染料木黄酮对MDA-MB-453乳腺癌细胞uPA表达及PTK活性的影响研究

目的: 观察染料木黄酮(亦称三羟异黄酮,genistein,Gen)对MDA-MB-453乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)表达及蛋白酪氨酸激酶(protein tyrosine kinase,PTK)活性的影响,探讨Gen抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法: 5×10-5mol/L Gen处理MDA-MB-453细胞24、48、72 h后,应用Western blot、免疫沉淀、RT-PCR及激酶活性分析法检测Gen对MDA-MB-453乳腺癌细胞uPA表达、HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平及PTK活性变化。结果: Gen处理MDA-MB-453细胞后,uPA的mRNA和蛋白表达量下调,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平降低,PTK活性下降,且这种作用具有时效性。结论: Gen能有效抑制乳腺癌细胞HER-2/neu受体的PTK活性和蛋白磷酸化水平,在转录和翻译水平下调uPA的表达,从而抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成。     

黑米花色苷抑制人乳腺癌细胞促血管生成因子表达的机制

目的探讨黑米花色苷抑制HER-2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453促血管生成因子表达的分子机制。方法以黑米花色苷和表皮细胞生长因子(EGF)单独或联合处理MDA-MB-453细胞株,Western blot检测HER-2/neu及MAPK信号通路关键蛋白ERK-1/-2的磷酸化水平改变,免疫荧光检测NF-κB p65的细胞内定位,RT-PCR检测肿瘤细胞促血管生成因子(包括VEGF、MMP-2/-9和uPA)在mRNA水平的表达变化。结果黑米花色苷能够显著抑制HER-2/neu和ERK-1/-2蛋白的磷酸化,阻止NF-Κb p65向细胞核内转位,并在mRNA水平抑制各促血管生成因子的表达。结论黑米花色苷可能通过对HER-2/neu及其下游EGFR/Ras/MAPK信号通路的阻断最终实现对肿瘤细胞促血管生成因子表达的抑制作用。     

木黄酮对MCF-7/HER-2细胞uPA表达影响

目的探讨植物化学物质染料木黄酮(genistein)抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制。方法采用基因转染技术建立HER-2/neu高表达MCF-7乳腺癌细胞(命名为MCF-7/HER-2),5×10-5mol/L染料木黄酮处理MCF-7/HER-2细胞24,48,72 h后,应用western bolt、免疫沉淀、RT-PCR及激酶活性分析法检测genistein对MCF-7/HER-2乳腺癌细胞尿激酶型纤维蛋白溶酶原激活剂(urokinase-type plasminogen activator,uPA)表达、HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平及蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性变化。结果MCF-7/HER-2细胞uPA的mRNA和蛋白表达量比MCF-7细胞uPA的mRNA和蛋白表达量高,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平和PTK活性增加,染料木黄酮处理MCF-7/HER-2细胞后,uPA的mRNA和蛋白表达量下调,HER-2/neu受体蛋白磷酸化水平降低,PTK活性下降,且这种作用具有时效性。结论染料木黄酮能下调MCF-7/HER-2细胞HER-2/neu受体的PTK活性和蛋白磷酸化水平,抑制uPA表达,这可能是染料木黄酮抗乳腺癌血管生成的分子机制之一。     

三羟异黄酮对乳腺癌异种移植瘤血管生成影响

目的 探讨三羟异黄酮(genlstein)对原癌基因(HER-2／neu)高表达乳腺癌血管形成的影响及其与血管内皮生长因子(VEGF)的关系。方法 应用基因转染技术建立HER—2／neu高表达的乳腺癌细胞(MCF—7／HER—2)。免疫缺陷裸鼠(BALB／c)皮下接种乳腺癌(MCF—7和MCF—7／HER—2)细胞，其中接种MCF—7／HER—2细胞的裸鼠随机分为3组：对照组；genistein处理组：HER—2／neu抗体处理组。应用免疫组化法观察移植瘤内微血管密度(microvessel density，MVD)和VEGF的表达变化。结果 MCF—7／HER—2移植瘤与MCF—7移植瘤相比血管密度较大。VEGF表达增强；MCF—7／HER—2移植瘤经genistein和HER—2／neu抗体处理后。移植瘤的血管密度减少，VEGF表达降低。结论 HER—2／neu高表达能促进乳腺癌的血管生成，genistein可能通过下调VEGF的表达从而抑制HER—2／neu高表达乳腺癌的血管生成。     

染料木黄酮影响MDA-MB-453细胞对紫杉醇化疗敏感性的机制

目的:探讨染料木黄酮(genistein,GEN)影响紫杉醇(paclitaxel,PTX)体外化疗HER2/neu高表达人乳腺癌细胞株MDA-MB-453敏感性的作用机制。方法:GEN和PTX单独或联合处理MDA-MB–453细胞,流式细胞仪检测细胞周期分布,免疫细胞化学法检测HER2/neu蛋白、Westernblot检测Akt、p-Akt、CyclinB1、CDK1蛋白表达的变化。结果:GEN和PTX单独作用时MDA-MB-453细胞分别阻滞于G1/S期和G2/M期,HER2/neu、总Akt和CDK1蛋白水平均没有明显变化,但GEN可显著降低p-Akt和CyclinB1蛋白水平,而PTX则明显增加CyclinB1蛋白水平,二者联合处理时GEN拮抗PTX增加CyclinB1蛋白水平和诱导G2/M期阻滞的作用。结论:GEN拮抗PTX增加cyclin B1蛋白水平和G2/M期阻滞的作用,可能是其降低PTX体外化疗MDA-MB-453细胞敏感性的机制之一。     

NDRG2在乳腺癌细胞系中的表达及其对乳腺癌细胞生长的影响

目的：检测NDRG2在各种乳腺癌细胞系中的表达,并观察高表达NDRG2对乳腺癌细胞生长的影响。方法：应用PCR技术及Western blot法检测NDRG2的表达水平,转染pcDNA3.1-NRDG2质粒,绘制生长曲线,观察细胞的生长情况。结果：MDA-MB-453和MDA-MB-231细胞中NDRG2的表达较低;pcDNA3.1-NRDG2能够在MDA-MB-453中成功高表达NRDG2;高表达NRDG2的MDA-MB-453细胞生长速度明显降低。结论：NRDG2能够抑制乳腺癌细胞MDA-MB-453的生长。     

全反式视黄酸调控乳腺癌细胞的增殖及机制研究

目的研究全反式视黄酸(ATRA)对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及ATRA与X射线照射对视黄醇类X受体α(RXRα)表达水平的影响。方法 MTT法检测细胞增殖,Western blot检测RXRα表达水平。结果 ATRA浓度在100～1000 nmol/L,72 h可抑制细胞的增殖。观察不同时间100 nmol/L的ATRA作用,24 h内,促进MDA-MB-231细胞的增殖,而作用48 h后,可抑制细胞的增殖。ATRA在100～1000 nmol/L范围内可诱导RXRα的表达,且存在浓度依赖性。100 nmol/L的ATRA作用24 h即可诱导RXRα的表达,并且存在时间依赖性。X射线照射未能诱导RXRα的表达。结论 100～1000 nmol/L的ATRA作用48 h即可抑制MDA-MB-231细胞增殖,且其对MDA-MB-231细胞RXRα蛋白表达存在浓度和时间依赖性,为ATRA用于临床乳腺癌的治疗提供了理论基础,也提示RXRα可能是ATRA抑制乳腺癌细胞增殖的机制之一。     

Hedgehog信号通路阻断剂Cyclopamine对乳腺癌MDA-MB-231细胞侵袭的影响

目的探讨Hedgehog信号通路阻断剂Cyclopamine对人乳腺癌MDA-MB-231细胞迁移和侵袭的影响及其可能的机制。方法 2016年6—12月体外培养人乳腺癌MDA-MB-231细胞,用Hedgehog信号通路阻断剂Cyclopamine作用于MDA-MB-231细胞24 h后,分别采用划痕实验和Transwell小室实验检测MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力,ELISA检测血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。计量资料组间两两比较采用t检验,P0.05为差异有统计学意义。结果与对照组相比,Cyclopamine能显著抑制实验组MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭,对比差异有统计学意义(P0.05)。Hedgehog信号通路被Cyclopamine阻断后,MDA-MB-231细胞中血管内皮生长因子的表达水平显著下降,对比差异有统计学意义(P0.05)。结论阻断Hedgehog信号通路可以抑制MDA-MB-231细胞的侵袭,其作用机制可能与降低VEGF的表达有关。     

丙泊酚下调ERK信号通路对乳腺癌细胞增殖和转移能力的影响

目的研究丙泊酚对人乳腺癌细胞增殖转移能力的影响及潜在作用机制。方法 MTT检测不同时间(0、12、24、48、72 h)和不同浓度(0、12.5、25、50、100μmol/L)丙泊酚对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖的影响;Transwell实验检测100μmol/L的丙泊酚对细胞迁移侵袭能力的影响;Western blot检测100μmol/L的丙泊酚分别作用0、12、24、48、72 h后细胞中MMP9、Cyclin D1、ERK蛋白表达变化。结果丙泊酚可呈时间-剂量依赖性地抑制MDA-MB-231细胞增殖;丙泊酚(100μmol/L)可显著抑制细胞迁移侵袭能力;丙泊酚可呈时间依赖性地抑制细胞中MMP9、Cyclin D1、p-ERK蛋白表达。结论丙泊酚能够抑制人乳腺癌细胞增殖转移能力,其机制可能与下调ERK信号有关。     

赫赛汀及9-顺式视黄酸对乳腺癌联合抑制作用

目的 探讨赫赛汀联合9-顺式视黄酸对ErbB2阳性乳腺癌细胞周期进程及分布的影响及其相应的分子机制.方法 利用流式细胞仪检测经赫赛汀、9-顺式视黄酸单独和联合作用后,癌基因(ErbB2/neu)阳性的MDA-MB-453乳腺癌细胞周期进程和分布的变化.在此基础上,利用免疫印记和半定量PCR法对CDK2、Cyclin E、P27的表达进行检测,同时利用免疫沉淀法检测CyclinE/CDK2结合力的变化.结果 与对照组比较,一定剂量的赫赛汀和9-顺式视黄酸可将MDA-MB-453细胞的周期进程阻遏于G0/G1期从而抑制其增殖活性.经2者联合作用后,cyclin E、CDK2 的表达较对照组均有所下降,其中以CDK2的变化最为明显,而P27蛋白表达则明显升高.同时,2者联合作用还能有效降低CyclinE/CDK2的结合能力.结论 赫赛汀和9-顺式视黄酸可在体外分别通过改变Cyclin E、CDK2和P27的表达和活性起到协同抑制HrbB2/neu阳性乳腺癌的目的.     

转化生长因子β在大豆异黄酮抑制乳腺癌细胞增殖中的作用

目的 :　探讨大豆异黄酮抑制 BCa P- 37乳腺癌细胞增殖的分子机制。方法 :　选择二羟异黄酮、三羟异黄酮处理 BCa P- 37细胞 ,采用生长曲线3H- Td R掺入试验及流式细胞分析等实验方法 ,观察大豆异黄酮对乳腺癌细胞 BCa P- 37增殖的抑制作用 ,同时用转化生长因子 (TGP) β拮抗试验、Western blot分析 ,检测 TGFβ1、TGFβ2 及受体的表达变化情况。结果 :　 (1～ 9)× 1 0 -5mol/L三羟异黄酮作用 3～ 4d可抑制 BCa P- 37细胞增殖 ,细胞受阻于 G1期 ,且 BCa P- 37细胞的TGFβ1、TGFβ2 及受体表达呈时间剂量依赖性增加。而二羟异黄酮处理组不明显。结论 :　三羟异黄酮抑制 BCa P- 37细胞增殖能力强于二羟异黄酮 ,三羟异黄酮可能通过诱导 TGF-β和 TGF-β受体表达的增加而抑制人乳腺癌细胞 BCa P- 37增殖     

膳食雌激素影响乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的:探讨膳食中常见的两种环境类雌激素大豆异黄酮(genistein,GS)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)影响人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的分子生物学作用机制。方法:MCF-7细胞在DMEM培养液(含10%胎牛血清)中进行常规传代培养,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含5%活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养5d,收集细胞,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或75ml培养瓶,32×10-9mol/LZEA和75×10-6mol/LGS对细胞分别处理72h,用半定量RT-PCR技术观察GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2及baxmRNA表达的影响,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果:与溶剂对照组相比,75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h可显著提高baxmRNA表达而抑制bcl-2和PCNAmRNA的表达,随后的免疫组化实验也证实了这一结果;ZEA的作用效应则与GS相反。结论:膳食雌激素GS和ZEA可通过影响细胞增殖和凋亡相关调节基因PCNA、bcl-2和bax表达而调节人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡作用。     

ERK5MAPK在genistein对MDA-MB-231细胞增殖抑制中的作用

目的探讨ERK5(extracellular-regulated kinase5)MAPK(mitogen-activated protein kinase)信号转导通路与genistein对人乳腺癌细胞MDA-MB-231增殖抑制作用的关系。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法检测genistein对MDA-MB-231增殖的抑制作用;采用流式细胞仪检测细胞凋亡情况;应用western blot分别检测ERK5总蛋白和凋亡相关蛋白Bax、Caspase3的表达。结果genistein对MDA-MB-231细胞增殖有明显的抑制作用;流式细胞仪检测到细胞产生凋亡;western blot分析提示genistein抑制ERK5总蛋白的表达,促进Bax和Caspase3蛋白表达。结论genistein可以影响ERK5MAPK信号转导通路,使凋亡相关蛋白表达增加,抑制MDA-MB-231细胞增殖。     

Soy Isoflavone Genistein-Mediated Downregulation of miR-155 Contributes to the Anticancer Effects of Genistein

We previously reported that dietary genistein inhibits mammary tumor growth and metastasis of the highly metastatic MDA-MB-435 cancer cells in immunocompromised mice. The purpose herein was to characterize the role of the novel oncogenic microRNA (miRNA) miR-155 in the anticancer effects of genistein in metastatic breast cancer. The effect of genistein was determined on breast cancer cell viability, apoptosis, and expression of miR-155 and its targets. At low physiologically relevant concentrations, genistein inhibits cell viability and induces apoptosis in metastatic MDA-MB-435 and Hs578t breast cancer cells, without affecting the viability of nonmetastatic MCF-7 breast cancer cells. In parallel with reduced cell viability, miR-155 is downregulated, whereas proapoptotic and anticell proliferative miR-155 targets FOXO3, PTEN, casein kinase, and p27 are upregulated in MDA-MB-435 and Hs578t cells in response to genistein treatment. However, miR-155 levels remain unchanged in response to genistein in the MCF-7 cells. Ectopic expression of miR-155 in MDA-MB-435 and Hs578t cells decreases the effects of genistein on cell viability and abrogates the effects of genistein on apoptosis and expression of proapoptotic genes. Therefore, genistein-mediated downregulation of miR-155 contributes to the anticancer effects of genistein in metastatic breast cancer.     

Anticancer activities of an anthocyanin-rich extract from black rice against breast cancer cells in vitro and in vivo

Anthocyanins widely present in human diet and have a variety of health effects. This study investigates the anticancer effects of an anthocyanin-rich extract from black rice (AEBR) on breast cancer cells in vitro and in vivo. AEBR reduced the viability of breast cancer cell lines MCF-7 (ER(+), HER2/neu(-)), MDA-MB-231 (ER(-), HER2/neu(-)), and MDA-MB-453 (ER(-), HER2/neu(+)) and induced apoptosis in MDA-MB-453 cells via the intrinsic pathway in vitro by activating caspase cascade, cleaving poly (ADP-ribose) polymerase (PARP), depolarizing mitochondrial membrane potential, and releasing cytochrome C. Oral administration of AEBR (100 mg/kg/day) to BALB/c nude mice bearing MDA-MB-453 cell xenografts significantly suppressed tumor growth and angiogenesis by suppressing the expression of angiogenesis factors MMP-9, MMP-2, and uPA in tumor tissue. Altogether, this study suggests the anticancer effects of AEBR against human breast cancer cells in vitro and in vivo by inducing apoptosis and suppressing angiogenesis.