质粒介导的喹诺酮耐药基因qnr分子流行病学研究

目的了解武汉大学人民医院分离的革兰阴性杆菌中qnr基因及其所携带的广谱β-内酰胺酶（ESBLs）基因的流行情况。方法采用聚合酶链反应（PCR）方法对129株大肠埃希菌、29株肺炎克雷伯菌和10株阴沟肠杆菌进行qnr基因检测。对qnr阳性株，检测I类整合酶基因及SHV-1、TEM-1、CTX—M、OXA—Ⅰ、OXA-Ⅱ、OXA-Ⅲ、DHA、EBC型ESBLs基因。KB纸片法检测对16种抗菌药物的体外抗菌活性，美国临床实验标准委员会表型筛选和确证试验检测产ESBLs株。质粒接合试验分析qnr基因的水平转移能力，ERIC-PCR进行DNA同源性分析。结果6株菌株检出qnr基因（5株大肠埃希菌和1株阴沟肠杆菌），肺炎克雷伯菌中未检出；6株菌仅对亚胺培南全部敏感且对多种抗生素耐药，Ⅰ类整合酶基因扩增全为阳性，其中有2株大肠埃希菌对环丙沙星敏感，4株菌携带TEM-1型ESBLs基因、1株菌携带OXA—Ⅲ型ESBLs基因、2株菌携带EBC型AmpC酶；每株菌至少携带2种以上ESBLs基因。qnr基因介导的喹诺酮类耐药具有水平转移性，DNA同源性分析有2株指纹图谱一致。结论武汉地区存在qnr基因的流行，qnr阳性株多重耐药严重，且携带多种ESBLs基因。     

阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶的检测及耐药性分析

目的调查产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)、AmpC酶阴沟肠杆菌基因型及其耐药性,以期为临床治疗提供依据。方法使用VITEK-AMS鉴定细菌;采用三维试验检测阴沟肠杆菌的ESBLs与AmpC酶表型;β-内酰胺酶耐药基因型检测采用PCR扩增技术;耐药基因水平传播采用质粒接合试验;根据美国临床实验室标准化研究所(CLSI)指南进行药敏试验。结果86株阴沟肠杆菌中ESBLs携带率为48.8%;CTX-M型为主要类型,其中CTX-M-3亚型为27.9%,CTX-M-9亚型为16.3%,CTX-M-14亚型为3.4%;SHV-12型为18.6%;11株同时产ESBLs与AmpC酶,占12.8%,31株单独产ESBLs(36.0%),8株单独产高产AmpC酶(9.3%);亚胺培南对ESBLs菌株的敏感率为100.0%;8株产ESBLs菌株接合试验成功。结论CTX-M型与SHV-12型是阴沟肠杆菌ESBLs的主要基因型。ESBLs可以通过质粒接合试验进行水平传播。     

2017年临床分离阴沟肠杆菌的耐药性及其ESBLs基因研究

目的探讨某三级甲等医院2017年临床分离阴沟肠杆菌对抗菌药物的耐药性及其超广谱β-内酰胺酶(extended spectrum beta-lactamases, ESBLs)基因的产生情况。方法收集2017年1月-2017年12月自临床患者分离的159株(非重复菌株)阴沟肠杆菌。菌株鉴定及药敏试验采用Walkway 96全自动细菌鉴定及药敏仪,K-B法补充部分药敏试验。ESBLs表型检测采用双纸片扩散法,降落聚合酶链反应(PCR)检测4种ESBLs基因(blaOXA-1、blaCTX-M、blaTEM、blaSHV)。结果未检出对亚胺培南和美罗培南耐药的阴沟肠杆菌,菌株对其他抗菌药物的耐药率均<30%;38株(23.9%)阴沟肠杆菌ESBLs表型试验阳性,其中,35株携带ESBLs基因,以CTX-M-3型(28/35)为主;产酶(ESBLs)菌株对多数β-内酰胺类抗菌药物的耐药现象较严峻。结论 ESBLs表型检测可作为阴沟肠杆菌产ESBLs与否的筛选试验;降落PCR用于ESBLs基因检测简便、快捷;本地区阴沟肠杆菌对抗菌药物的耐药率略低,但产酶菌株耐药现象较严峻,临床医师应根据药敏试验结果合理选择抗菌药物,以减少耐药菌株的产生。     

临床分离阴沟肠杆菌中qnr基因及其耐药性检测

目的了解临床分离阴沟肠杆菌中qnr基因的分布以及对喹诺酮类等抗菌药物的耐药性。方法琼脂稀释法测定29株阴沟肠杆菌对5种氟喹诺酮类抗菌药物以及头孢美唑、亚胺培南、氯霉素、庆大霉素、四环素的耐药性;PCR检测qnr基因并将阳性扩增产物进行测序分析。结果阴沟肠杆菌对诺氟沙星、氧氟沙星、左氧氟沙星、环丙沙星、加替沙星的耐药率高达79.3%~89.7%;对头孢美唑、氯霉素、庆大霉素、四环素、亚胺培南的耐药率分别为96.6%、89.7%、82.8%、55.2%、13.8%;29株阴沟肠杆菌中,2株细菌携带qnrA1基因,占6.9%。结论阴沟肠杆菌对氟喹诺酮类等多种抗菌药物耐药显著、为多药耐药菌,少数菌株中存在qnr基因,临床应加强检测和监测。     

阴沟肠杆菌产超广谱β-内酰胺酶与AmpC酶基因及其流行病学研究

目的分析医院2008-2010年临床分离阴沟肠杆菌产ESBLs和AmpC酶及其对抗菌药物的耐药性,并了解其耐药基因的传播机制。方法采用改良三维试验筛选AmpC酶,双纸片扩散法检测ESBLs,聚合酶链反应(PCR)检测ESBLs和AmpC酶的基因,采用微量肉汤稀释法分析细菌耐药性,质粒接合试验分析耐药基因的传播特点。结果同时产ESBLs和AmpC酶菌株对三、四代头孢菌素及含酶抑制剂药物的耐药率均>50.0%;45株改良三维试验阳性,14株ESBLs确证试验阳性,ESBLs和AmpC酶的基因阳性者分别为25、38株,分别以TEM-1型、MIR-3型为主,其次为CTX-M-3、DHA-1型,SHV-11型广谱β-内酰胺酶2株,未检测到CIT、MOX、FOX、ACC型AmpC酶的基因,5株接合试验成功。结论阴沟肠杆菌主要携带TEM-1型广谱β-内酰胺酶、CTX-M-3型ESBLs和MIR-3型AmpC酶,耐药现状严重,应采取积极有效的措施预防多药耐药菌株的播散与暴发流行。     

阴沟肠杆菌不同β-内酰胺酶基因型检测与耐药性研究

目的 了解医院感染阴沟肠杆菌产β-内酰胺酶的情况,并对产不同β-内酰胺酶型菌株的耐药性进行研究.方法 采用三维试验确证试验检测AmpC酶与超广谱β-内酰胺酶(ESBLs).聚合酶链反应(PCR)扩增基因,K-B法检测阴沟肠杆菌对13种抗菌药物的耐药情况.结果 80株阴沟肠杆菌中29株ESBLs编码基因结果阳性,3株含有两种不同的基因型,分别为TEM型6株、SHV-2型2株、CTX-M-2型5株、CTX-M-3型8株和CTX-M-9型11株;26株ampC基因PCR扩增呈阳性;产超超广谱β-内酰胺酶(SSBLs)阴沟肠杆菌对美罗培南外的12种抗菌药物的耐药率在66.7%～100.0%,无论是单一产酶株,还是SSBLs菌株,其耐药率均显著高于不产酶株.差异有统计学意义(P＜0.05);美罗堵南仍是阴沟肠杆菌耐药率最低的抗菌药物.结论 阴沟肠杆菌已呈现出多药耐药和高度耐药特征,ESBLs基因型以CTX-M型为主,三维试验与PCR检测具有良好的一致性,产AmpC酶和ESBLs酶是阴沟肠杆菌耐药的主要原因.     

阴沟肠杆菌耐药性分析及NDM-1基因检测

目的 探讨阴沟肠杆菌的耐药性以及对亚胺培南耐药菌株进行新德里金属β-内酰胺酶1型(NDM-1)基因检测分析,为临床治疗阴沟肠杆菌感染合理用药提供试验依据。方法 试验菌株分离自2011年7月-2012年6月的临床标本,采用西门子Microscan Walkway 40plus全自动微生物分析系统对菌株进行鉴定及药敏检测,应用WHONET5.4对数据进行分析统计;聚合酶链反应(PCR)特异性扩增NDM-1基因,并对扩增产物进行测序和BLAST分析。结果 共分离得到35株阴沟肠杆菌,对亚胺培南敏感性最高,敏感率为91.4%,但也出现3株耐药菌株,其次为阿米卡星;对第一代头孢菌素头孢唑林及广谱青霉素的耐药率>90.0%,对其他抗菌药耐药率>40.0%;3株亚胺培南耐药菌株NDM-1检测均为阳性,且同源性为100.0%。结论 多药耐药阴沟肠杆菌及产NDM-1阴沟肠杆菌的出现,造成耐药形势日益严峻,需要加强监测力度。     

产PER-1型超广谱β-内酰胺酶革兰阴性杆菌的研究

目的研究大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌产PER-1型ESBLs的情况以及耐药特点。方法2003年8月~2004年6月间,从南昌地区4所医院分离的167株大肠埃希菌、154株肺炎克雷伯菌、67株阴沟肠杆菌,用双纸片扩散法检测ESBLs,用K-B法进行药敏试验,PCR扩增PER-1基因,对PER-1基因扩增阳性的菌株,用三相试验进行ESBLs的确证,对PER-1基因扩增阳性的PCR原液进行DNA测序。结果PER-1基因扩增阳性共16株,其中大肠埃希菌6株、肺炎克雷伯菌5株,阴沟肠杆菌5株,PER-1基因阳性率分别3.6%、3.2%和9.0%;检出两株同时产PER-1型ESBLs和AmpC酶的菌株,分别是肺炎克雷伯菌和阴沟肠杆菌各1株,产PER-1型ESBLs株对头孢他啶、头孢噻肟耐药率为100%,头孢西丁耐药率也达94%,对阿米卡星和头孢吡肟的耐药较低,分别为56%和31%,对亚胺培南的耐药率为0%。结论PER-1基因已在肠杆菌科细菌中播散,亚胺培南或阿米卡星在体外对产PER-1型ESBLs株的抗菌活性强。     

产NDM-1金属β-内酰胺酶阴沟肠杆菌耐药传递机制及药物敏感性分析

目的研究碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌的耐药机制和耐药传递,分析其药物敏感性。方法收集大连医科大学附属第一医院2015年8月-2016年8月碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌9株,利用改良Hodge试验对碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌进行表型确证,EDTA纸片增效试验检测金属酶。PCR方法检测碳青霉烯酶基因,超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)基因,AmpC beta-内酰胺酶(AmpC酶)基因,质粒介导的喹诺酮类耐药基因以及氨基糖苷类耐药基因。通过质粒接合实验分析碳青霉烯耐药性在种属间的传递。结果改良Hodge试验阳性2株,EDTA纸片增效试验阳性9株,均携带NDM-1基因,ESBLs基因TEM、CTX-M、SHV阳性菌株数分别为8株、3株、4株。喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS、aac(6’)-Ib-cr阳性菌株数分别为5株、2株、1株、7株。质粒接合实验表明NDM-1基因可通过质粒在不同种属间传递。对左氧氟沙星、环丙沙星、妥布霉素、四环素的敏感率较低,均为11.1%。对阿米卡星、庆大霉素、多黏菌素B、替加环素及磷霉素的敏感率较高,分别为88.9%、66.7%、88.9%、100%、100%。结论碳青霉烯耐药阴沟肠杆菌为NDM-1型,耐药性可通过质粒进行传递,需引起重视,应根据药敏结果合理应用抗菌药物,同时加强院感的防控。     

肠杆菌科细菌qnr耐药基因的流行现状及耐药分析

目的了解质粒介导喹诺酮类耐药基因qnrA、qnrB、qnrS在临床分离大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌、鲍氏不动杆菌中的流行情况及其耐药特征。方法收集临床分离的4种肠杆菌科细菌共148株,用法国生物梅里埃公司VITEK-2全自动细菌鉴定仪进行菌株鉴定和药敏试验,用qnr特异性基因引物进行聚合酶链反应(PCR)扩增和基因型的测序分析,并通过网上GenBank进行比对以确定编码酶基因的类型。结果对喹诺酮类耐药的50株大肠埃希菌检出qnrA1株(2.0%)、qnrB5株(10.0%)、qnrS3株(6.0%),有1株同时携带qnrB、qnrS;30株肺炎克雷伯菌检出qnrA1株(3.3%)、qnrB8株(26.7%)、qnrS10株(33.3%),有3株同时携带qnrB、qnrS;18株阴沟肠杆菌检出qnrA13株(72.2%)、qnrB5株(27.8%)、qnrS4株(22.2%),有3株同时携带qnrA、qnrS,3株同时携带qnrA、qnrB;50株鲍氏不动杆菌未检出qnr基因;携带qnr基因肠杆菌科细菌对氨苄西林/舒巴坦、氨曲南、头孢他啶、头孢曲松、头孢吡肟、磺胺甲噁唑/甲氧苄啶的耐药率均>70.0%,呈现出多药耐药现象。结论医院临床分离4种对喹诺酮类药物耐药的肠杆菌中,除鲍氏不动杆菌未检出qnr基因,其余3种均检出qnrA、qnrB、qnrS基因,以阴沟肠杆菌检出率最高,其次为肺炎克雷伯菌;携带qnr基因肠杆菌科呈现出多药耐药现象;医院在抗菌药物选择压力下,存在质粒介导喹诺酮类耐药基因qnr的流行。