人参皂苷Rg2抗拟缺血再灌注损伤大鼠海马神经细胞β_(1-40)淀粉样蛋白聚集研究

目的探讨人参皂苷Rg2对缺血再灌注损伤大鼠神经元细胞的干预机制。方法体外培养的大鼠海马神经元细胞,建立拟缺血再灌注损伤模型。分为模型组,对照组,低、中、高浓度组(人参皂苷Rg2 40、80、160μmol/L),MTT法测定神经元线粒体活性;免疫细胞化学法检测神经元细胞淀粉样蛋白前体(APP)和β淀粉样蛋白(Aβ1-40)表达。结果与对照组比较,模型组海马神经元线粒体活性降低,APP和Aβ1-40表达明显升高(P<0.05)。与模型组比较,低、中、高浓度组海马神经元线粒体活性明显增强,APP和Aβ1-40表达明显降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg2可能通过减少损伤海马神经元后升高的APP和Aβ1-40的表达;提高细胞活性,从而发挥其保护作用。     

人参皂苷Rg2对Alzheimer病模型大鼠学习记忆能力和老年斑形成的影响

目的 探讨人参皂苷Rg2对Aβ_(25-35)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠模型的学习记忆能力及老年斑(SP)形成的影响.方法 大鼠腹腔注射人参皂苷Rg2预防给药,大鼠双侧海马内注射Aβ_(25-35)建立AD模型,采用Morris水迷宫和被动回避性跳台反射实验检测各组大鼠的学习记忆能力;Bielschowsky 银染色改良法检测各组大鼠SP的表达.结果 模型组和溶媒组大鼠学习记忆能力较正常对照组明显下降,人参皂苷Rg2各剂量预防给药组大鼠的学习记忆能力较模型组有所增强;模型组、溶媒组和低剂量组大鼠大脑皮质中有SP形成,呈均匀致密的嗜银团,其余各组均未观察到SP.结论 人参皂苷Rg2对AD大鼠的学习记忆能力有一定的保护作用,并能防止SP的形成.     

人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病大鼠海马细胞周期依赖性蛋白激酶和p-tau的影响

目的研究人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)5和磷酸化(p)-tau(Ser404)的影响,探讨其对AD大鼠的保护作用机制。方法清洁级SD大鼠60只,随机分为青年组、模型组、人参皂苷Rg1小剂量组、人参皂苷Rg1大剂量组,每组15只。采用D-半乳糖联合Aβ1⁴0海马内注射制作AD大鼠模型,免疫组化(SABC)法和免疫蛋白印迹法检测CDK5蛋白和p-tau(Ser404)蛋白的表达水平。结果与青年组比较,模型组海马组织CDK5蛋白和p-tau(Ser404)蛋白表达均明显增加(P<0.05);与模型组比较,人参皂苷Rg1小剂量组和大剂量组CDK5蛋白和p-tau(Ser404)蛋白表达显著减少(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1通过抑制CDK5蛋白过度激活和降低其活性来减少tau蛋白过度磷酸化的途径防治AD的发生发展。     

蒺藜皂苷对老年痴呆小鼠脑组织中H2O2、CAT、GSH-Px含量及海马超微结构的影响

目的 研究蒺藜皂苷对凝聚态β-淀粉样肽(Aβ25～35)致衰老小鼠脑组织中过氧化氢(H2O2)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化氢酶(GSH-Px)含量及海马超微结构的影响.方法 采用一次性小鼠右侧脑室注射Aβ25～35 3 μl造成AD小鼠模型,并于侧脑室注射后14 d测定各组小鼠脑组织中H2O2的含量、CAT、GSH-Px的活力并于光镜、电镜下观察小鼠大脑皮质及海马组织超微结构.结果 侧脑室注射Aβ25～35 3 μl后可引起小鼠脑组织内H2O2含量增加,同时使小鼠脑组织内CAT和GSH-Px活力显著降低,而连续蒺藜皂苷14 d治疗后,与模型组相比蒺藜皂苷150 mg/kg治疗组可显著降低H2O2含量、提高CAT和GSH-Px活性(P<0.05),蒺藜皂苷450 mg/kg治疗组可显著降低H2O2含量、提高CAT和GSH-Px的活性(P<0.01);光镜下观察结果显示正常对照组海马CA1区神经元密集、神经元结构正常;模型组神经元间隙加大,说明有轻度水肿,部分神经元核、质界限模糊,细胞嗜酸性增强;电镜下观察结果显示正常对照组神经元、神经纤维超微结构正常;模型组神经元轻度水肿,脂褐素样包含物增多,线粒体减少或消失;蒺藜皂苷各治疗组可不同程度的减轻上述病理学改变.结论 侧脑室注射Aβ25～35可引起小鼠大脑自由基增加,海马超微结构改变,蒺藜皂苷能明显改善衰老小鼠大脑组织的超微结构并呈剂量效应关系.     

人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病大鼠脑片模型tau蛋白磷酸化的影响

目的 观察人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病（AD）大鼠脑片模型中磷酸化tau蛋白（P-tau）及钙调神经磷酸酶（CaN）表达的影响,探讨人参皂苷Rg1是否通过上调CaN表达从而抑制AD模型大鼠脑片tau蛋白磷酸化。方法 制备5周龄雄性SD大鼠脑片（含皮质和海马）,随机分为4组：对照组、模型组和人参皂苷Rg1组,人参皂苷Rg1＋他克莫司（FK506）（一种CaN抑制剂）组,每组10张脑片。各组脑片首先置于人工脑脊液中孵育1h,之后人参皂苷Rg1组和人参皂苷Rg1＋FK506组分别加入人参皂苷Rg1作用2h,然后除对照组外的各组分别加入冈田酸作用3h。干预结束后脑片经多聚甲醛固定后做冰冻切片,采用免疫组织化学染色、图像分析技术等方法检测各组大鼠脑片P-tau、CaN的表达水平。结果 与对照组比较,模型组各脑区P-tau表达水平增加（P＜0.05）,CaN表达水平减少（P＜0.05）;与模型组比较,人参皂苷Rg1组各脑区P-tau表达水平减少（P＜0.05）,CaN表达水平增加（P＜0.05）;与人参皂苷Rg1组比较,人参皂苷Rg1＋FK506组P-tau表达水平增加（P＜0.05）,CaN表达水平减少（P＜0.05）。结论 人参皂苷Rg1可能通过上调CaN蛋白表达途径抑制AD大鼠脑片模型tau蛋白磷酸化,从而发挥抗痴呆作用。     

喂饲绞股蓝皂苷对Aβ1～40注射海马后大鼠脑内COX活性和线粒体超微结构变化的影响

目的 探讨β淀粉样蛋白（Aβl。柏）海马注射后大鼠脑内细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase，COX）活性和线粒体超微结构变化及绞股蓝（GP）对其影响。方法 动物随机分为GP组、模型组、对照组。运用Aβ双侧海马注射，模拟阿尔茨海默病（AD）脑内Aβ对神经系统的损害。Y型迷宫测试大鼠学习记忆能力，组织化学、原位杂交法结合图像分析检测海马CA1区线粒体COX活性及细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基（COⅡ）mRNA表达，电镜观察CA1区神经细胞线粒体超微结构。并对AD模型大鼠给予GP灌胃，观察其对AD模型大鼠上述各项指标变化的影响。结果 与对照组比较，AD模型大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及COⅡ mRNA表达明显降低，线粒体数量减少，结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂；GP对上述各项指标有不同程度的改善。结论 GP具有改善AD模型大鼠学习记忆能力、海马COX活性和COⅡ mRNA表达及线粒体超微结构的作用，对AD模型大鼠有一定治疗和保护作用。     

嗅成鞘细胞移植对AD大鼠脑内COX活性和线粒体超微结构的影响

目的 探讨嗅成鞘细胞(OECs)移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠脑内COX活性和线粒体超微结构的影响.方法 SD大鼠双侧海马注射Aβ1～40,建立AD大鼠模型.实验动物分为四组:正常对照组、AD模型组、OECs移植组、人工脑脊液(MCSF)注射组,每组12只.体外原代培养OECs并将其移植至AD大鼠双侧海马.运用行为学测试、组织化学、原位杂交结合图像分析以及电镜等技术和工具,观察、比较各组大鼠学习记忆能力、海马CA1区线粒体细胞色素氧化酶(COX)活性、细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基(COⅡ)mRNA表达,以及CA1区神经元线粒体超微结构等指标的变化.结果 与正常对照组比较,AD模型组大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及COⅡmRNA表达明显降低(P<0.05),线粒体数量减少,结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂;OECs移植明显上调上述指标(P<0.05),并对线粒体超微结构有明显的保护作用.结论 OECs移植通过改善AD大鼠学习记忆能力、提高海马COX活性和COⅡmRNA表达以及保护线粒体等作用,对大鼠AD具有明显的治疗效果.     

大豆异黄酮对Aβ25～35诱导的Alzheimer病模型大鼠海马组织形态及超微结构的影舷

目的 研究大豆异黄酮对Aβ25～35诱导的Alzheimer病(AD)模型大鼠海马组织形态及超微结构的影响.方法 采用Aβ25～35双侧海马注射的AD模型大鼠,分组后给予不同剂量大豆异黄酮,HE染色及透射电镜观察大豆异黄酮对海马组织形态及超微结构的影响.结果 HE染色显示,模型组大鼠海马CA1～CA4区及齿状回神经元数量较假手术组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩.大豆异黄酮治疗组及雌激素治疗组神经元数量较模型组增多,胞质浓染神经元少见.透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强.大豆异黄酮治疗组大鼠海马CA1区异常神经元较模型组明显减少. 结论大豆异黄酮能有效地改善Aβ25～35所致AD大鼠海马神经元丢失.     

大豆异黄酮对Aβ25～35诱导的Alzheimer病模型大鼠海马组织形态及超微结构的影响

目的研究大豆异黄酮对Aβ25～35诱导的Alzheimer病（AD）模型大鼠海马组织形态及超微结构的影响。方法采用Aβ25～35双侧海马注射的AD模型大鼠,分组后给予不同剂量大豆异黄酮,HE染色及透射电镜观察大豆异黄酮对海马组织形态及超微结构的影响。结果HE染色显示,模型组大鼠海马CA1～CA4区及齿状回神经元数量较假手术组明显减少,可见较多的神经细胞胞质浓染,核固缩。大豆异黄酮治疗组及雌激素治疗组神经元数量较模型组增多,胞质浓染神经元少见。透射电镜下,模型组海马CA1区神经元较少,可见部分神经细胞膜皱缩,胞体缩小,核膜完整,核染色质电子密度增强。大豆异黄酮治疗组大鼠海马CA1区异常神经元较模型组明显减少。结论大豆异黄酮能有效地改善Aβ25～35所致AD大鼠海马神经元丢失。     

促红细胞生成素对阿尔茨海默病模型大鼠记忆能力及其超微结构的影响

目的探讨促红细胞生成素(EPO)对阿尔茨海默病(AD)样大鼠记忆能力和超微结构的影响。方法雄性Wistar大鼠应用Y迷宫进行空间定向学习和记忆训练5 d后,将达到学会标准的48只大鼠随机分为4组:正常对照组、生理盐水组、模型组、EPO治疗组,每组12只。其中生理盐水组双侧海马注射生理盐水各5μl,模型组和EPO治疗组双侧海马注射凝聚态Aβ各5μl。EPO治疗组从造模手术当天按5 000 IU/kg腹腔注射EPO,隔天1次。术后第10天Y迷宫法检测各组大鼠空间定向学习和记忆能力,透射电镜观察海马线粒体和突触结构的改变,使用免疫组化技术检测各组大鼠海马组织神经生长因子(NGF)蛋白的表达。结果 1与生理盐水组相比,模型组学习记忆能力均明显下降,Y迷宫作业的错误反应次数增多,尝试次数增多,全天总反应时间显著延长(P0.05);与模型组相比,EPO治疗组Y迷宫作业的错误反应次数减少,尝试次数减少,全天总反应时间缩短(P0.05);2透射电镜结果显示:正常对照组和生理盐水组神经细胞结构完整,线粒体膜、脊完整,神经轴突和神经突触结构完整;EPO治疗组大鼠海马线粒体和神经突触基本正常;模型组大鼠海马线粒体结构破坏,线粒体肿胀,线粒体脊断裂,结构紊乱,神经突触密度降低,突触膜增厚,突触间隙不清,突触小泡数量减少。3与生理盐水组及EPO治疗组相比,模型组NGF表达降低(P0.05)。结论 EPO注射可以减轻AD样大鼠记忆能力损伤,减轻Aβ对大鼠海马超微结构的破坏。EPO可以显著改善AD样大鼠的空间记忆能力,其机制可能与提高NGF蛋白表达有关。     

大豆异黄酮对Aβ25-35诱导的AD大鼠模型海马组织形态及超微结构的影响

目的研究大豆异黄酮对Aβ25-35诱导的阿尔茨海默病（AD）大鼠模型海马组织形态及超微结构的影响。方法采用Aβ25-35双侧海马注射的AD大鼠模型，分组后给予不同剂量大豆异黄酮，HE染色及透射电镜观察大豆异黄酮对海马组织形态及超微结构的影响。结果HE染色显示，模型组大鼠海马CA1～CA4区及齿状回神经元数量较假手术组明显减少，可见较多的神经细胞胞质浓染，核固缩。大豆异黄酮及雌激素治疗组神经元数量较模型组增多，胞质浓染神经元少见。透射电镜下，模型组海马CA1区神经元较少，可见部分神经细胞膜皱缩，胞体缩小，核膜完整，核染色质电子密度增强。大豆异黄酮治疗组大鼠海马CA1区异常神经元较模型组明显减少。结论大豆异黄酮能有效地改善Aβ25-35所致AD大鼠海马神经元丢失。     

金匮肾气丸对阿尔茨海默病大鼠模型海马神经元β-淀粉样蛋白和神经元核抗原表达的作用

目的探讨金匮肾气丸对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马神经元β-淀粉样蛋白(Beta-amyloid)和神经元核抗原(Neu N)表达的影响。方法清洁级健康SD大鼠24只,分成三组:对照组,AD模型组,中药组。采用在单侧海马注射Aβ25-35建立AD大鼠模型,SABC免疫组化方法检测各组大鼠海马神经元中Beta-amyloid和Neu N的表达。结果 1AD模型组与对照组比较,大鼠海马Beta-amyloid阳性细胞数增多(P0.01),Neu N阳性细胞数减少(P0.01);2中药组与AD模型组比较,大鼠海马Beta-amyloid阳性细胞减少(P0.01),Neu N阳性细胞数增加(P0.01)。结论金匮肾气丸能抑制Beta-amyloid阳性细胞表达,促进Neu N阳性细胞的表达,从而起到防治AD的作用。     

微管相关蛋白-2在AD模型大鼠海马组织中的表达及其意义

目的观察阿尔茨海默病（AD）大鼠海马组织中微管相关蛋白-2（MAP-2）的表达。方法采用 β- 淀粉样肽（Aβ）大鼠侧脑室注射制作AD动物模型。用免疫荧光染色和Westernblot法检测大鼠海马组织MAP-2的表达。结果Aβ脑室内灌注造成Aβ沉积的AD模型在行为学和病理改变上一定程度地模拟了AD，AD大鼠海马区MAP-2蛋白表达与正常组大鼠相比显著下降，MAP-2蛋白荧光检测发现AD大鼠海马区MAP-2阳性神经元数量明显减少。结论在AD大鼠海马组织中MAP-2表达下降。     

脑室内移植嗅成鞘细胞改善大鼠阿尔茨海默病的症状

目的探讨嗅成鞘细胞（olfactory ensheathing cells,OECs）脑室内注射对大鼠阿尔茨海默病的影响。方法sD大鼠双侧海马注射ABl．40,建立AD大鼠模型。实验动物分为四组：正常对照组、AD模型组、OECs移植组、MCSF注射组,每组10只。体外原代培养嗅成鞘细胞并将其移植至AD大鼠侧脑室。运用行为学测试、组织化学、原位杂交结合图像分析以及电镜等技术,观察、比较各组大鼠学习记忆能力、海马CA1区线粒体细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase,COX）活性、细胞色素氧化酶Ⅱ型亚基（COⅡ）mRNA表达、一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS）阳性神经元数,以及CA1区神经元线粒体超微结构等指标的变化。结果与正常对照组比较,AD模型组大鼠空间学习记忆能力、海马CA1区线粒体COX活性及CO II mRNA表达、NOS阳性神经元数明显降低或减少俨〈0．05）,线粒体数肇减少,结构不清、肿胀、空泡样变、嵴断裂;嗅成鞘细胞移植明显上调上述指标俨〈0．05）,并对神经元线粒体超微结构有明显的保护作用。结论嗅成鞘细胞移植通过改善AD大鼠学习记忆能力、提高海马COX活性和CO1ImRNA、NOS阳性神经元表达以及保护神经元线粒体等作用,对大鼠阿尔茨海默病具有明显的治疗作用。     

Aβ_(25～35)对大鼠海马神经元及小胶质细胞的影响

目的探讨双侧海马注射Aβ25³5不同时间点对大鼠海马神经元及MG的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组(注射Aβ后2、7、15、21 d 4个时间点),双侧海马注射Aβ建立大鼠AD模型。水迷宫法观察大鼠学习记忆能力;硫堇染色观察海马CA1区神经元和胶质细胞;Aβ、CD11b免疫组化染色分别观察Aβ沉积和活化MG。结果与对照组相比,模型组大鼠在第335不同时间点对大鼠海马神经元及MG的影响。方法雄性Wistar大鼠随机分为对照组、模型组(注射Aβ后2、7、15、21 d 4个时间点),双侧海马注射Aβ建立大鼠AD模型。水迷宫法观察大鼠学习记忆能力;硫堇染色观察海马CA1区神经元和胶质细胞;Aβ、CD11b免疫组化染色分别观察Aβ沉积和活化MG。结果与对照组相比,模型组大鼠在第3⁵天逃避潜伏期均显著延长,学习记忆能力下降(P<0.05);4个时间点模型组大鼠海马都有神经元缺失,胶质细胞增生,2 d、7 d、15 d组大鼠神经元损伤呈加重趋势,但21 d组神经元损伤较15 d组有减轻趋势(P<0.05);4个时间点模型组大鼠都有Aβ沉积和活化的MG,Aβ沉积量及MG活化自第7天后呈下降趋势(P<0.05)。结论 Aβ可以引起神经元损伤,降低大鼠的学习记忆能力;Aβ可以激活MG,引起MG形态和数量改变,MG可吞噬、清除Aβ;Aβ沉积量和MG活化数量变化呈正相关。     

人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病大鼠模型脑片神经元自噬小体相关蛋白表达的影响

目的:探讨人参皂苷Rg1对阿尔茨海默病(AD)大鼠模型脑片神经元自噬小体相关蛋白表达的影响及其分子机制。方法:选取6周龄SD大鼠断头取脑制备海马脑片,将海马脑片随机分为空白对照组、模型组及低、中、高浓度Rg1组,每组10张脑片。模型组人工脑脊液中加入Aβ 1-42(终浓度5 μmol/L)处理2 h造模,低...     

溶酶体蛋白酶cathepsin L在阿尔茨海默病模型大鼠海马组织中的表达及意义

目的 观察阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织中溶酶体蛋白酶cathepsin L的表达.方法 采用Aβ-淀粉样肽(Aβ)大鼠海马注射制作AD动物模型.用免疫荧光染色和Western印迹法检测大鼠海马组织cathepsin L的表达.结果 Aβ海马内灌注造成Aβ沉积的AD模型在行为学和病理改变上一定程度地模拟了AD.AD大鼠海马区cathepsin L蛋白表达与正常组大鼠相比显著升高,cathepsin L蛋白荧光检测发现AD大鼠海马区cathepsin L阳性神经元数量明显增加.结论 在AD大鼠海马组织中cathepsin L表达升高.     

骨髓间充质干细胞通过激活Wnt通路防治阿尔茨海默病

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对阿尔茨海默病(AD)大鼠学习记忆的影响,检测Wnt通路相关蛋白β-catenin及细胞周期蛋白(Cyclin)D1的表达。方法模型组双侧海马区注射β-淀粉样蛋白(Aβ)_(23-35);模型对照组进行生理盐水注射;建立AD模型后,移植组进行BMSCs移植治疗;西药组造模后氢溴酸加兰他敏灌胃治疗;正常组常规鼠粮饲养。治疗30 d后Morris水迷宫测试大鼠逃避潜伏期;通过苏木素-伊红(HE)染色观察海马的神经元形态变化;免疫组化检测蛋白β-cateni及Cyclin D1的表达。结果模型组胞质游离的β-catenin表达有所降低,Wnt信号通路受到抑制,Cyclin D1的表达减少。BMSCs移植后缩短了AD模型大鼠的逃避潜伏期,其学习记忆能力有所增强;同时胞质内游离β-catenin表达增多,Wnt信号通路被激活,Cyclin D1的表达增强。结论 BMSCs移植治疗AD可能是通过激活了Wnt信号通路,从而调控细胞周期,发挥了对神经元的保护作用。     

人参皂苷Rg1联合BMSCs对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的探讨人参皂苷Rg1联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法25只大鼠随机被分为正常对照组(A组)、模型组(B组)、BMSCs治疗组(C组)、人参皂苷Rg1治疗组(D组)、BMSCs和人参皂苷Rg1联合治疗组(E组)各5只。采用大脑中动脉栓塞法制备脑缺血再灌注模型,利用BrdU标记BMSCs后行脑室内移植。于造模后4周采用单盲法进行神经功能缺损评分后,用焦油紫染色检测大脑皮层神经元,用免疫组化染色检测BrdU、NSE的表达情况。结果 A组未见神经功能缺损症状,皮层神经元细胞质中可见深紫色尼氏体;B组呈明显的神经功能缺损症状,尼氏体明显减少甚至消失;与B组比较,C、D、E组神经功能缺损症状改善、神经元存活数量增高(P均<0.05),其中E组最为显著;免疫组化染色C、E组可见梗死区周围有BrdU阳性细胞;A组NSE阳性表达,B组少量表达,与B组比较,C、D、E组NSE阳性表达增强、以E组最为显著。结论人参皂苷Rg1联合BMSCs能够促进脑缺血再灌注损伤的修复。     

人参皂苷对体外培养的缺氧海马神经元的预防保护作用

取新生Wistar大鼠海马神经元体外培养14d，随机分为对照组、尼莫地平5／μmol／L组、人参皂苷Rg20．025mmol／L组、Rg20．05mmol／L组。将药物加入到培养液中4h后。连续冲以95％N2＋95%CO2混合气体，建立急性缺氧细胞模型。台盼蓝染色细胞计数，吉姆萨染色观察细胞形态并计算其凋亡率，DNA Ladder测定细胞凋亡程度。结果提示，人参皂苷Rg2可显著降低体外培养大鼠缺氧海马神经元的细胞凋亡率而发挥对其保护作用。