度及移植胚胎个数对冷冻胚胎移植结果的影响。结果96个冻胚移植周期中,解冻胚胎总数344个,复苏后成活298个(86.63%),获得临床妊娠29例(30.21%),胚胎种植率16.13%。患者年龄、受精方式、胚龄、冻胚移植周期的方案及移植胚胎个数均对冷冻胚胎移植后妊娠率、种植率没有明显影响。子宫内膜厚度对冷冻胚胎移植后妊娠率、种植率的影响比较明显。结论在诸多因素中,子宫内膜厚度对冻胚移植结果的影响较显著。     

人类胚胎冻融技术及其影响因素

为探讨冻融胚胎的方法,提高试管婴儿妊娠成功率,我们对人体外受精(IVF)及卵浆内单精子显微注射(ICSI)后的348个早期胚胎加保护剂(丙二醇、蔗糖),采用Testart慢速冷冻方法保存。将其中79个胚胎用快速融解法解冻,有57个胚胎存活,存活率72.16％。57个胚胎分别给13例患者移植,结果5例生化妊娠,其中4例发展为临床妊娠,1例已出生健康婴儿。结论:采用冻融胚胎技术可以提高一次取卵的总妊娠率。     

长方案全胚胎冷冻保存后首次冻融胚胎移植时机研究

目的探讨体外受精-胚胎移植(IVF-ET)患者采用长方案行超排卵后全胚冷冻,首次冻融胚胎移植时机。方法选择青海省人民医院生殖中心171例IVF-ET患者,均采用促性腺激素释放激素激动剂长方案行控制性超排卵,取卵后行全胚冷冻,根据胚胎冷冻日到冻融胚胎移植日的间隔时间分为两组,分别为间隔短(≤69 d)组80例,间隔长(>69 d)组91例,比较两组患者获卵率、受精率、卵裂率、获胚胎数、优胚率、ET优胚胎率、临床妊娠率。结果两组患者年龄、基础内分泌、不孕原因、不孕年限、BMI、子宫内膜准备方案、胚胎种类及获卵数均无明显差异。间隔短(≤69 d)组患者HCG日雌二醇(E2)水平低于间隔长(>69 d)组患者,差异有统计学意义。间隔短(≤69 d)组患者卵裂率、优胚数、临床妊娠率均高于间隔长(>69 d)组,差异有统计学意义。结论促性腺激素释放激素激动剂长方案患者,首次行经后即可复诊行冻融胚胎移植准备。     

胚胎玻璃化冷冻研究进展

玻璃化冷冻胚胎具有简便、迅速、经济、避免冰晶形成等优点,受到越来越广泛的关注。大量实验研究及初步临床应用结果表明,应用玻璃化冷冻技术能够保存多个种属不同发育阶段的胚胎。但是,目前玻璃化冷冻胚胎尚不成熟,应用合理的玻璃化冷冻溶液以及提高玻璃化冷冻速率等均是影响玻璃化冷冻胚胎的重要因素。     

影响冻融胚胎移植结果的因素分析

目的　探讨辅助生育技术中,影响冻融胚胎移植的妊娠率、种植率的相关因素。方法　回顾性分析10 7个冻融胚胎移植周期。结果　10 7个周期的胚胎复苏率为5 7.2 % (2 71 4 74 ) ,临床妊娠率为2 7.1% (2 9 10 7) ,种植率为15 .1% (39 2 5 9)。比较自然周期或激素治疗周期两种移植方案,比较常规体外受精 胚胎移植组和卵胞内单精子注入组来源的两组胚胎,比较冷冻时期为受精后第二天或第三天两组胚胎的妊娠率、种植率,均无显著性差异(P >0 .0 5 ) ,比较年龄<30岁、30～34岁、35～4 2岁3组的临床妊娠率和种植率,以30～34岁组为最高,35～4 2岁组明显下降,但3个年龄组均无显著性差异。妊娠组的完整胚胎存活率及移植胚胎数目明显高于非妊娠组(P <0 .0 5 )。妊娠组部分子宫内膜为非均质型。结论　冻融胚胎形态良好,有足够的移植胚胎数目是保证冷冻胚胎移植成功的重要因素,非均质型子宫内膜也可行胚胎移植。