补肾中药HU-ECS对培养成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的：为了解补肾中药HU-ECS对体外培养成骨细胞的作用。方法：应用MTT法、对硝基苯磷酸盐法及茜素红染色方法观察HU-ECS对体外培养民骨细胞的增殖、ALP表达及矿化结节形成的影响。结果：HU-ECS具有刺激骨细胞增殖作用（10^-6g/ml组,P＜0.01-0.001）,提高ALP活性及矿化结节形成的数量。结论：HU-ECS具有刺激体外培养成骨细胞增殖及分化成熟的功能。     

缺氧对成人成骨细胞增殖及分化的影响

目的:在缺氧条件下体外培养成人成骨细胞,探讨缺氧对成骨细胞增殖及分化的影响。方法:将手术中取得的成人髂骨骨块,使用酶消化法进行培养,当细胞传至第2代时,建立成骨细胞缺氧模型,用MTT法观察各组成骨细胞增殖活力的变化;用骨钙素放射免疫法分别检测各组骨钙素含量;用激光共聚焦显微镜对两组培养前3 d细胞血管内皮生长因子(VEGF)光密度值作定量分析。结果:正常组细胞增殖活力较缺氧组强;缺氧组细胞VEGF的光密度值及骨钙素含量均高于正常组。结论:缺氧抑制成骨细胞增殖,缺氧(1~3 d)诱导成人成骨细胞VEGF的高表达并促进成骨细胞的分化。     

不同强度正弦交变磁场对体外培养成骨细胞增殖与分化影响

目的研究频率为50Hz的不同强度正弦交变电磁场对体外培养成骨细胞(Osteoblasts,OB)的影响。方法原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为9组,每组分别暴露在频率50Hz,磁场强度为0(对照组)、0.9、1.2、1.5、1.8、2.1、2.4、2.7、3.0mT的正弦交变磁场中,30min/次/d。倒置相差显微镜下观察细胞形态,48h后测定细胞增殖情况,第3、6、9、12、15d测定碱性磷酸酶(Alkaline Phosphatase,ALP)活性,第10d进行ALP组织化学染色,第12d进行茜素红钙化结节染色。结果成骨细胞于磁场暴露处理3d～4d后呈漩涡样分布;与对照组相比,0.9、1.2、1.5、1.8、2.1、2.7和3.0mT组均显著抑制细胞增殖(P0.01或P0.05),2.4mT组无明显影响(P0.05);除3.0mT组外,其它各组的ALP活性均高于对照组(P0.05),尤以1.8mT组最高(P0.01);1.2、1.5、1.8、2.1和2.4mT组的ALP阳性克隆数明显多于对照组,1.8mT组最多,0.9、2.7和3.0mT组与对照组无明显差别;茜素红钙化结节计数结果与ALP组织化学染色结果的趋势相一致。结论 50Hz,0.9mT～3.0mT的正弦交变磁场(2.4mT除外)均抑制体外培养成骨细胞的增殖,但能促进其分化成熟与钙化,尤以1.8mT效果最为明显。     

阿司匹林联合辛伐他汀对成骨细胞增殖及分化的影响

目的探索阿司匹林(aspirin,ASP)联合辛伐他汀(simvastatin,SIM)对成骨细胞增殖和分化的影响,为临床上两者联合使用的可行性提供细胞学基础。方法获取SD大鼠成骨细胞,随机分为对照组(CON)、ASP组、SIM组和ASP-SIM组等4组,培养基中分别添加安慰剂、ASP、SIM和ASP联合SIM干预,培养7 d后,通过MTT法检测细胞的增殖情况,碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)及茜素红染色观察细胞的功能状态,蛋白电泳观察骨钙素(osteocalcin,OCN)及Runx2蛋白的表达情况。结果 ASP及SIM单独作用于成骨细胞时,都可以明显促进成骨细胞的增殖,增加ALP活性及矿化能力,同时明显促进OCN及Runx2蛋白的表达;联合使用效果明显优于单独使用,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论 ASP及SIM都可以明显促进成骨细胞增殖和分化,且联合使用效果更佳。     

地塞米松对成人成骨细胞增殖和分化影响的实验研究

目的研究地塞米松对体外培养的成人成骨细胞增殖和分化的影响。方法取成人的髂骨松质骨,采用胶原-胰蛋白酶消化法,获得松质骨中的成骨细胞,进行纯化和培养。在此基础上,添加1×10-8mol/L的地塞米松,连续加药3d,置入CO2孵箱中培养,同时作不加药的空白对照。通过倒置相差显微镜和电镜观察增殖和分化情况,检测上清液中的碱性磷酸酶和骨钙素含量,并且对成骨细胞的凋亡情况进行测定。结果胶原-胰蛋白酶消化法得到的成人成骨细胞,生长情况良好,生化指标稳定可靠,细胞纯化效果佳,可以满足相关研究的需要。进一步研究结果显示,在地塞米松浓度为1×10-8mol/L,成骨细胞密度为10000/ml的条件下,上清液中碱性磷酸酶和骨钙素含量明显增高,骨结节形成加速,与未加药的对照组比较差异均有非常显著性意义,同时成骨细胞的凋亡情况无明显变化。结论地塞米松对体外培养的成人成骨细胞的增殖和分化有明显地促进作用,可以作为促进骨形成的阳性对照应用于抗骨质疏松药物的筛选研究。     

补肾密骨液对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖的影响

目的 观察补肾密骨液对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞增殖的影响。方法 实验药物与新生大鼠颅骨成骨细胞共同培养３天后，分别采用噻唑蓝比色分析法和＾３Ｈ－胸腺嘧啶苷掺入法两种手段，检测成骨细胞的增殖情况。结果 补肾密骨液呈剂量依赖的方式促进成骨细胞的增殖，１０ｍｇ／Ｌ的补肾密骨液便可明显地促进成骨细胞的增殖，在１０￣１０００ｍｇ／Ｌ的浓度范围内，其促进作用随浓度的升高而增加，并于１０００ｍｇ／Ｌ时达到最     

淫羊藿对成骨细胞增殖分化的影响

骨质疏松症是由于衰老或绝经而引起的骨骼退行性病变,属中医“骨痹”范畴。依据“肾主骨”理论,用补肾法治疗骨质疏松取得较好的临床效果。淫羊藿作为传统的补肾壮阳中药,在中医临床治疗骨质巯松症所用的众多有效方药中出现频率较高。其单味药水提液对去睾丸大鼠和复方制剂对去卵巢大鼠有预防骨量丢失的作用。     

羊胎素对体外成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响

目的 观察羊胎素在体外对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖、分化及矿化功能的影响。方法将提取之羊胎素稀释加入体外培养的SD新生大鼠颅骨成骨细胞体系中,终浓度分别为0.625％、1.25％、2.5％、5％和10％;加药后24、48和96 h用MTT法检测细胞的增殖并绘制生长曲线:培养5 d时用PNPP法测定细胞碱性磷酸酶(ALP)活性;培养31 d时用茜素红染色2.5％羊胎素组形成之矿化骨结节,用图像分析仪计算骨结节的面积。结果 所有含羊胎素浓度组,其MTT法测得的A值都显著高于空白对照组(P<0.01),生长曲线表现为含羊胎素组的细胞增殖加快,以2.5％浓度组最为显著;ALP结果显示,羊胎素各浓度组的碱性磷酸酶活性都显著高于空白对照组(P<0.01);茜素红染色后显示,2.5％羊胎素组所形成的骨结节面积显著高于空白对照组(P<0.01)。结论羊胎素对体外培养的SD新生大鼠颅骨成骨细胞有显著的促进增殖、分化和矿化的作用。     

不同频率振动应变对成骨细胞增殖及分化能力的影响

目的 观察不同频率振动应变(vibration strain)对体外培养成骨细胞细胞周期、增殖能力及分化的影响,确定最佳振动频率.方法 应用自制复合振动仪,将振动强度0.5g(g为加速度),不同频段3～10、15～30、25～45、50～80和80～100Hz振动应变分别作用于成骨细胞,振动应变加载后分别检测细胞周期、细胞增殖能力(MTT法)及碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)活性的变化.结果 15～30和25～45Hz频段诱导成骨细胞周期循环(P<0.01),促进细胞增殖(P<0.01),增强ALP活性(P<0.01);80～100和3～10Hz频段抑制细胞周期循环(P<0.01);80～100Hz频段抑制细胞增殖(P<0.01);50～80和80～100Hz频段抑制ALP活性(P<0.01).结论 不同频率振动应变对成骨细胞周期、增殖能力、ALP活性均有影响,振动应变促进成骨细胞增殖及分化的最佳频率为15～45Hz.     

骨碎补含药血清对成骨细胞增殖、成骨的影响

目的研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨的影响。方法取乳鼠颅骨,利用二型胶原酶反复消化,离心,提取成骨细胞。利用骨碎补含药血清干预,分别测定细胞增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量等,研究骨碎补含药血清对成骨细胞的增殖、成骨分化及其抗氧化性的影响;结果用含药血清干预,测定增殖率、ALP活性、钙盐沉积量、骨钙素分泌量、钙化结节量均高于空白对照组。结论骨碎补含药血清可以促进成骨细胞的增殖、成骨分化及其增强其抗氧化性。     

乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的观察乳铁蛋白(Lf)对大鼠成骨细胞增殖分化的影响,初步探讨Lf对成骨细胞的作用机制。方法用不同浓度的Lf干预成骨细胞,在不同时间分别测定细胞数目的增殖、细胞内碱性磷酸酶活性,并用半定量RT-PCR法检测成骨细胞内RANKL/OPG mRNA基因的表达。结果Lf呈时间和浓度依赖性地促进大鼠成骨细胞增殖及碱性磷酸酶活性,每组实验在不同时间的差异均有显著的统计学意义(P<0.05),其中400μg/ml组在72h时细胞增殖数目达到最大。在碱性磷酸酶活性方面,400μg/ml组在72h时则有所下降。不同浓度Lf、不同作用时间均能促使成骨细胞中OPG mRNA表达增加,同时抑制RANKL mRNA表达。结论Lf能促进成骨细胞的增殖分化,并且能够调节成骨细胞RANKL/ OPG mRNA表达,从而抑制破骨细胞介导的骨吸收。     

结合磁场对成骨细胞的促增殖作用

目的观察脉冲与静磁场结合的磁场对成骨细胞体外生长的影响.方法用胶原酶阶梯消化法体外分离、培养成骨细胞,随机取培养板2块,1块作为对照,在另1块培养板两侧放置脉冲与静磁场组合的磁场,静磁场强500 GS,脉冲峰值65 mV,频率75 Hz,作用24 h,用酶联免疫法检测磁场对成骨细胞增殖的影响.结果实验组A值为0.276 4±0.003 9;对照组A值为0.197 2±0.002 7,两者差异有非常显著性(P＜0.01).结论采用脉冲磁场与静磁场结合的方式,对成骨细胞有显著的促增殖作用.     

老年大鼠含淫羊藿血清对成骨细胞的增殖与分化的影响

目的：观察老年雄性大鼠淫羊藿血清对新生大鼠颅骨成骨细胞增殖和分化的影响。方法：雌性，19月龄SD大鼠24只，随机分为3组，分别为生理盐水组、淫羊藿低剂量组（1g/ml)、淫羊藿高剂量组（2g/ml），按0．5mg/100g的量，每日两次，连续灌胃1个月，处死前1h，再灌胃一次，取血清（灭活，过滤），最终稀释成1：20、1：40、1：80加入新生大鼠颅骨成骨细胞体系，用MTT法检测细胞增殖，另外，分别在第2天、第3天、第4天动态观察细胞生长过程，做生长曲线和检测分化指标ALP。结果：老年大鼠含药血清在1：80稀释比，MTT测得的OD值给药组高于对照组（P＜0．05）且以高剂量组高于低剂量组（P＜0．05），生长曲线表现为，在第2天各组无明显差别，从第3天开始，含药血清增殖速度加快，仍以高剂量组最快。ALP检测结果，含药血清OD值高于对照组（P＜0．05），但不同剂量之间没有差异（P＞0．05）。结论：老年雄性SD大鼠连续服用淫羊藿水提液1个月，其血清对新生大鼠颅骨成骨细胞有促进增殖和分化的作用。     

淫羊藿苷含药血清对体外培养大鼠颅骨成骨细胞增殖与分化的影响

目的 研究淫羊藿苷含药血清(Serum of rats administered icariin,SI)对体外培养大鼠颅骨成骨细胞(Rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖和分化成熟的影响.方法 以每1 kg体重0.25 g淫羊藿苷的剂量灌服成年大鼠制得淫羊藿苷含药血清,以灌服等体积生理盐水制得对照血清.分别以2.5%,5%和10%3种浓度加入ROB培养基,检测对成骨细胞增殖、碱性磷酸酶(ALP)活性和钙化结节数等的影响.结果 2.5%和5%SI均促进细胞的增殖,尤以5%浓度更为明显,该浓度含药血清提高ROB的ALP活性,增加Ⅰ型胶原表达,并显著提高钙化结节形成数量.结论 淫羊藿经口服后的代谢产物可刺激成骨细胞增殖,促进其分化成熟,是淫羊藿抗骨质疏松的有效成分.     

铁饱和乳铁蛋白对大鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的 探讨铁饱和乳铁蛋白对体外培养的大鼠成骨细胞增殖和分化的影响.方法 用酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞进行原代培养;乳铁蛋白螯合Fe~(2+)获得铁饱和乳铁蛋白;将其稀释到不同浓度作用于成骨细胞,四唑盐比色法(MTT)测定细胞增殖;碱性磷酸酶法(ALP)测定细胞碱性磷酸酶活性.结果 随着时间的增加,各浓度组均可促进成骨细胞增殖及增强碱性磷酸酶活性.其中100 μg/mL浓度组在72 h时细胞增殖数目最大、碱性磷酸酶活性最高,较对照组有统计学意义(P＜0.01).结论 铁饱和乳铁蛋白能促进大鼠成骨细胞的增殖和分化.     

晚期糖化终末产物对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响

目的　通过探讨晚期糖化终末产物（ Ａｄｖａｎｃｅｄ ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ ｅｎｄｐｒｏｄｕｃｔｓ Ａ Ｇ Ｅｓ）对大鼠成骨细胞增殖和分化的影响,以期揭示老年性骨质疏松症的发病机理。方法　体外合成 Ａ Ｇ Ｅｓ 以不同浓度加入成骨细胞培养体系,作用不同时间后,用 Ｍ Ｔ Ｔ 法测定细胞增殖活性,通过测定碱性磷酸酶观察成骨细胞的分化。结果　较低剂量 Ａ Ｇ Ｅｓ 在不同的培养时间均显著促进大鼠成骨细胞增殖。较高剂量（８００ μｇ／ｍ ｌ～１ ０００ μｇ／ｍ ｌ）只有在培养２４小时具有促增殖作用。低剂量 Ａ Ｇ Ｅｓ 促进成骨细胞分化,中等剂量促分化作用延迟,高剂量无促分化活性。结论　过多的 Ａ Ｇ Ｅｓ 相对降低成骨细胞的数量和活性,使骨形成作用小于骨吸收作用,导致骨质疏松     

不同剂量的X线对小鼠成骨细胞增殖与分化的影响

目的 探讨不同剂量的X线对小鼠成骨细胞增殖与分化的影响. 方法 将体外诱导培养的小鼠成骨细胞分为4组(n=3):对照组、0.1Gy组、0.5 Gy组、1.0 Gy组,4组细胞接种后24 h分别予以0、0.1、0.5、1.0 Gy剂量的X线照射,检测照射后l～3d细胞的增殖、细胞周期、凋亡情况,以及照射后7～14d碱性磷酸酶(ALP)、矿化结节形成与成骨相关基因的表达. 结果 对照组、0.1 Gy组、0.5 Gy组、1.0Gy组成骨细胞的细胞周期和凋亡变化、细胞增殖比较差异均无统计学意义(P＞0.05).X线照射后培养7、10、14 d,0.5 Gy组和1.0Gy组细胞外ALP活性均较对照组高,差异均有统计学意义(P＜0.05).X线照射后14d,0.5 Gy组和1.0 Gy组矿化结节数目明显多于0.1 Gy组和对照组.1.0 Gy组骨钙素和核心结合因子α1 mRNA的表达较对照组增加,0.5Gy组和1.0 Gy组骨保护素mRNA/核因子-kB配体受体激活物mRNA比率均较对照组大,以上项目比较差异均有统计学意义(P＜0.05). 结论 一定剂量范围(0.5～1.0 Gy)的X线照射在不影响成骨细胞增殖的情况下,可以促进成骨细胞的分化.     

乳铁蛋白促进成骨细胞增殖的最佳浓度及促进分化的最佳时间

目的 探索乳铁蛋白促进大鼠成骨细胞增殖的最佳浓度及1000μg/mL乳铁蛋白对促进成骨细胞分化的最佳时间。方法 用混合酶消化法分离大鼠颅盖骨成骨细胞进行原代培养;不同浓度乳铁蛋白干预成骨细胞,浓度分别为0、0.1、1、10、100、200、400、600、800和1000μg/mL,在1、3、5、7d后分别采用CCK-8法测定细胞增殖;用1000μg/mL的乳铁蛋白干预成骨细胞7、14、21d后,采用碱性磷酸酶染色法检测细胞内碱性磷酸酶的活性。结果 1.CCK-8法测定细胞增殖结果显示,低于100μg/mL浓度乳铁蛋白组其OD值随着浓度的增高而增高,而高于100μg/mL浓度乳铁蛋白组其OD值随着乳铁蛋白浓度的增高而递减;2.碱性磷酸酶染色法结果显示,1000μg/mL的乳铁蛋白在干预第21天时碱性磷酸酶活性最高。结论 100μg/mL乳铁蛋白是促进大鼠成骨细胞增殖的最佳浓度;1000μg/mL的乳铁蛋白促进成骨细胞分化作用呈时间依赖性。     

牵张应力环境下六味地黄汤含药血清对成骨细胞增殖分化影响的实验研究

目的:探讨不同时间、不同形变量的牵张应力环境下,六味地黄汤含药血清对体外培养的新生SD大鼠成骨细胞增殖分化的作用。方法:制备血清后,将六味地黄汤含药血清及空白对照血清分别作用于2组成骨细胞24h,然后采用频率0.5Hz、形变量分别为6%和12%的牵张应力,对六味地黄汤含药血清组及空白血清对照组的成骨细胞进行力学加载,分别于12、24h行碱性磷酸酶(ALP)活性测定(检测各组碱性磷酸酶活性)和MTT检测(检测受力后各组成骨细胞增殖的情况),并利用统计学软件对相关数据进行分析。结果:①在牵张应力环境下以0.5Hz的频率牵拉成骨细胞24h,6%与12%的形变量均能刺激成骨细胞增殖与分化,其中12%的形变量作用优于6%的形变量。②六味地黄汤含药血清短时间刺激对体外培养的SD大鼠成骨细胞尚未见促进增殖分化作用。结论:牵张应力环境能促进体外培养的成骨细胞增殖和分化,短时间六味地黄汤含药血清作用对成骨细胞影响不明显。     

静磁场不同处理时间对体外培养成骨细胞增殖与分化的影响

目的:研究静磁场不同处理时间对体外培养成骨细胞增殖与分化成熟的影响。方法:原代培养大鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分为9组,用磁场强度为3.9mT的静磁场,分别处理0(对照组)、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0h。倒置相差显微镜下观察细胞形态;48h后检测细胞增殖情况;第3、6、9、12天测定碱性磷酸酶活性和钙盐沉积量;第8天进行碱性磷酸酶染色;第10天进行茜素红钙化结节染色;在SMFs(static magnetic fields)处理0、24、48、72h后,Real-time PCR检测骨形态发生蛋白(bone morphogenetic protein-2,BMP-2),Runx-2,骨保护素(osteoprotegerin,Opg)的mRNA表达水平变化。结果:与对照组相比,磁场组均促进细胞增殖(P<0.01或P<0.05),也能明显促进其分化成熟,表现为提高细胞的ALP活性,促进钙盐沉积量,提高BMP-2、Runx-2和Opg的mRNA表达。结论:磁感应强度为3.9mT的静磁场处理体外培养成骨细胞2.5h时,其对成骨细胞的增值与分化效果最为明显。