荧光定量聚合酶链反应检测巨细胞病毒DNA及其临床应用

人类巨细胞病毒(HCMV)在人群中感染率较高,是先天性感染中最常见的致畸致残的病毒.临床确诊比较困难.我们设计合成巨细胞病毒(HCMV)荧光定量PCR(Fluorescence Quantitative PCR,FQ-PCQ)诊断试剂盒,以一完全闭管式的PCR和荧光杂交技术相结合所产生的实时检测定量PCR方法,检测了301例产妇的血标本,324例新生儿脐血标本和256例儿童血标本HCMV-DNA的含量,同时与ELISA方法和常规PCR进行比较,探讨该方法在巨细胞病毒的临床诊断中的应用价值.     

人巨细胞病毒IE抗原快速免疫荧光检测法在先天性人巨细胞病毒感染筛查中的应用

目的探讨人巨细胞病毒(HCMV)IE抗原快速免疫荧光检测法在先天性HCMV感染筛查中的应用价值。 方法收集2017年1至12月安徽省妇幼保健院产科352例新生儿唾液标本和足底干血片标本。使用病毒分离培养和HCMV IE抗原快速免疫荧光检测法检测新生儿唾液标本;使用荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测足底干血片标本HCMV-DNA。以病毒分离培养的结果作为标准,比较HCMV IE抗原快速免疫荧光检测法和足底干血片标本荧光定量PCR法在检测先天性HCMV感染中的检验效能。 结果352例唾液标本共分离5例阳性标本,阳性率为1.42%;而荧光定量PCR检测足底干血片标本仅4例阳性,阳性率为1.14%;HCMV IE抗原快速免疫荧光检测法检测的结果与病毒分离完全一致。足底干血片荧光定量PCR检测的敏感度为80%,特异度为100%;HCMV IE抗原快速免疫荧光检测的敏感度为100%,特异度为100%。HCMV IE抗原快速免疫荧光检测的敏感度高于足底干血片荧光定量PCR检测,但差异无统计学意义(Z＝0.94,P＝0.350)。 结论HCMV IE抗原快速免疫荧光检测可能是更准确的先天性HCMV感染早期诊断方法。     

巢式PCR检测外周血血浆和白细胞中人巨细胞病毒核酸

目的比较用巢式PCR检测外周血血浆和白细胞中人巨细胞病毒（HCMV）DNA的阳性率。方法93例外周血标本分离血浆和白细胞，分别提取DNA后进行巢式PCR检测，同时进行荧光定量PCR以及HCMV IgM测定。结果白细胞HCM VDNA检出率为32．3％，明显高于血浆的16．1％（P〈0．017），巢式PCR检测敏感度高于荧光定量PCR（检出率8．6%，P〈0．017）；9例具有系列标本的患者中，用白细胞DNA检测的阳性例数和频度均高于血浆DNA。结论检测HCMV DNA时，以白细胞作为检测材料的阳性率高于血浆，巢式PCR敏感度高于荧光定量PCR。     

造血干细胞移植患者人巨细胞病毒监测的临床意义

目的探讨荧光定量聚合酶链反应对造血干细胞移植患者人巨细胞病毒活动性感染的早期诊断价值。方法收集40例造血干细胞移植患者共416份血标本,应用实时荧光定量PCR方法动态监测血浆HCMV—DNA载量,并与60例健康体检者血浆HCMV—DNA载量对比分析。结果416份血标本中96份阳性,阳性率23．1％,病毒载量介于5．0x10^2-1．0x10,拷贝／ml之间。结论实时荧光定量PCR方法检测HCMV—DNA适用于造血干细胞移植后巨细胞病毒活动性感染的早期诊断。     

荧光定量PCR检测HCMC DNA的临床意义与探讨

本试验采用荧光定量聚合酶链反应（fiuorescence quantitativePCR,FQ—PCR）法检测人巨细胞病毒（HCMV）DNA,并探讨其在HCMV感染诊断和治疗中的应用价值。     

FQ-PCR技术检测新生儿黄疸患者外周血巨细胞病毒

目的采用实时荧光定量PCR技术同时检测新生儿黄疸患者外周血白细胞和血浆中巨细胞病毒，并分析两者之间的相关性。方法采用0.8％氯化胺（NH4Cl）裂解红细胞法提取新生儿黄疸患者外周血白细胞，然后进行实时荧光定量PCR检测，同时检测血浆中巨细胞病毒。结果79例标本中白细胞和血浆均检出巨细胞病毒7例，阳性率为8．86％；白细胞巨细胞病毒定量平均值为4．16（对数值）；血浆平均值为2．37（对数值），经相关性分析，两者呈正相关（r=0．78）。结论荧光定量PCR检测巨细胞病毒快捷、简便、高效；提取白细胞扩增和血浆水平高度相关。     

荧光定量PCR快速检测婴儿中枢神经系统巨细胞病毒

目的探讨荧光定量PCR技术快速诊断中枢神经系统损伤婴儿人巨细胞病毒(HCMV)感染的临床价值,为婴儿HCMV先天性感染的快速特异性诊断提供实验依据。方法分别用实时荧光定量PCR技术和ELISA法检测84例疑似先天性HCMV感染的中枢神经系统损伤婴儿中尿液HCMV-DNA及血清HCMV-IgM。结果 84例中枢神经损伤婴儿尿液中,29例HCMV-DNA阳性,检出率为34.5%。活动性HCMV感染病毒载量介于5.9×105～7.6×102 copy/mL。HCMV-IgM阳性15例,检出率17.8%。两种方法阳性检出率差异有统计学意义(χ2=6.87,P<0.01)。结论婴儿先天性HCMV感染是引起其中枢神经系统损伤的重要原因之一。在连续动态检测患儿HCMV多种指标时,实时荧光定量PCR法可快速、特异地定量检测HC-MV-DNA,有效反映体内HCMV的活动性感染,在HCMV感染的快速诊断、疗效观察方面具有更好的临床应用价值。     

人巨细胞病毒感染的检测及临床表现分析

目的 探讨血清人巨细胞病毒（HCMV）-IgM和尿液HCMV-DNA检测对婴、幼儿HCMV感染临床诊断的意义.方法 选择67例确诊为HCMV感染的婴、幼儿,分别采用酶联免疫吸附测定（ELISA）、荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测血清HCMV-IgM及尿液HCMV-DNA.结果 HCMV感染的临床表现以肺炎和肝功能异常多见.67例确诊患儿中,血清HCMV-IgM检测的阳性检出率为71.6%,尿液HCMV-DNA检测的阳性检出率为88.1%.二者联合检测,其阳性检出率为95.5%.结论 血清HCMV-IgM和尿液HCMV-DNA联合检查可提高临床诊断的准确性,有助于早期诊断.     

造血干细胞移植中人巨细胞病毒检测：荧光定量聚合酶链反应的早期诊断价值

背景：动态监测造血干细胞移植受者血浆人巨细胞病毒载量,快速筛选出早期活动性人巨细胞病毒感染者,进而指导临床用药,提高造血干细胞移植的成活率。目的：探讨荧光定量聚合酶链反应对造血干细胞移植患者人巨细胞病毒活动性感染的早期诊断价值。方法：收集41例造血干细胞移植患者共656份血标本,应用实时荧光定量PCR方法动态监测血浆人巨细胞病毒DNA载量,并与60例健康体检者血浆人巨细胞病毒DNA载量对比分析。结果与结论：656份血标本中96份阳性,病毒载量介于5.0×10^2-1.0×10^7 IU/mL之间。治疗有效者人巨细胞病毒DNA迅速转阴,治疗耐药者持续阳性,12例连续阳性者2例死于巨细胞病毒活动性感染。实时荧光定量PCR方法检测人巨细胞病毒DNA适用于造血干细胞移植后巨细胞病毒活动性感染的早期诊断。     

荧光定量PCR与PP65抗原检测在诊断儿童巨细胞病毒活动性感染的比较

目的用实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和pp65抗原检测儿童人巨细胞病毒(HCMV)感染,并对其诊断HCMV活动性感染进行比较评估。方法分析924例HCMV血清学检测阳性的儿童的全血HCMV-DNA荧光定量PCR及HCMV-pp65抗原检测结果,与临床诊断的符合程度进行比较。结果全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的一致率为81.17%,其标准误为0.39,Kappa值为0.60;PCR检测HCMV感染的灵敏度为98.4%,特异度为97.3%,Youden指数为0.957,PVP和PVN分别为0.961和0.989;pp65抗原检测用于检测HC-MV感染的灵敏度为59.2%,特异度为100%,Youden指数为0.592,PVP和PVN分别为1.00和0.782。结论全血HCMV-DNA荧光定量PCR和pp65抗原检测的结果有较好的一致性,诊断HCMV感染PCR检测的灵敏度较pp65抗原检测的灵敏度要高,而后者的特异度较前者高。二种方法都可用于CMV活动性感染的诊断。     

黄疸患儿尿中人巨细胞病毒检测

人巨细胞病毒（HCMV） 感染可造成新生儿的多器官、多系统受累.据文献报告,活产新生儿感染HCMV占1%～2%[1].黄疸是HCMV感染累及消化系统的最常见临床表现. 研究表明, HCMV可侵犯肝细胞和肝内外胆管系统, 是引起新生儿黄疸的重要病原[2], 因此检测黄疸患儿的HCMV, 对于明确临床诊断和治疗都具有重要意义.本研究采用荧光定量PCR（FQ-PCR）方法检测1 096例黄疸患儿和500例对照组患儿尿液HCMV-DNA, 以期了解黄疸患儿HCMV的感染情况.     

住院患儿血清巨细胞病毒核酸与IgM抗体检测比较研究

目的：比较荧光定量 PCR 法检测人巨细胞病毒核酸（HCMV-DNA）与酶联免疫法检测人巨细胞病毒 IgM 抗体（HCMV-IgM）在住院患儿巨细胞病感染诊断中的价值。方法采用2种不同方法对217例住院患儿血清标本进行同步检测,然后进行结果分析。结果住院患儿 HCMV-DNA 阳性率为22.1％（48／217）,HCMV-IgM 阳性率为27.2％（59／217）,2种方法检测总符合率为87.6％。结论 HCMV-DNA 和 HCMV-IgM 检测对于住院患儿 CMV 感染的诊断有较高的符合率,对 IgM 抗体检测阴性而临床疑似 CMV 感染的患儿,可进行 HCMV-DNA 检测,以提高 CMV 感染的诊断准确率。     

应用半巢式核酸荧光定量技术检测肾移植术后人巨细胞病毒感染

目的：建立一种新的用于肾移植术后人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）感染的快速定量诊断方法,方法：采用半巢式酸荧光寂量技术（ＡｍｐｌｉＳｅｎｓｏｒ－ＰＣＲ）检测已知含量的ＨＣＭＶ－Ａ在６９标准病毒株,无关病毒,无关细菌及临床血标本的ＨＣＭＶ－ＤＮＡ和质粒标准品,以确定该方法的敏感性,特异性和定量的准确性。结果：对已知含量的标准病毒株的定量检测结果与其已知含量基本一致;无关病毒包括单纯疱疹病毒１型（ＨＳＶ－１）     

应用FQ—PCR和ELISA方法检测人巨细胞病毒感染的临床价值

目的探讨检测巨细胞病毒（CMV）的方法学及在临床诊断与治疗中的应用价值方法对456例临床疑似HCMV感染的患者分别应用FQ-PCR、ELISA法检测其尿液、血液HCMV-DNA及血清HCMV-IgM抗体水平。结果尿液HCMV-DNA阳性281例,血HCMV-DNA阳性238例,HCMV-IgM抗体阳性144例 HCMV-DNA阳性者中,血清IgM抗体阳性HCMV-DNA拷贝数对数均值高于阴性（P〈0.01）。结论尿液、血液HCMV-DNA定量和血清HCMV-IgM抗体联合检测有助于HCMV感染的诊断。     

婴儿血液、尿液和产妇母乳巨细胞病毒DNA检测结果的相关性

目的探讨婴儿血液、尿液及其母亲母乳的人巨细胞病毒(HCMV)DNA检测结果的相关性及婴儿HCMV感染的诊断价值。方法收集258例婴儿血液、尿液和对应母乳的HCMV标本,采用全自动荧光定量PCR法进行检测。结果 258例婴儿血液、尿液及其母亲母乳的HCMV DNA阳性率分别为28.68%、48.06%、61.24%,血液和尿液联合检测HCMV DNA阳性率为55.04%,3种标本联合检测HCMV DNA阳性率为74.41%。3种标本HCMV DNA检测结果具有相关性,但差异无统计学意义(χ_(乳-血)~2=12.84,P=0.219;χ_(乳-尿)~2=29.02,P=0.318;χ_(尿-血)~2=63.09,P=0.444)。结论婴儿血液、尿液及其母亲母乳联合检测可能对婴儿相关疾病溯源和HCMV感染起到互补诊断,具有重要的临床意义。     

HCMVpp65抗原和IgM抗体检测诊断儿童HCMV活动性感染的比较

目的：比较人巨细胞病毒(HCMV)pp65抗原(以下简称pp65)检测和血清HCMV-IgM抗体(以下简称IgM抗体)检测两种方法对儿童HCMV活动性感染的诊断实用意义。方法：采集临床疑似HCMV活动性感染儿童血标本(共251份)，分离血浆和多形核白细胞，分别用于IgM抗体检测和pp65检测。同时进行荧光定量PCR检测HCMVDNA，与pp65抗原作平行比较。结果：pp65抗原检测的结果与IgM抗体检测的符合率为73.3％。与HCMV DNA检测相比pp65抗原检测法的符合率、特异度和敏感度分别为85．5％，85．2％和86．2％。而且高pp65抗原血症与患者的临床症状密切相关。结论：pp65抗原血症反映该病毒活动状况，可监测HCMV活动性感染。由于儿童患者还存在原发感染的可能性，所以．联合HCMV-IgM的监测来提高临床的诊断率。     

280例孕妇巨细胞病毒的检测分析

目的：了解孕妇人巨细胞病毒（HCMV）近期感染状况。方法：采用酶联免疫吸附试验（ELISA）对280例孕妇和50名孕前检查的健康妇女外周血进行了HCMV—IgM检测。结果：在280例孕妇中检测出HCMV—IgM阳性标本3例,阳性率为1．07％,50例健康妇女中未检测到HCMV—IgM阳性标本。结论：在孕妇中巨细胞病毒有一定近期感染率。     

荧光定量聚合酶链反应技术检测儿童患者人巨细胞病毒结果分析

目的 了解本院儿童患者人巨细胞病毒(HCMV)感染现状.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术对243例住院疑似患儿进行HCMV-DNA定量检测.结果 HCMV总阳性率为16.05%;男性和女性阳性率分别为17.83%和12.79%;1个月至1岁年龄组(婴儿期)患者最高为17.41%.临床诊断主要以肝损害、腹泻和黄疸为主.结论 加强儿童患者HCMV的检测,有助于临床诊断与治疗方案的选择.     

荧光定量聚合酶链反应检测移植受者的巨细胞病毒DNA载量

目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测移植后受者的巨细胞病毒感染情况。方法应用定性PCR检测59例骨髓移植受者和9例肝移植受者的150份外周血标本中的巨细胞病毒DNA,比较外周血白细胞和血浆的检出差异;应用实时荧光定量PCR检测上述150份血浆样本和54份对照血浆中巨细胞病毒DNA载量。结果以实时荧光定量PCR为参照,定性PCR检测白细胞的敏感度和特异度分别为62·5%和95·5%;检测血浆的敏感度和特异度分别为57·5%和99·1%。所检测的150份血浆样本中,定量PCR阳性率为26·7%,阳性者其病毒拷贝数介于5·065×102~3·570×105/ml之间;对照组仅1例阳性,且拷贝数小于103/ml。临床调查显示病毒拷贝数大于5×103的患者具有较高的机会发展为巨细胞病毒病。结论实时荧光定量PCR是一个快速、敏感、特异的,可用于监测移植后患者巨细胞病毒感染的方法,帮助临床及早治疗,缩短治疗时间。     

肾移植术后受者人巨细胞病毒巢式PCR检测

目的探讨巢式PCR检测肾移植术后受者人巨细胞病毒（HCMV）DNA的方法，并与ELISA法进行比较。方法针对HCMVAD169株IEA基因设计两对巢式PCR引物，对50例肾移植术后受体血、尿标本进行HCMVDNA检测。分离血清作ELISA检测IgG、IgM。结果血液巢式PCR阳性率56％，尿液阳性率46％；ELISA法阳性率：IgG82％，IgM28％，IgG＋IgM28％。两种方法的阳性率进行统计学分析，P〈0．05，存在统计学差异。结论巢式PCR是一种敏感、快速诊断HCMV感染的方法，灵敏度及特异性均高于传统ELISA法，并能弥补ELISA的假阴性。不仅为临床HCMV疾病的诊断与治疗，同时也为选择普遍性预防抑或症状发生前的预先治疗提供可靠的实验室依据。