EB病毒病毒壳抗原、核心抗原重组蛋白的制备及在鼻咽癌血清学诊断中的应用

目的 探讨EB病毒(EBV)病毒壳抗原(VcA)-BFRF3和核心抗原(NA)1-BKRF1重组蛋白在鼻咽癌(NPC)血清学诊断中的应用.方法 以EBV DNA为模版,用PCR扩增目的基因BFRF3和BKRF1,捅入大肠杆菌表达载体pET.51b后转化大肠杆菌JM109,诱导重组蛋白表达.表达产物经SDS-PAGE、免疫印迹分析鉴定,金属螯合亲和层析纯化后,分别制备用BFRF3、BKRF1及BFRF3,BKRF1作为包被抗原的ELISA试剂,检测NPC患者和正常人群EBV-IgA抗体.结果 大肠杆菌高效表达BFRF3和BKRF1重组蛋白,表达产物相对分子质量分别为20000和29000,均有良好免疫反应性;BKRF1的NPc诊断灵敏度(71.20%,178,250)明显高于BFRF3(64.80%,162,250)(P<0.01),但两者NPc诊断特异性差异无统计学意义(P>0.05);相对于单独应用一种抗原,联合两种重组抗原的方法诊断NPC具有高灵敏度(84.80%,212,250)和相对低的特异性(82.00%,328,400)(P<0.01).结论 NA1-BKRF1诊断NPC的灵敏度高于VCA-BFRF3,两种抗原联合使用,可提高诊断灵敏度,但特异性明显降低.     

EB病毒病毒壳抗原、核心抗原重组蛋白的制备及在鼻咽癌血清学诊断中的应用

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EB病毒病毒壳抗原、核心抗原重组蛋白的制备及在鼻咽癌血清学诊断中的应用

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原核表达和制备EB 病毒GST/BFRF3融合蛋白用于鼻咽癌的诊断筛查

 目的：构建表达EB病毒衣壳抗原BFRF3基因的原核细胞表达载体并探讨其在鼻咽癌血清学诊断中的应用。方法：以EB病毒 DNA为模版,采用PCR法扩增目的基因BFRF3,与原核表达载体PGEX-5X-1连接,构建PGEX-5X- BFRF3重组质粒,转化大肠杆菌BL21（DE3）,IPTG诱导表达GST/BFRF3融合蛋白。表达产物经SDS-PAGE和免疫印迹法鉴定后,纯化目的蛋白作为包被抗原,制备ELISA试剂检测鼻咽癌患者和正常人群BFRF3-IgA抗体。结果：在大肠杆菌中成功地表达了GST/BFRF3融合蛋白,相对分子质量为44 kD,免疫印迹证实目的蛋白带有免疫原性,目的蛋白经纯化后作为包被抗原检测鼻咽癌患者的灵敏度和特异度分别为65％和87％。结论：采用原核表达系统成功构建并表达了GST/BFRF3融合蛋白,其在鼻咽癌血清筛选中具有诊断价值。