T—ALL中两种新的TCRδ基因重排δRec151051—Jδ1和δRec151298—Jδ1

目的 分析T细胞急性淋巴细胞白血病（T-ALL）细胞中TCRδ基因新的重排形式及其在正常人外周血和胸腺细胞中的分布情况。方法 利用半巢式PCR扩增2例T-ALL、10例正常人外周血和7例正常人胸腺细胞DNA的TCRδ基因组片段,了解其重排情况,克隆性PCR产物进一步进行苷酸序列分析确定重排位置,并进一步经PT-PCR检测其重排基因的表达情况。结果 在2例T-ALL病人白血病细胞发现两种新的TCR δRec-Jδ1基因重排方式,称为δRec151051-Jδ1和δRec151298^-Jδ1,该新的TCR δRec基因重排同时见于大多数正常人外周血和胸腺。RT-PCR显示该两种TCR δRec-Jδ1基因重排的产物可见于2例T-ALL中,而正常人为阴性。结论 本研究发现两种新的TCR δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1 基因重排。该重排基因表达于T-ALL中,而正常人不表达该重排基因,提示该重排形式可能与T细胞白血病的形成有一定的关系。     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR δRec151051—Jδ1和δRec151298—Jδ1基因重排的分布特点

目的 分析正常人外周血和胸腺细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点。方法 利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞（PBMCs）、4例分选的外周血CD3^ T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCR δRec基因与Jδ1、Dδ3和ψJa重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率。结果 TCRδRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJa的重排和TCR δRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCR δRec151298与Jδ1和ψJa的重排则多见于胸腺细胞中,对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。结论 TCR δRec151051、TCR δRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJa的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCR δRec151051-Dδ3最常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCR δRec151298-Jδ1和TCR δRec151298-ψJa则主要见于未成熟T细胞中。     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR δRec151051-Jδ1和δ Rec151298-J δ 1基因重排的分布特点

目的分析正常人外周血和胸腺细胞中TCRδRec151051-Jδ1和δRec151298-Jδ1基因重排分布特点.方法利用半巢式和巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMCs)、4例分选的外周血CD3+T细胞和7例正常人胸腺细胞DNA的TCRδRec基因与Jδ1、Dδ3和ψJα重排的基因片段,从不同含量DNA的PCR分析,了解其重排分布频率.结果TCRδRec151051分别与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排和TCRδRec151298-Dδ3重排见于大多数外周血T细胞和胸腺细胞中,而TCRδRec151298与Jδ1和ψJα的重排则多见于胸腺细胞中.对不同含量的DNA的PCR分析显示δRec重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同.结论TCRδRec151051、TCRδRec151298与Jδ1、Dδ3和ψJα的重排均存在于多数正常人T细胞中,TCRδRec151051-Dδ3最常见于成熟和未成熟T细胞中,而TCRδRec151298-Jδ1和TCRδRec151298-ψJα则主要见于未成熟T细胞中.     

正常人T细胞和胸腺细胞中多种新的TCRδRec基因重排

利用巢式或半巢式PCR扩增10例正常人外周血单个核细胞(PBMC)、4例分选CD3~+细胞和7例正常胸腺细胞DNA中TCR δRec区与Jδ1、Dδ3和Ja重排的基因片段,分析正常人外周血T细胞和胸腺细胞中TCR δRec基因重排情况。克隆性PCR产物进一步进行核苷酸序列分析确定其重排位置。结果发现了4种新的TCR δRec重排,包括TCR δRec_(149321)-Jδ1、TCRδRec_(149820)-Jδ1、TCR δRec_(151657)(Nx)-Ja和TCR δRec_(153199)-Jδ1等,其中以TCR δNx的重排最多见,通过利用不同模板DNA的PCR分析发现δRec重排在外周血和胸腺细胞中有所不同。结果显示TCR δNx-Jδ1重排在成熟和不成熟T细胞发生频率均较高,而TCR δNx-Dδ3重排在不成熟T细胞中发生率较高。但所有重排均不表达于mRNA中。本研究结果为TCR δ基因重排的研究补充了一些新的数据。     

TCR Dβ-Jβ sjTRECs检测方法的建立和应用

目的：建立检测TCR Dβ-Jβ sjTRECs的方法，并了解不同T细胞受体Dβ-Jβ之间T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)在胸腺细胞和外周血T细胞中的形成情况。方法：利用巢式PCR分别扩增10例正常人外周血单个核细胞和3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的sjTRECs的情况，PCR产物进一步进行克隆和序列分析以确定结合区的位置。结果：可检测到Dβ1与5个Jβ1基因片段、Dβ2与4个Jβ2基因片段分别形成的sjTRECs，其中以Dβ1-Jβ1S1、Dβ1-Jβ1S2和Dβ2-Jβ2S2sjTRECs最常见，PCR产物经克隆和序列分析证实其形成Dβ-jβsjTRECs的情况。结论：成功地建立了检测Dβ-Jβ-sjTRECs的方法，为分析各TCRβ亚家族的sjTRECs含量和确定TCRβ naive细胞提供了新方法。     

T 细胞受体δ、γ基因在小儿急性白血病中的变化

本文在细胞形态,表面抗原分析的基础上,对20例小儿急性白血症细胞进行TCRδ和γ基因结构的分析。11例属分化早期的白血病中有9例发生TCRδ基因的重排和缺失,其中5例也有TCRγ基因的重排。在5例属非淋巴细胞系的白血病中有3例发生TCRδ基因的重排.3例粒细胞性白血病细胞的TCR基因(δ和γ)均为胚系。有一例细胞表型仅有CD_2表达的白血病细胞,其TCR 基因(δ和γ)也为胚系。结果还显示:TCRδ基因结构发生变化的白血病细胞均有CD_(10)抗原表达。研究提示:TCRδ基因的重排不显示严格的细胞特异性,但是TCR 基因的变化与淋巴细胞系白血病细胞某些表面抗原的表达存在某种联系。     

T细胞受体Dβ-JβsjTRECs连接区多样性

目的了解T细胞受体Dβ-Jβ重排形成的T细胞受体删除DNA环(sjTRECs)连接区序列特点。方法利用巢式PCR分别扩增10例正常人外周血单个核细胞和3例正常胸腺细胞DNA中不同的Dβ片段和Jβ重排时形成的TRECs的情况,PCR产物进一步进行克隆和序列分析以确定结合区的序列。结果获得Dβ1与5个Jβ1基因片段、Dβ2与4个Jβ2基因片段分别形成的sjTRECs连接区序列,部分所形成sjTRECs的Jβ与Dβ之间存在核苷酸的随机插入(N区)等多样性。结论Dβ-Jβ sjTRECs的连接并非简单的头对头拼接方式,部分连接时存在N区而形成结合区多样性。     

正常人外周血和胸腺T细胞中TCR DδX基因重排的特点

目的：分析正常人外周血和胸腺细胞中 ＴＣＲ ＤδＸ基因重排分布特点。方法：利用半巢式 ＰＣＲ扩增 １０例正常人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣｓ）、４例分选的外周血 ＣＤ３＋Ｔ细胞和 ７例正常人胸腺细胞 ＤＮＡ的 ＴＣＲ ＤδＸ基因与ＪδＸ、Ｄδ３和　Ｊａ重排的情况，从不同含量 ＤＮＡ的 ＰＣＲ分析，了解其重排分布频率。结果：ＴＣＲ ＤδＸ分别与 ＪδＸ、Ｄδ３和　Ｊａ的重排均可见于多数外周血Ｔ细胞和胸腺细胞中，对不同含量的ＤＮＡ的ＰＣＲ分析显示ＴＣＲ ＤδＸ重排的分布频率在外周血和胸腺细胞有所不同。结论：ＴＣＲ ＤδＸ－　Ｊａ的重排最常见于成熟和未成熟Ｔ细胞中，而ＴＣＲ　ＤδＸ－Ｄδ３则在未成熟Ｔ细胞中多见。     

利用Fine-tiling aCGH分析TCR基因重排鉴定T细胞白血病克隆

目的:建立基于分析T细胞受体(TCR)基因重排而确定T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)克隆的新方法,为研究T-ALL中涉及TCR基因位点的染色体易位提供基础。方法:提取1例T-ALL患者外周血单个核细胞(PBMC)的总DNA,利用精细定位的寡核苷酸阵列比较基因组杂交(fine-tiling aCGH)分析样本与对照组基因组DNA的差异,了解不同染色体上可能的断裂点和具体的位点,根据所提供的初步结果,从断裂点涉及的基因序列设计特异引物,采用连接介导PCR(LM-PCR)和序列分析等方法去找出与之发生重排的基因序列。并进一步通过RT-PCR检测TCR基因表达。结果:该例T-ALL患者fine-tiling aCGH结果显示14染色体TCRα/δ基因座出现4个断裂点,分别对应TCR Vδ1、Vδ2、Jδ1和Jδ2基因位点。通过LM-PCR、测序及序列分析,该例T-ALL患者的PBMC中TCR基因涉及Vδ1Dδ2Dδ3 Jδ1、Vδ2Dδ3 Jδ2重排。RT-PCR的结果也验证T-ALL表达该TCR基因重排。结论:结果表明,利用fine-tiling aCGH及LM-PCR技术可以找出TCR基因重排,并且该方法是可靠的,也是发现一些涉及TCR位点的融合基因的一条途径。     

TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在正常人胸腺、脐血和外周血中的检测情况

目的建立检测TCR Vβ2、Vβ5和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的方法,分析其在胸腺细胞、脐血和正常人外周血T细胞中的存在情况,从而了解近期胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞的情况。方法利用半巢式PCR分别扩增3例正常胸腺细胞、10例脐血和10例正常人外周血单个核细胞DNA中的Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1基因片段重排时产生的sjTRECs。结果在正常胸腺细胞、脐血和正常人外周血单个核细胞中均可检测到Vβ2、Vβ5和Vβ17与Dβ1片段形成的sjTRECs,其中胸腺细胞和脐血单个核细胞DNA中3种删除环的检出率均为100％,正常人外周血3种删除环的检出率分别为50％、70％和40％。结论成功地建立检测3种Vβ-Dβ1 sjTRECs的方法,并提供了Vβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs在胸腺、脐血和外周血中的检测情况。     

非霍奇金淋巴瘤的IgH和TCRδ基因重排

目的：探讨非霍奇金淋巴瘤（NHL）免疫球蛋白重链（IgH）和T细胞受体δ链（TCRδ）基因重排情况。方法：用半重叠式聚合酶链反应（PCR）方法检测IgH及TCRδ基因重排。结果：57例NHL中41例（72％）发生IgH基因重排，30例（53％）出现TCRδ基因重排。结论：检测克隆性基因重排可以作为诊断NHL有效基因标志，NHL中存在系列不忠实现象。     

T-ALL患者外周血TCRγ/δ T细胞的分布和增殖特点

目的:了解T细胞急性淋巴白血病(T-cell acute lymphocytic leukemia,T-ALL)患者外周血TCR Vγ和Vδ亚家族T细胞的分布和克隆情况。方法:利用RT-PCR扩增9例T-ALL患者和10例正常人外周血单个核细胞中3个TCR Vγ和8个Vδ亚家族基因的互补决定区3(CDR3),了解TCR亚家族Vγ和Vδ亚家族细胞的分布;阳性产物进一步经基因扫描分析CDR3长度,从而了解其克隆性。结果:9例T-ALL患者3个Vγ亚家族的表达率都明显低于正常人Vγ亚家族的表达率(P<0.05);Vδ亚家族中只有Vδ1和Vδ3的表达率低于正常人(P<0.05)。3例T-ALL患者出现克隆性增殖的γ/δT淋巴细胞。结论:T-ALL患者外周血TCR Vγ和部分Vδ亚家族谱系出现限制性表达和克隆性增殖。同时存在克隆性增殖γδ T细胞提示可能为γδ 白血病性T细胞克隆。     

CML中TCRVβ2、Vβ5和Vβ17亚家族sjTRECs的检测情况

目的检测慢性粒细胞白血病(CML)患者外周血TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs的存在情况,从而了解相应3种Vβ亚家族naive T细胞的近期胸腺输出情况.方法利用半巢式PCR扩增9例CML患者外周血单个核细胞(PBMC)、CD4+细胞和CD8+细胞DNA的Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs,13例正常人外周血作为对照.结果 TCR Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs在部分正常人和1例CML患者CD4+或CD8+细胞可以检测到,而在CML患者PBMC中则未能检测到.结论在CML患者Vβ2-、Vβ5-和Vβ17-Dβ1 sjTRECs检出率低,与其胸腺输出相应的TCR Vβ亚家族naive T细胞水平低下有关.     

APL相关TCRVα6、Vα10和Vβ23寡克隆T细胞CDR3序列分析

目的:分析急性早幼粒细胞白血病(APL)患者外周m TCR Vα和Vβ克隆性增殖T细胞及CDR3序列特点.方法:利用RT-PCR法扩增1例APL患者外周血单个核细胞中29个TCR Vα基因和24个Vβ基因CDR3,阳性PCR产物进一步经荧光标记和基因扫描分析确定其CDR3长度,了解其克隆性;寡克隆的PCR产物再进行CDR3区序列分析.结果:该例APL患者外周血T细胞分别在TCR Vα6、Vα10和Vβ23亚家族中出现寡克隆性增殖T细胞,经序列分析显示TCR Vα6、Vα10和Vβ23亚家族基因序列分别为Vα6NJα17、Vα10NJα35和Vβ23NDβ1NJβ2.7,其CDR3区氨基酸序列分别为CAMRENSAGNK,YLCAGDELLWECA,CASSSKWAG-GTYEQY,该3个TCR基因已被GenBank收录(登陆号:EU544946、EU544947和EU647219).结论:APL患者外周血T细胞出现的TCR Vα6、Vα10和Vβ23克隆性增殖T细胞可能是机体对抗白血病细胞所引起的抗原特异性免疫反应;这3个独特TCR重排序列将进一步作为开展APL特异性免疫治疗研究提供资料.     

MDS患者外周血中TCR Vβ1-24-Dβ1 sjTRECs的分析

目的检测骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血中TCRVβ1-24-Dβ1 sjTRECs的存在情况。方法利用半巢式PCR扩增9例MDS患者外周血单个核细胞DNA中TCRβ链基因重排时形成的T细胞受体DNA删除环（Vβ1-24-Dβ1 sjTRECs）,10例正常人外周血作为对照。结果所有TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组外周血T细胞DNA中均有检出,除TCR Vβ12-Dβ1sjTRECs和TCRβ19-Dβ1sjTRECs外,其余TCRVβ-Dβ1 sjTRECs在MDS患者外周血T细胞DNA中均可检。大多数TCRVβ1-24-Dβ1sjTRECs在正常人组中的检出率较MDS患者高,但其中只有6种TCRVβ-Dβ1sjTRECs（分别是TCRVβ3、12、13、15、21、22-Dβ1sjTRECs）的检出率差异有统计学意义。结论本研究率先提供了MDS患者外周血T细胞中TCRVβ-Dβ1sjTRECs的存在情况。MDS患者TCRVβ-Dβ1sjTRECs出现频率低于正常人提示其胸腺近期输出功能存在部分缺陷情况。     

皮下脂膜炎性T细胞性淋巴瘤的临床特征及分子生物学特点

目的：对皮下脂膜炎性T细胞淋巴瘤(SPTCL)的临床特征、病理、免疫表型及分子生物学特点进行研究。方法：临床观察及实验室、病理检查研究SPTCL的临床、病理特点，免疫表型通过LCA、CD3、UCIL、L26单抗进行石蜡免疫过氧化物酶染色、用αβTCR、γδTCR抗体进行冷冻切片免疫过氧化物酶的染色，用识别Vδ^1、Vδ^2的抗体进行γδTCR亚型分析，PCR检测SPTCL患者TCR基因重排。结果：7例SPTCL患者均有皮下结节、高热、体重下降，5例出现嗜血细胞综合征，7例SPTCL患者均有电介质、酸碱平衡失调及酶学检查的异常。7例SPTCL患者的病理均在脂肪组织内见大量异型淋巴细胞浸润，均表达LCA、CD3、UCHL，不表达L26。4例SPTCL患者中有3例表达γTCR，1例表达αβTCR，3例γδTCR患者均表达Vδ^2 ，4例有3例出现TCRγ基因重排。结论：SPTCL大多病情严重，肿瘤细胞来源于T细胞系的皮肤淋巴细胞组织相关的Vδ^2 细胞，可以出现TCRγ基因重排。     

利用T细胞受体变异β基因谱系分析T细胞急性淋巴细胞白血病病人T细胞克隆性

目的:分析T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)病人的T细胞克隆性.方法:利用RT-PCR方法分析6例T-ALL和10例正常人外周血单个核细胞中24个T细胞受体变异β(TCR Vβ)基因的CDR3长度,PCR产物再进一步进行基因扫描和序列分析.结果:3例病人的某些TCR Vβ亚家族T细胞呈单克隆或寡克隆性增殖,主要为Vβ2、3、6、9、21和24.其它3例及正常人均表现为多克隆性增殖T细胞.结论:部分T-ALL来自于TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞.该方法有助于临床上检测微小残留病变.     

利用T细胞受体变异β基因谱系分析T细胞急性淋巴细胞白血病病人T细胞克隆性

目的:分析T细胞-急性淋巴细胞白血病(T-ALL)病人的T细胞克隆性。方法:利用RT-PCR方法分析6例T-ALL和10例正常人外周血单个核细胞中24个T细胞受体变异β(TCR Vβ)基因的CDR3长度,PCR产物再进一步进行基因扫描和序列分析。结果:3例病人的某些TCR Vβ亚家族T细胞呈单克隆或寡克隆性增殖,主要为Vβ2、3、6、9、21和24。其它3例及正常人均表现为多克隆性增殖T细胞。结论:部分T-ALL来自于TCR Vβ亚家族克隆性增殖T细胞。该方法有助于临床上检测微小残留病变。     

脐带血和成人外周血TCR Vγ和Vδ亚家族的分布和克隆性研究

目的探讨脐带血和健康成人外周血TCR Vγ和Vδ基因谱系的分布情况及克隆性特点。方法利用RT-PCR法检测16例脐带血和10例健康成人外周血单个核细胞TCRVγ(Ⅰ～Ⅲ)和Vδ(1～8)各亚家族的表达,了解各亚家族的分布和利用情况;阳性的PCR产物进一步经荧光素标记和基因扫描分析其CDR3长度,了解T细胞的克隆性。2例成人胸腺组织作为对照。结果脐带血T细胞的Vγ基因表达主要集中在VγⅠ和VγⅡ,而Vδ基因则平均表达(4.63±1.03)个亚家族,主要集中在Vδ1、2、3、8中表达。健康成人外周血T细胞除了1例不表达VγⅢ之外,其余均表达全部Vγ基因,而在Vδ基因中则平均表达(3.6±0.52)个亚家族,并以Vδ1、2和3为多见,Vδ4和Vδ5未能在外周血中检测到,而Vδ5和Vδ8的表达则明显低于脐带血(P=0.009,P=0.001);2例成人胸腺组织表达除Vδ4和Vδ6之外的其他Vγ和Vδ亚家族。基因扫描显示16例脐带血中有1例在VγⅠ和5例分别在Vδ2、Vδ4和Vδ6中出现寡克隆性,10例成人外周血中有9例在不同亚家族中出现克隆性T细胞,其余均呈多克隆性。结论脐带血TCRVγ和Vδ亚家族T细胞和健康成人外...     

检测人TCR BD基因重排时RSS断裂末端的LM-PCR方法的建立

目的：建立检测人T细胞TCR BD基因（Diversity Gene）经历重排的连接介导PCR方法（Ligation．MediatedPCR，LM-PCR），为T细胞重排和疾病的关系研究提供基础。方法：在人TCRβ链BD1与BD25′端重组信号序列（RSS）前，BD1与BD23′端RSS后各设计两套用于巢式PCR引物；设计并合成和双链RSS平断裂末端相接的特殊接头（BW Linker），提取胸腺组织、正常人和急性T淋巴细胞白血病（T-ALL）外周血单个核细胞（PBMC）样本总DNA，和BW-linker连接，进行巢式PCR，PCR产物琼脂糖电泳分析，阳性产物做胶回收，并克隆测序鉴定。结果：在1例胸腺组织提取的总DNA中证实存在BD1和BD25′和3′的RSS断裂末端，在2例T-ALLs的PBMC中检测到BD25′和3′的RSS断裂末端，2例正常人PBMC中未能检测到RSS断裂末端，阳性的LM-PCR产物通过测序鉴定，和基因组中序列完全相符合。结论：1例胸腺组织和2例T-ALL的PBMC中检测到RSS断裂末端，提示TCRBD基因正经历重排，测序结果表明建立的监测TCR重排的LM-PCR方法可靠，可用于T细胞重排模型和相关疾病的机制研究。