血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞、平滑肌细胞及成纤维细胞胶原蛋白合成的影响

目的:观察血小板衍生生长因子-BB对培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞胶原蛋白合成的影响.方法:采用培养的人血管内皮细胞、平滑肌细胞和成纤维细胞,应用3H-脯氨酸掺入方法,观察血小板衍生生长因子-BB对3种细胞胶原蛋白合成的影响.结果:血小板衍生生长因子-BB可促进处于静止状态的成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成,并呈现出明显的浓度依赖关系,成纤维细胞和平滑肌细胞胶原蛋白合成分别在30 ng/ml和40 ng/ml时达到高峰,血小板衍生生长因子-BB对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.在30 ng/ml的血小板衍生生长因子-BB作用下,成纤维细胞和平滑肌细胞分别在36 h和48 h时胶原蛋白合成达到高峰.结论:血小板衍生生长因子-BB可明显促进培养的人血管平滑肌细胞和成纤维细胞的胶原蛋白的合成,对血管内皮细胞胶原蛋白合成总量无明显促进作用.     

血小板衍生生长因子诱导人血管平滑肌细胞增殖时钙调素的变化

目的:观察血小板衍生生长因子(PDGF)对培养的人血管平滑肌细胞增殖及钙调素含量变化的作用.方法:应用3H-TdR掺入法和磷酸二酯酶法,观察不同浓度(1、10、20、30、40 ng/ml)PDGF-BB对培养的人血管平滑肌细胞DNA合成和钙调素含量变化的影响及其时间效应.结果:不同浓度PDGF-BB作用后,处于静止状态的人血管平滑肌细胞DNA的合成增加,并呈现明显的浓度依赖关系,在40 ng/ml浓度时DNA的合成达到高峰(P＜0.01).平滑肌细胞在进入细胞增殖周期后,细胞内钙调素含量逐渐增加,在9 h时出现一个短暂的高峰,随后逐渐下降;不同浓度PDGF-BB作用后,钙调素含量增加,并呈现出明显的浓度依赖关系,30 ng/ml浓度时作用最为显著(P＜0.01).结论:PDGF可促进培养的人血管平滑肌细胞增殖,该作用可能与增加钙调素含量有关.     

血管内皮生长因子对血管内皮细胞增殖及DNA合成的影响

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)诱导血管增生性疾病中血管生成的作用机制。方法　取体外培养的人脐静脉内皮细胞系ECV 30 4细胞 ,用MTT法和3H -TdR掺入法观察VEGF对ECV 30 4细胞增殖及DNA合成的影响。结果　VEGF对ECV 30 4细胞增殖及DNA合成均有明显刺激作用 ,且均呈剂量依赖性关系。结论　VEGF可能通过刺激血管内皮细胞增殖及DNA合成 ,促进血管生成。在血管增生性疾病中可能起重要促进作用。     

血小板源性生长因子对于培养内皮细胞血管内皮细胞生长因子水平的影响

通过免疫组织化学的方法,观察血小板源性生长因子（PDGF）对于培养脐静脉内皮细胞血管内皮细胞生长因子（VEGF）水平的影响,揭示PDGF促进新生血管形成的机制。实验结果：缺氧培养时内皮细胞胞浆VEGF水平上升;不同剂量的PDGF在常规或缺氧培养条件下均能增加内皮细胞VEGF水平,且呈剂量依赖性,提示PDGF可能通过直接促血管形成生长因子的介导作用间接促进新生血管的形成。     

血小板源性生长因子对于培养内皮细胞血管内皮细胞生长因子水平的影响(摘要)

通过免疫组织化学的方法，观察血小板源性生长因子（ＰＤＧＦ）对于培养脐静脉内皮细胞血管内皮细胞生长因子（ＶＥＧＦ）水平的影响，揭示ＰＤＧＦ促进新生血管形成的机制。实验结果：缺氧培养时内皮细胞胞浆ＶＥＧＦ水平上升；不同剂量的ＰＤＧＦ在常规或缺氧培养条件下均能增加内皮细胞ＶＥＧＦ水平，且呈剂量依赖性。提示我们ＰＤＧＦ可能通过直接促血管形成生长因子的介导作用间接促进新生血管的形成。血小板源性生长因子对于培养内皮细胞血管内皮细胞生长因子水平的影响(摘要)@夏豪@李庚山@尹丽娅@李晓艳@王晶     

血小板源性生长因子对于培养内皮细胞血管内皮细胞生长因子 …

通过免疫组织化学的方法,观察血小板源笥生长因子对于培养脐静脉内皮细胞血管内皮细胞生长因子水平的影响,揭示ＰＤＧＦ促进新生血管形成的机制。实验结果：缺氧培养时内皮细胞胞浆ＶＥＧＦ水平上升;不同剂量的ＰＤＧＦ在常规或缺氧培养条件下能增加内皮细胞ＶＥＧＦ水平,且呈剂量依赖性,提示ＰＤＧＦ可能通过直接促血管形成生长因子的介导作用间接促进新生血管的形成。     

胰岛素对大鼠血管平滑肌细胞增殖及胶原蛋白合成的影响

目的 观察胰岛素对分离培养的大鼠血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cells,VSMCs)增殖及胶原蛋白合成的影响.方法 采用大鼠的腹主动脉血管平滑肌细胞分离培养,应用3H-TdR和3H-脯氨酸掺人方法检测胰岛素对大鼠VSMCs干预后,VSMCs内DNA合成以及胶原蛋白合成.结果 胰岛素可促进处于静止状态的大鼠VSMCs DNA及胶原蛋白的合成,并呈现明显的浓度依赖关系,在40 nmol/L的浓度时DNA及胶原蛋白的合成达到高峰,DNA及胶原蛋白分别处于36 h和48 h时合成最为显著.结论 胰岛素可明显促进培养的VSMCs增殖及胶原蛋白的合成.     

穿膜肽TAT的固相合成及体外活性研究

目的 以固相合成法合成穿膜肽TAT,并对合成产物进行活性评价.方法 采用Na-芴甲氧羰基(fluorenyl-methyloxyloxycarbonyl,FMOC)作为α-氨基的保护基,以逐个延伸的固相合成法合成穿膜肽TAT.应用高效液相色谱和质谱仪测定其纯度及相对分子质量;荧光显微镜观察穿膜肽TAT介导增强型绿色荧光蛋白(enhanced green flutescent pro-tein,pEGFP)质粒在体外培养人脐静脉内皮细胞中的转染效果以评价穿膜肽TAT的生物活性;MTT法检测穿膜肽TAT与质粒DNA复合物对人脐静脉内皮细胞生长活性的影响.结果 高效液相色谱和质谱鉴定所制备穿膜肽TAT的纯度为96.6%,相对分子质量1 880.它能够携带质粒DNA穿过细胞膜进行基因转染,并对细胞活性无明显影响.结论 采用Fmoc固相肽合成法可以成功地合成有生物活性的穿膜肽TAT.     

猪血小板衍生生长因子的氨基酸组成和等电点分析

目的：测定血小板衍生生长因子的氨基酸组成和等电点。方法：用酸水解及聚丙烯酰胺凝胶等电聚焦的方法测定猪血小板衍生生长因子的氨基酸量、组成成分和等电点。结果：酸水解法测定的猪血小板衍生生长因子贪吸１７种不同的氨基酸,其中含有相对较多的碱性氨基酸,其等电点为９．８～１０．３。结论：猪血小板衍生生长因了阳玫中强阳离子多肽,含有相对较多的碱性氨基酸,与其等电点为９．８～１０．３是一致的。     

重组人肝细胞生长因子的纯化及鉴定

目的：对重组人肝细胞生长因子（Recombinant human hepatocyte growth facor,rhHGF）进行初步纯化及鉴定。方法：培养上清液经过离心、超滤,在FPLC系统上经肝素亲和层析分离纯化,用ELISA法检测、收集rhHGF。SDS-PAGE电泳鉴定纯度和相对分子质量,大鼠原代肝细胞培养法检测rhHGF的生物学活性。结果：rhHGF主要在0.9-1.3mol/L NaCl范围内被洗脱,由约62000和34000两个亚基组成,明显促进大鼠肝细胞DNA合成。结论：经肝素亲和层析分离,从表达rhHGF的CHO细胞培养上清液中纯化出有活性的rhHGF。     

Study on Angiogenesis Factor of Human Osteosarcoma

The rapid growing ofthe solid tumors is usuallydue to the rapid development of blood vessels[1] .Os-teosarcoma emerges a typical clinical appearance ofsolid tumors in which histologicalsections often showa great number of pathological nutritional blood ves-sels. Investigation of the tumor neovascularizationcould not only understand the mechanism of thegrowth and metastasis of osteosarcoma,but also ex-pect to deduce a therapeutic program targeting theneovascularization.Thus,we cultured the huma…     

阿魏酸钠对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮的影响

目的研究阿魏酸钠(SF)对人脐静脉内皮细胞产生一氧化氮(NO)的影响。方法用NO试剂盒分别测定氧化低密度脂蛋白(OX-LDL)、VitE以及SF对培养的人脐静脉内皮细胞产生NO的影响。结果OX-LDL对培养的人脐静脉内皮细胞NO有明显的抑制作用,并且随着浓度的增加及作用时间的延长,抑制作用逐渐增强;SF和抗氧化剂VitE可明显减弱OX-LDL对内皮细胞NO产生的抑制作用。结论SF具有与抗氧化剂VitE相似的保护内皮细胞释放NO的作用。     

阿托伐他汀抑制肺炎嗜衣原体诱导人脐静脉内皮细胞表达ICAM-1

目的观察阿托伐他汀在肺炎嗜衣原体感染人脐静脉内皮细胞过程中对细胞间粘附分子-1表达的影响。方法用HEP-2细胞培养Cpn，随后用Cpn感染人脐静脉内皮细胞，同时加入阿托伐他汀，观察内皮细胞表面ICAM-1的表达情况。结果Cpn能感染体外培养的人脐静脉内皮细胞，且阿托伐他汀能抑制Cpn诱导其表达ICAM-1。结论Cpn可能是动脉粥样硬化的始动因子之一，阿托伐他汀在预防心血管病事件中，非调脂机制可能是其重要机制。     

氧化应激对内皮细胞NF-κB、iNOS和NO信号表达的影响

目的观察氧化剂第三丁基过氧化氢（t-BHP）对体外培养的内皮细胞存活率及核转录因子κB（NF-κB）、iNOS和一氧化氮（NO）的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞（HUVEC）,用不同浓度的t-BHP处理,具体如下：（1）检测细胞存活率。t-BHP作用浓度分别为12.5,25,50,100μmol/L,作用时间分别为30,60,90,120 min,采用MTT法观察;（2）检测NF-κB p65、iNOS蛋白表达量及细胞内NO水平。t-BHP的作用浓度为50μmol/L,作用时间分别为30,60,90,120 min,采用Western blot测NF-κB p65、iNOS蛋白表达量,Griess化学显色法测细胞内NO水平;（3）iNOS抑制剂左旋硝基精氨酸甲酯（L-NAME,600μmol/L）预处理内皮细胞24 h,用Griess化学显色法检测细胞内NO水平。结果 t-BHP可降低内皮细胞的存活率,且呈时间及剂量依赖性,50μmol/Lt-BHP作用30 min细胞核NF-κB活化片段p65蛋白表达达高峰,作用60 min细胞质iNOS蛋白达高峰;iNOS抑制剂L-NAME可明显抑制内皮细胞NO升高。结论氧化应激可引起内皮细胞损伤,其效应可能通过NF-κB-iNOS-NO途径介导。     

细胞穿透肽PEP-1介导增强型绿色荧光蛋白转导人脐静脉内皮细胞

目的研究PEP-1-EGFP融合蛋白穿透人脐静脉内皮细胞的能力。方法用基因工程的方法制备并纯化EGFP蛋白和PEP-1-EGFP融合蛋白,将纯化后的两种蛋白和体外培养的人脐静脉内皮细胞共同孵育,分别观察其进入细胞的能力及PEP-1-EGFP进入细胞的时间依赖性、剂量依赖性和稳定性,并用MTT法检测PEP-1-EGFP融合蛋白对细胞的毒性。结果EGFP蛋白不能进入细胞内。PEP-1-EGFP融合蛋白可在5min内穿透人脐静脉内皮细胞,其穿透人脐静脉内皮细胞的能力呈时间和剂量依赖性,进入细胞后27h仍可观察到微量绿色荧光。PEP-1-EGFP蛋白浓度达200μmol/L时对细胞仍无毒性。结论PEP-1能有效携带目的蛋白进入人脐静脉内皮细胞,这为将来用细胞穿透肽PEP-1介导有生物活性的抗氧化物质穿透内皮细胞治疗缺血再灌注损伤奠定了基础。     

芍药苷对LPS诱导的脐静脉内皮细胞HMGB1及ICAM-1表达的影响

目的:观察芍药苷对LPS诱导的脐静脉内皮细胞(ECV304)高迁移率族蛋白1(HMGB1) 和细胞间粘附分子(ICAM-1)释放和表达的影响.方法:体外培养的脐静脉内皮细胞传至3代后,转种于放置了无菌处理盖玻片的6孔培养板中,细胞分为对照组、LPS刺激组(100 ng/m L )、芍药苷组(LPS 100 ng/mL+芍药苷0.625 mg/mL),同时经LPS诱导刺激,以免疫细胞化学法检测内皮细胞HMGB1和ICAM-1的表达.结果:LPS刺激20 h后,脐静脉内皮细胞释放HMGB1 增多,ICAM-1表达上调;芍药苷可以抑制内皮细胞HMGB1的释放,下调ICAM-1表达.结论: 芍药苷可能通过抑制HMGB1释放、下调ICAM-1的表达等途径对内皮细胞起保护作用.     

改良酶消化法体外培养人脐静脉内皮细胞

目的观察改良酶消化法分离、培养人脐静脉内皮细胞(human umbilial vein endothelial cells,HUVECs)的效果,探讨获取高纯度、高活性HUVECs的培养方法。方法采集健康新生儿脐带,应用改良的酶消化法(含0.016%EDTA的0.25%胰蛋白酶)进行HUVECs的分离培养;通过细胞形态学观察及免疫荧光化学鉴定HUVECs及其特异性抗原的表达。结果体外培养的HUVECs细胞形态呈铺路石样,Ⅷ因子相关抗原荧光染色阳性,细胞纯度可达99%。结论通过本实验改良的分离培养方法,可以在体外获得较高数量的HUVECs,在细胞形态、表面抗原标志等方面具内皮细胞特征,可以用于血管内皮细胞模型的构建。     

同型半胱氨酸对内皮细胞 DNA 总甲基化水平的影响

目的研究同型半胱氨酸（Hcy）对人脐静脉内皮细胞总甲基化水平的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,并经Ⅷ因子法对其进行鉴定,分别用含有0,2、8、32mmol·L-1 Hcy的RPMI1640培养液对其作用48h后,测定基因组总甲基化水平。结果O、2、8、32mmol·L-1 Hcy组HUVEC细胞总甲基化水平分别为：（9．25±0．15）％、（8．53±0．49）％、（6．24±O．27）％、（3．79±0．13）％,呈明显的剂量效应关系（P〈0．05）。结论Hcy可下调人脐静脉内皮细胞DNA的总甲基化水平,并可能是Hcy致动脉粥样硬化的重机制之一。     

罗格列酮对高糖环境下人脐静脉内皮细胞分泌NO及ICAM-1的影响

目的 研究在高糖环境下人脐静脉内皮细胞（HUVEC）分泌NO及ICAM-1的量随时间的变化以及罗格列酮的干预作用.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,随机分为正常对照组、高糖组、罗格列酮干预组,加入相应培养液培养不同时间（0 h,24h,48 h,72 h,96 h）.用硝酸还原酶法测细胞上清液中NO^-3＋NO^-2含量,来反映NO水平;用酶联免疫吸附技术双抗体夹心法（ABC-ELISA）测定细胞上清液中ICAM-1水平.结果 与正常对照组相比,高糖组NO含量在24 h明显升高,在48 h显著降低,于72 h基本达底线水平,ICAM-1水平在各时间点均明显升高且呈时间依赖性;罗格列酮可显著抑制高糖引起的NO的变化及ICAM-1的增高.结论 罗格列酮可纠正高糖诱导的内皮细胞功能紊乱,起到保护血管的作用.