癫痫持续状态大鼠模型的GABAA受体亚单位α1的mRNA表达及[^3H]Flunitrazepam受体配体结合的变化

目的本实验研究大鼠癫痫持续状态动物模型的海马等部位GABAA受体α1亚单位基因表达和受体一配体结合的变化。方法成年雄性大鼠经腹腔内注射320～340±5.87毫克/公斤毛果芸香碱(Pilocarpine)以制成癫痫持续状态动物模型，能在癫痫持续状态(定义为在皮质脑电图上显示痫性放电的至少40分钟的持续性痫性发作)下存活的大鼠在1小时和2小时后处于死，分别研究GABA受体基因表达和放射结合位点，用原位杂交方法来测定脑部mRNA水平，用［3H］flunirazepam标记GABAA受体benzodiazepam结合位点。结果动物痫性发作2小时后海马的CA1和CA3区域GABAA受体α1亚单位mRNA显著下降，但是齿状回的α1mRNA没有变化。［3H］flunirazepam标记受体-配体放射结合在持续2小时持续痫性发作后可见海马的CA1及CA3和齿状回中均见下降，1小时的持续痫性发作尚未引起海马区域的任何α1mRNA或［3H］flunirazepam受体-配体放射结合的任何改变，并用结晶染色1及2小时后的大脑海马部位。结论本研究结果提示大鼠的癫痫持续状态可诱发海马区GABAA受体α1基因表达的改变和［3H］flinirazepam受体-配体结合的下降，上述改变可能使大脑更容易形成慢性癫痫病灶。     

AY-9944大鼠失神样痫性发作模型的GABA_B受体R1亚单位基因表达改变

目的 :探讨 GABAB受体亚单位在失神癫痫发病机制中的作用。方法 :用原位杂交的方法测定 AY- 9944大鼠癫痫模型在失神样痫性发作时 GABAB受体亚单位 GBR1a及 GBR1b pan m RNA在鼠脑的表达。结果 :大脑皮层 ,海马 CA1,CA3及丘脑的 GBR1a m RNA表达均见不同程度的升高 ,而以大脑皮层及海马 CA3区尤为显著。GBR1b pan大脑皮层 ,海马及丘脑的 m RNA表达均见不同程度的升高 ,而以大脑皮层及海马 CA1区域的改变最为显著。结论 :GABAB受体亚单位 GBR1可能参与失神性癫痫的发病机制 .这种受体亚单位的改变为筛选有效的抗癫痫药物提供新的途径。     

海人酸致痫大鼠海马及颞叶皮质区域NMDA受体亚单位R1蛋白的表达

背景：研究表明天门冬氨酸受体亚单位R1与癫痫的发生有关,但其具体的表达情况与癫痫脑损伤的关系尚不明确。 目的：观察海人酸致痫大鼠海马及颞叶皮质区域天门冬氨酸受体亚单位1蛋白表达的变化。 设计、时间及地点：随机对照动物实验,于2002-03/2003-03在吉林大学基础医学院生理学和病理生物学教研室完成。 材料：兔抗天门冬氨酸受体受体亚单位1多克隆抗体购自武汉博士德生物科技公司。 方法：将80只雄性健康鼠龄22周的Wistar大鼠随机分为模型组70只和假手术组10只。模型组注射海人酸1 μL至右侧杏仁核,制备癫痫动物模型,分别于造模后2,6,24,72 h及7,15,30 d各取10只动物处死。假手术组在大鼠右侧杏仁核注入PBS 1 μL。 主要观察指标：致痫后2,6,24,72 h及7,15,30 d应用流式细胞仪技术及免疫组织化学的方法观察大鼠脑组织海马及颞叶皮质天门冬氨酸受体受体亚单位1蛋白表达的变化。 结果：假手术组海马各区及颞叶皮质有极少量的天门冬氨酸受体受体亚单位1蛋白阳性细胞分布,海人酸致痫后2 h大鼠海马各区及颞叶皮质天门冬氨酸受体受体亚单位1蛋白表达迅速增加,6 h明显升高,7 d略有下降（CA3区及颞叶皮质）但仍高于假手术组,并持续至30 d（P<0.01）。致痫后海马CA3区、齿状回与颞叶皮质相比,NMDAR1阳性细胞数增多 (P < 0.01)。 结论：海人酸致痫后大鼠海马及颞叶皮质天门冬氨酸受体受体亚单位1蛋白的表达水平均上调,在海马CA3及齿状回较为明显,并持续至致痫后的30 d。天门冬氨酸受体受体亚单位1可能参与了癫痫发生和癫痫脑的长时程的兴奋过程。     

海人酸致癫痫大鼠海马GABAB受体亚单位GBR1a mRNA表达的研究

目的　通过研究海人酸致癫痫大鼠海马 GABAB受体亚单位 GBR1a m RNA表达的变化 ,为进一步探明癫痫发病的受体分子生物学机制奠定基础。方法　在立体定位仪下 ,将海人酸注射至大鼠杏仁核制备癫痫模型。将大鼠随机分为正常组和海马致癫痫组 ,分别于不同时间取材 ,进行脑组织 GABAB受体亚单位 GBR1a m RNA原位杂交检测。结果　正常组海马各区均有极少量的 GABAB受体亚单位 GBR1a m RNA的分布 ;海人酸致癫痫组( 6 h,12 h,2 4h) GABAB受体亚单位 GBR1a m RNA水平显著高于对照组 ( P<0 .0 1)。结论　正常大鼠海马各区存在着少量的 GBR1a m RNA表达 ,海人酸致痫后 6 h,12 h,2 4h,GBR1a m RNA的表达水平上调。     

红藻氨酸致痫大鼠海马神经元凋亡及其与caspase-3关系的研究

目的　研究大鼠癫痫发作后海马神经元凋亡及其与天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 -3 (cysteinylasparate-specific proteinase,caspase-3 )表达的关系。方法　采用红藻氨酸 (kainic acid,KA)诱导大鼠癫痫模型 ,以原位末端标记 (TUNEL)及透射电镜检测癫痫发作后 6h及 1、3、7d海马神经元凋亡 ;半定量 RT-PCR及免疫组化法检测 caspase-3 m RNA及 caspase-3阳性表达。结果　KA致痫后 1 d,海马 CA1、CA3及 CA4区开始出现凋亡细胞 ,3 d时明显增多 ,7d时最多。 3个时间组相应区域间凋亡神经元数比较差异均有显著性 (P<0 .0 0 1 )。透射电镜观察可见典型的凋亡细胞形态学改变。 RT-PCR结果显示 ,KA致痫后 6h,海马组织 caspase-3 m RNA表达较对照组显著增高 (P <0 .0 5 ) ,1、3、7d caspase-3 m RNA仍持续高水平表达 (P <0 .0 5 )。免疫组化结果显示 ,KA致痫后 1 d,海马 CA1、CA3、CA4区开始出现 caspase-3阳性表达 ,3 d时阳性表达进一步增强 ,7d时表达最强。结论　凋亡参与 KA致痫大鼠癫痫发作后海马神经元迟发性死亡过程 ,caspase-3可能在癫痫后神经元凋亡过程中具重要的作用。     

低剂量伽玛刀照射对癫痫大鼠皮层及海马NMDA受体亚基表达的影响

目的观察低剂量伽玛刀照射对癫痫大鼠皮层和海马N-甲基-D-天氡氨酸(N-methyl-Daspartate,NMDA)受体亚基表达的影响。方法根据动物是否致痫及接受伽玛刀照射,将大鼠分为4组:对照组、伽玛刀组、药物致痫组、伽玛刀+药物组。腹腔连续注射戊四氮(pentylenetetrazole,PTZ)制备癫痫大鼠模型,以双侧额叶为照射靶区对大鼠进行低剂量伽玛刀照射,边缘剂量为15Gy。观察并记录各组大鼠伽玛刀照射前、后癫痫发作情况,并于伽玛刀照射后12周后留取脑组织,分别利用免疫组化及免疫蛋白印迹法对大鼠皮层及海马NMDA受体亚基NR1、NR2A和NR2B进行检测。结果对照组及伽玛刀组大鼠无痫性发作表现,与药物致痫组大鼠相比,伽玛刀+药物组大鼠经低剂量伽玛刀照射后12周,痫性发作明显减轻(P0.05)。与对照组相比,药物致痫组大鼠额叶皮层及海马CA1、CA3区NR1、NR2A和NR2B表达均明显增强(P0.05),阳性神经元数目及平均吸光度值均明显增加(P0.05);与药物致痫组比较,伽玛刀+药物组额叶皮层及海马CA1、CA3区NR1、NR2A和NR2B表达均明显降低(P0.05),阳性神经元数目及平均吸光度值明显减少(P0.05);伽玛刀组与对照组无明显差别(P0.05)。结论癫痫大鼠额叶皮层及海马NR1、NR2A及NR2B亚单位蛋白表达增强,低剂量伽玛刀照射可能引起癫痫大鼠皮层及海马NMDA受体亚基表达减少,这可能是低剂量伽玛刀抑制癫痫发作的分子机制之一。     

癫痫大鼠内嗅皮层神经元GABAA受体功能的研究

目的介绍建立氯化锂-匹鲁卡品致痫大鼠模型的方法,并且通过全细胞膜片钳记录,初步研究其内嗅皮层神经元GABAA受体功能。方法将所有SD大鼠随机分为对照组和实验组。实验组大鼠腹腔注射氯化锂以及匹鲁卡品,对照组注射生理盐水,观察其行为学特征,并用全细胞膜片钳记录GABAA受体电流的衰减趋势。结果与对照组相比,实验组癫痫大鼠内嗅皮层神经元的GABAA受体电流的衰减加剧。方差检验进行组间分析,分组的作用是有差异的(P<0.001),;固定时间,对每个时间点上的处理组和对照组进行t检验,分组都有统计学意义(P<0.001)。结论锂-匹罗卡品致痫大鼠内嗅皮层神经元的GABAA受体电流衰减的加剧,说明了锂、匹罗卡品造成大鼠癫痫的可能原因,也提示了GABAA受体参与了癫痫发作以及癫痫发作后的脑损伤。     

海人酸致痫大鼠海马结构GABAB受体亚单位表达的研究

目的：探讨海人酸诱导大鼠颞叶癫痫（EP）发作后2种γ-氨基丁酸（GABA）受体亚单位GABABR亚单位1a（GBR1a）和GABABR亚单位2（GBR2）在EP发生、发展中的作用。方法：运用原位杂交及免疫组化法，检测EP发作后GABABR亚单位mRNA及蛋白在海马的表达。结果：致痫早期CA1和CA3区2种亚单位mRNA表达持续低下后逐渐增加，DG区则暂时性下降后很快回升；而免疫反应早期却未见明显改变，随后CA1和CA3区表达处于低水平，DG区和颞叶皮质表达下降后很快恢复。结论：致痫后2种GABAB受体亚单位基因和蛋白表达上调为颞叶EP的内源性自我保护机制。     

海马神经元激活物致疒间大鼠大脑皮质和海马γ-氨基丁酸受体的表达

目的 观察大鼠海马神经元在激活物作用下γ-氨基丁酸（GABA。）受体的表达,进一步探讨癫痫发病机制。方法 将大鼠海马神经尢被戊四氮（PTZ）作用后的激活物（实验组）及无血清培养基（对照组）注入大鼠侧脑室后观察其行为、脑电图（EEG）及脑组织GABA,受体表达的变化。结果 实验组大鼠注射后15～30min出现Ⅱ～Ⅲ级惊厥反应,EEG呈短程中高幅尖波、尖慢复合波;对照组的行为及EEG未见异常;各时点实验组大鼠脑组织GABA、免疫反应阳性细胞表达明显低于对照组（均P〈0．05）,对照组GABA,免疫反应阳性细胞广泛分布于大脑皮质、海马回、齿状回。结论 海马神经元激活物具有明显致痫作用,其致痫效应与GABAA受体含量下降有关。     

癫痫持续发作时间与大鼠海马苔藓纤维发芽程度及自发性痫性发作的关系

目的探讨癫痫持续状态(SE)发作时间与致痫大鼠海马苔藓纤维发芽(MFS)程度及自发性痫性发作的关系。方法 104只雄性成年SD大鼠,随机分为对照组和3个SE实验组,建立氯化锂-重复低剂量匹罗卡品致痫大鼠模型;诱发SE30min(A组)、60min(B组)、90min(C组)后注射水合氯醛终止发作。各组大鼠自SE终止发作后于相同实验条件下普通饲养45d,观察大鼠行为及脑电图(EEG)的变化,记录自发性痫性发作的发生率。通过苏木精-伊红染色、Nissl染色和Timm硫化银组织化学染色方法观察各实验组海马MFS情况。结果氯化锂-重复低剂量匹罗卡品成功诱导大鼠SE的发生,发作程度均达Ⅳ级以上,EEG类似人类颞叶癫痫。80%的大鼠癫痫持续状态均发展为自发痫性发作,与SE时间无关。与对照组相比,实验A、B、C三组双侧海马CA3区均表现MFS(P0.05)。实验B组与A、C组相比,CA3区MFS明显增加(P0.05)。结论氯化锂-重复低剂量匹罗卡品可诱导SE,癫痫持续发作60min后终止的大鼠海马CA3区MFS明显增加,SE发作时间与海马MFS程度并不一定呈正相关。     

雌激素和姜黄素对海人酸杏仁核点燃大鼠行为学、脑电图及海马神经元损伤的影响

目的了解雌激素和姜黄素对海人酸(kainic acid,KA)杏仁核点燃大鼠癫痫发作的影响。方法给去势的雌性大鼠添加雌激素治疗,添加姜黄素治疗,或添加雌激素和姜黄素治疗,比较各组大鼠致痫后癫痫发作的行为学、脑电图和海马神经元损伤的变化。结果给雌激素治疗的大鼠重型发作(Racine 4/5级)评分最高,而雌激素加姜黄素治疗组评分最低(P<0.05)。脑电图的变化与行为学的改变基本一致。致痫后大鼠注射KA侧海马CA3区、CA4区可见到明显的细胞损伤,而该侧海马CA1区、齿状回区(DG)及对侧海马CA3区、CA1区及DG区神经元损害不明显。雌激素组大鼠双侧海马CA3区均出现加重的神经元损害,姜黄素组及雌激素加姜黄素组大鼠海马注射对侧CA3区存活神经元较雌激素组明显增加(P<0.01)。结论高水平的雌激素可以加重癫痫的发作,给姜黄素治疗可以减轻大鼠海马CA3区神经元损害。     

实验性癫痫大鼠颞叶及海马损害的病理学观察

目的　观察癫痫持续不同时间脑组织学损害特点。方法　Wistar大鼠 80只 ,以 1 0 %Pilocarpine 350mg/kg腹腔注射 ,诱发强直 痉挛全面大发作持续状态 ,脑标本制成 30 μm层厚的横轴位切片 ,HE染色 ,光镜下观察癫痫持续 5min至 60h颞叶、海马组织学改变 ,并对海马CA1 区和CA3 区神经元丢失做了定量计数。结果　癫痫持续 (SE) 5～ 30min,颞叶、海马区以神经元变性为主 ;SE 30min～ 3h,轻度神经元坏死、丢失及胶质增生 ;癫痫持续 3h～ 6h后 ,可见颞叶、海马区严重神经元脱失、胶质增生 (即近中颞叶硬化 ,MTS)和脑水肿 ;CA1 区和CA3 区神经元丢失与发作持续时间相关。结论　①随着癫痫持续时间延长 ,神经元损伤加重。②大鼠癫痫持续 3h以上 ,可形成MTS。③大鼠对pilocarpine诱导的持续性癫痫的神经元损伤的易感区依次为CA1 >CA3>齿状回 >CA2 >颞叶     

癫痫持续状态大鼠内质网应激预适应对海马神经元保护作用的实验研究

目的 探讨2-脱氧葡萄糖诱导内质网应激预适应对癫痫持续状态大鼠海马神经元的保护作用及其可能机制。方法 采用2-脱氧葡萄糖连续腹腔注射诱导内质网应激,并在此基础上制备氯化锂-匹罗卡品癫痫持续状态大鼠模型。Nissl染色观察癫痫持续状态后海马神经元损伤情况、计数海马CA1和CA3区存活神经元数目;免疫组织化学检测海马CA3区内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白78（GRP78）和X盒结合蛋白1（XBP-1）表达变化。结果 与癫痫持续状态组相比,癫痫持续状态后第7天时内质网应激预适应组大鼠海马存活神经元数目增加,以CA1区显著（t=5.353,P=0.000）。癫痫持续状态组大鼠发作后6 h,海马CA3区GRP78和XBP-1表达水平升高且高于对照组（均P=0.000）,于发作第2天达峰值水平（均P=0.000）;内质网应激预适应组大鼠发作前海马CA3区GRP78和XBP-1表达即高于对照组（均P=0.000）,GRP78在发作后24 h和2 d时维持在峰值水平（均P=0.000）,XBP-1在发作后24 h达峰值水平（P=0.000）;内质网应激预适应组大鼠海马CA3区GRP78和XBP-1表达在癫痫持续状态前,以及癫痫持续状态后6、12、24 h均高于癫痫持续状态组（均P=0.000）,至第2和7天时与癫痫持续状态组之间差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 经2-脱氧葡萄糖诱导的内质网应激预适应对癫痫持续状态大鼠海马神经元具有保护作用,而XBP-1-GRP78信号转导通路的活化可能是其机制之一。     

Semaphorin-3A与苔藓纤维出芽在毛果芸香碱致痫大鼠中的改变及意义

目的探讨海马Semaphorin-3A(Sema3A)与苔藓纤维出芽(MFS)在癫痫发病机制中的作用。方法通过小剂量多次腹腔注射氯化锂-毛果芸香碱建立癫痫大鼠模型,随机将大鼠分为生理盐水对照组和痫性发作组。痫性发作组分别于药物注射后1、5、7d及3、4周时间点,应用Western blotting法检测大鼠海马Sema3A的表达,同时采用neo-Timm银染观察海马MFS情况。结果生理盐水对照组Sema3A仅有少量表达,痫性发作组1、5d无表达,7d表达明显,3周后亦无表达;痫性发作组1、5d未见MFS,7d可见MFS至齿状回内分子层,3周后明显可见MFS至齿状回分子层。痫性发作组Timm评分与生理盐水对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论海马区Sema3A表达变化伴有MFS可能是癫痫发病机制的重要因素之一。     

实验性癫痫时大鼠海马内兴奋性氨基酸受体对内阿片肽含量的影响

应用免疫组织化学方法观察了青霉素致痫及海马内微量注射NMDA受体拮抗剂MK801（5－methy1－10，11－dihydro－5H－dibenzo[a，d]cycloheptan－5，10－iminemaleate)和非NMDA受体拮抗剂DNQX（6，7－dinitroquinoxaline－2，3－dione）后，大鼠海马内强啡肽A1~17和亮啡肽的含量变化。结果发现：在青霉素致痫4h后，海马苔样纤维和门区强啡肽A1~17的含量明显减少，海马CA1区．苔样纤维和门区的亮啡肽含量明显增加。在青霉素致痫前分别在海马内微量注射MK801（6μg）和DNQX（4μg），则在癫痫发作减弱同时，海马内强啡肽A1~17含量较单纯青霉素致痫组增加，亮啡肽含量下降。结果提示：青霉素致痫引起大鼠脑内强啡肽A1~17和亮啡肽含量变化，可能和NMDA受体和非NMDA受体的参与有关。     

马桑内酯致痫大鼠大脑皮层、海马NMDA受体亚单位1(NMDAR1)mRNA表达的变化

目的　探讨癫痫发病的分子机制。方法　采用原位杂交技术 ,研究了马桑内酯致痫大鼠大脑皮层、海马 N-甲基 - D-天门冬氨酸受体亚单位 1(NMDAR1) m RNA表达的变化。结果　马桑内酶致痫大鼠顶叶大脑皮层及海马齿状回 NMDAR1m RNA水平显著高于生理盐水对照组 (P<0 .0 1,P<0 .0 5 )。结论　马桑内酯上调脑组织内NMDAR1m RNA水平 ,此可能是其致痫及惊厥易感性增加的分子机制之一     

氯化锂-匹罗卡品致痫幼鼠海马结构损伤的形态学及苔藓纤维发芽研究

目的 观察幼鼠致痫后海马的组织病理学改变。方法 采用氯化锂－匹罗卡品腹腔注射制成幼鼠癫痫持续状态模型，应用常规病理及电镜观察海马结构的形态学改变，同时应用Timm组织化学染色方法进行苔藓纤维发芽的研究。结果 海马区神经元可见变性、坏死改变，以CA1区、CA3区为重。Timm染色见齿状回内分子层和CA3区下锥体层苔藓纤维发芽增加。结论 （1）氯化锂－匹罗卡品诱导的幼鼠癫痫持续状态可造成海马区神经元损伤；（2）幼鼠癫痫持续状态后海马CA1、CA3区神经元损伤较重；（3）幼鼠癫痫持续状态后可致苔藓纤维发增加。     

A型钾通道Kv4.1在戊四唑致痫大鼠海马区的表达

目的通过检测A型钾通道Kv4.1在戊四唑(PTZ)致痫大鼠海马CA1、CA3及齿状回区的表达变化,探讨A型钾通道在癫痫发病机制中的作用。方法 SD大鼠40只,随机分为正常组、致痫后1 h、24 h、72 h组。腹腔注射PTZ制备大鼠癫痫模型,应用免疫组化及Western Blot技术检测Kv4.1在各时间段海马CA1、CA3及齿状回区的蛋白表达情况。结果致痫组大鼠海马区Kv4.1蛋白表达水平在致痫后1 h、24 h、72 h三个时间段均明显高于正常组(P<0.05);各致痫组之间Kv4.1蛋白表达水平无明显差异(P>0.05)。结论大鼠癫痫模型海马区A型钾通道Kv4.1蛋白表达增多,Kv4.1的表达上调可能在癫痫的发生中起作用。     

颞叶癫痫大鼠海马TrkB mRNA及其蛋白表达的动态变化

目的 探讨颞叶癫痫发作大鼠海马TrkB mRNA及其蛋白表达的动态变化特征。方法 建立匹罗卡品(PILO)颞叶癫痢大鼠模型,应用原位杂交及免疫组织化学方法分别检测致(?)大鼠海马齿状回、CA3区及CA1区TrkB nRNA及其蛋白质表达的变化。结果 PILO致(?)后3～6 h,海马齿状回颗粒细胞层、CA1、CA3区锥体细胞层TrkB mRNA表达显著增高(P<0.01),稍后TrkB蛋白表达也随之增高。第7-30 d,TrkB mRNA及其蛋白在齿状回、CA3区呈现第二次表达增强。结论在癫(?)发作早期,TrkB表达增强,提示其可能参与急性癫痫状态的发生;后期表达增强则可能参与了海马的可塑性反应而与慢性自发性发作形成有关。     

迷走神经刺激对红藻氨酸致癫癎大鼠海马及齿状回NMDAR1的影响

目的:利用红藻氨酸(kainate,KA)致大鼠复杂部分性发作模型,观察海马及齿状回等易损脑区N-甲基-D-门冬氨酸受体1亚单位(NMDAR_1)的变化,以期进一步探明迷走神经刺激治疗癫(疒间)的作用机制。方法:免疫细胞化学法。结果:正常大鼠NMDAR_1阳性结构可见于海马各区及齿状回;KA给药后1h海马CA1、CA3、齿状回NMDAR_1的密度开始增高;3h达高峰,以后逐渐下降,24h后基本恢复正常;预先给予左侧迷走神经电刺激治疗的大鼠相应脑区NMDAR_1密度较KA致(疒间)组明显降低,具有统计学差异。结论:迷走神经刺激抑制癫(疒间)发作可能是通过降低易损脑区神经元NMDAR_1活性而发挥作用的。