粒细胞集落刺激因子对卵巢癌细胞株生长曲线的影响

目的 :探讨粒细胞集落刺激因子 (G- CSF)对卵巢癌细胞株生长曲线的影响。方法 :采用 XTT比色法检测不同浓度 G-CSF对卵巢癌细胞株 3AO及 CAOV3细胞生长曲线的影响。结果 :不同浓度 G- CSF作用 2 4～ 1 2 0 h范围内 ,对 3AO及 CAOV3细胞的生长曲线均无明显性的影响 (P >0 .0 5 )。结论 :G- CSF作用较长时间对卵巢癌细胞株 3AO及 CAOV3细胞生长无明显的影响     

粒细胞集落刺激因子对卵巢癌细胞株生长的影响及检测方法研究

目的 了解粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）对人卵巢癌细胞株生长的影响,并对用于卵巢癌细胞活性检测的４种方法进行比较。方法 采用ＸＴＴ比色法、ＭＴＴ比色法、集落形成试验、＾３Ｈ－ＴｄＲ掺入试验分别检测Ｇ－ＣＳＦ对卵巢癌细胞株３ＡＯ细胞生长的影响。结果 ４种细胞活性检测方法检测不同浓度Ｇ－ＣＳＦ对３ＡＯ细胞生长的影响与对照组（Ｇ－ＣＳＦ浓度为０ｎｇ／ｍｌ）相比,差异均无显著性（Ｐ〉０．０５）。结论：Ｇ     

hCG对人卵巢癌细胞株3AO体外生长和细胞周期的影响

目的 研究人绒毛膜促性腺激素（hCG）对卵巢癌细胞株3AO体外生长及2细胞周期的影响。方法 采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法和流式细胞术（FCM），观察卵巢癌细胞株3AO在加入含不同浓度hCG培养液后细胞活性和生长周期的变化。结果 （1）浓度为0．1，1μg/ml的hCG可刺激3AO细胞株的生长，生长率分别增加到109％和121％；hCG浓度为10μg/ml时对细胞的生长几乎滑有影响，浓度为100μg/ml则抑制细胞生长。（2）hCG可使3AO细胞株G0/G1期细胞比例下降，G2／M期细胞比例增加，S期细胞变化不明显。结论 hCG在卵巢癌的发生和发展过程中有潜在的促进作用。     

粒细胞集落刺激因子对顺铂对卵巢癌细胞的细胞毒作用的影响

目的　了解粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ ＣＳＦ）对顺铂对卵巢癌细胞的细胞毒作用的影响;方法　采用ＸＴＴ 比色法检测不同浓度顺铂对卵巢癌细胞株ＳＫＯＶ３、３ＡＯ 细胞生长影响;以及５０ ｍｇ／Ｌ 顺铂分别与不同浓度Ｇ－ ＣＳＦ 共同使用对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ细胞生长的影响。结果　５０ ｍｇ／Ｌ 顺铂单独使用和与不同浓度Ｇ－ ＣＳＦ 共同使用２４ ｈ 对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ 细胞生长的影响无显著性差异。结论　Ｇ－ ＣＳＦ 对顺铂对ＳＫＯＶ３、３ＡＯ 细胞的细胞毒作用无显著影响。     

不同时间和浓度大蒜素对卵巢癌细胞的影响及机制探究

目的 探讨大蒜素(allicin)对人卵巢癌普通型HO-8910和高侵袭型HO-8910PM细胞株增殖的影响及诱导细胞凋亡机制、作用效果比较。方法 不同浓度的大蒜素作用于人卵巢癌HO-8910和HO-8910PM细胞株不同时间,采用MTT法观察细胞活力;集落形成实验计算克隆形成率;PI/Hochest 33342荧光染色,检测caspase-3活性;Western blot法检测caspase-3和PARP蛋白表达。结果 大蒜素能显著抑制HO-8910和HO-8910PM细胞的增殖和集落形成,影响caspase-3的活性和PARP蛋白裂解(P＜0.05),呈时间和剂量依赖性;HO-8910PM细胞对大蒜素的敏感度均强于HO-8910细胞。结论 大蒜素可显著抑制卵巢癌细胞增殖,可能通过调节caspase-3和PARP诱导细胞凋亡,且高侵袭性卵巢癌细胞更敏感。     

雄黄诱导卵巢癌细胞珠SKOV3和COC1凋亡的实验研究

目的:探讨雄黄对卵巢癌细胞株SKOV3和COC1增殖能力的影响及可能机理。方法:采用不同浓度雄黄溶液作用于两珠细胞,用MTT法检测生长抑制率;流式细胞仪检测细胞凋亡率及分析细胞周期;原位末端标记法(TUNEL)观察细胞凋亡形态学。结果:不同浓度的雄黄溶液对卵巢癌细胞株SKOV3及COC1均有不同程度的生长抑制作用,具有浓度和时间依赖性,且COC1比SKOV3对雄黄更敏感。结论:雄黄对卵巢癌细胞有生长抑制作用,诱导细胞发生G1期阻滞是雄黄抑制卵巢癌细胞生长作用的可能机制之一。     

肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体对人卵巢癌细胞株体外作用的实验研究

目的:探讨肿瘤坏死因子相关细胞凋亡诱导配体(TRAIL)对人卵巢癌细胞株体外生长抑制作用。方法:采用RT-PCR技术,检测正常人卵巢上皮细胞及人卵巢癌细胞株3AO、SKOV3、OV-CAR3TRAIL受体DcR1、DcR2、DR4、DR5的表达。MTT法测定不同浓度TRAIL对3AO、SKOV3、OVCAR3的生长抑制率,并以顺铂做对照;采用流式细胞技术观察TRAIL作用于3AO后的细胞凋亡率及细胞周期的变化;扫描电镜及HE染色,观察TRAIL及顺铂作用3AO后的细胞形态学变化。结果:①TRAIL能有效抑制3AO、SKOV3、OVCAR3的生长,并具有时效性和量效性(P<0.05);②不同浓度的TRAIL作用于3AO后,在细胞周期G1期前出现明显的亚二倍体细胞凋亡峰,并呈现典型的细胞凋亡形态。结论:①TRAIL可有效的抑制卵巢癌细胞株的生长,并具有量效性、时效性;②TRAIL可通过不同的途径诱导细胞凋亡。     

槲皮素抑制卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用研究

目的:观察槲皮素对卵巢癌细胞株生长的影响,为寻找新的卵巢癌细胞的治疗药物提供实验依据.方法:运用细胞培养、光镜观察及MTT法测定细胞活性等方法,对比卵巢癌细胞株SKOV3在加入不同浓度槲皮素作用不同时间后的生长情况和细胞活性,探讨槲皮素对卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用.结果:加入不同浓度的槲皮素后,卵巢癌细胞株SKOV3在形态学和细胞活性方面均发生改变,表现为细胞坏死、细胞生长抑制率增加,且作用浓度为50μmol/L的最为显著.结论:实验证明槲皮素有抑制卵巢癌细胞株SKOV3生长的作用,具有时间依赖性,其最佳作用浓度为50μmol/L.     

洛铂诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究

目的探讨洛泊对体外培养的浆液性卵巢癌细胞SKOV3凋亡的诱导作用。方法体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用以及流式细胞仪检测洛铂对SKOV3细胞株的凋亡率。结果体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡。结论卵巢癌SKOV3细胞对洛泊敏感,洛泊对卵巢癌细胞的杀伤作用是通过诱导细胞凋亡途径实现的。     

诺帝对人卵巢癌细胞3AO和SKOV3增殖、周期及Aurora-A表达的影响

目的 探讨抗肿瘤新药诺帝(Nordy)在体外对卵巢癌细胞(3AO黏液性癌,SKOV3浆液性癌)生长的抑制作用及对细胞周期的影响,同时对卵巢癌细胞株中Aurora-A的mRNA和蛋白过表达的抑制作用进行研究.方法 MTT法检测诺帝对细胞增殖的抑制作用;RT-PCR和Western blot检测Aurora-A的mRNA和蛋白表达情况;流式细胞术分析细胞周期.结果 经诺帝作用后Aurora-A的mRNA及蛋白的表达水平显著下降(P<0.01);诺帝能明显抑制3AO、SKOV3细胞的增殖,阻滞细胞周期于G0/G1期(P<0.05).结论 诺帝对卵巢癌3AO、SKOV3细胞的生长具有明显抑制作用,可以阻滞细胞周期.在诺帝多环节的抑癌机制中,抑制癌细胞株Aurora-A的异常高表达,阻止中心体的异常转变可能是其机制之一.     

三氧化二砷诱导人卵巢癌耐药细胞系3AO/cDDP细胞凋亡及机制的研究

目的：探讨三氧化二砷（As2O3）对人卵巢癌耐药细胞系3AO／cDDP细胞生长的影响及其机制。方法：采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法,检测不同浓度As2O3作用后,3AO／cDDP细胞的生长抑制率;采用流式细胞技术检测细胞凋亡率,细胞周期变化,以及Fas、FasL基因表达的变化。所有结果均与人卵巢癌细胞系3AO细胞相比较;采用细胞骨架染色法观察3AO／cDDP细胞凋亡细胞形态变化,通过吖啶橙染色,荧光显微镜观察As2O3作用后3AO细胞的形态变化。结果：As2O3能明显抑制3AO／cDDP细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性（P＜0．05）;在定一浓度范围内,3AO／cDDP细胞凋亡率与As2O3的浓度和作用时间呈依赖关系,诱导凋亡的最适浓度是3μmol/L;As2O3低浓度时,3AO／cDDP细胞周期S期通过受阻,高浓度时诱导S期细胞凋亡;As2O3作用后,两种细胞系Fas基因的表达均呈升调节,FasL基因的表达无变化;与3AO细胞相比,差异无显著意义（P＞0．05）;As2O3作用后3AO及3AO／cDDP形成典型的凋亡小体。结论：As2O3通过Fas/FasL系统,诱导S期细胞凋亡,有效地抑制人卵巢癌耐药细胞系细胞的生长。     

肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因ALPL抑制卵巢癌细胞系SKOV3增殖的研究

目的 研究肝/肾/骨型碱性磷酸酶基因(alkaline phosphatase,liver/bone/kidney,ALPL)在卵巢癌细胞株中的表达及其对卵巢癌细胞SKOV3增殖的影响.方法 通过qRT-PCR检测ALPL在不同卵巢癌细胞株(HEY、SKOV3、8910、ES-2、OVCAR3、3AO、A2780)mRNA中的表达,并与正常卵巢组织进行比较.在低表达ALPL的卵巢癌细胞株SKOV3中外源性过表达ALPL,通过MTT法、平板克隆实验检测细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞周期.通过建立裸鼠皮下种植瘤模型,观察过表达ALPL的SKOV3细胞在体内的成瘤能力.结果 ALPL在卵巢癌细胞中的mRNA表达低于正常卵巢组织(P＜0.01),外源性过表达ALPL可抑制SKOV3细胞的增殖和克隆形成率(P＜0.01),阻滞细胞G1期向S的转化,并抑制肿瘤细胞的成瘤能力(P＜0.05).结论 ALPL表达的恢复可以明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖及成瘤能力.     

EFFECTS OF RETINOIC ACID ON PROLIFERATION AND DIFFERENTIATION OF A HUMAN OVARIAN CARCINOMA CELL LINE： 3AO

Objective To observe the effects ofretinoic acid (RA) on the proliferation and differentiation of a human ovarian carcinoma cell line: 3AO cells. Methods 3AO cell proliferation was evaluated by viable cell count, percentage of cells in each cycle phase were analyzed by flow cytometric analysis, alkaline phosphatase (AKP) activity was determined as described, and CA125 expression was measured by ELISA. Results RA could inhibit the proliferation of 3AO cells accompanied with morphological changes in a dose-dependent manner. Cell cycle analysis indicated that RA inhibition of 3AO cells growth occurred through induction of G1 arrest with a concomitant reduction in the proportion of cells in S phase, AKP activity increased significantly after treatment with RA(0.1 μmol/L) for 1-5 days. Dose-response studies revealed that the AKP activity increased to a different extent as a function of RA concentrations. Furthermore, RA could suppress the expression of CA125 tumor marker in 3AO cells. Conclusion RA could markedly inhibit the proliferation and induce the differentiation of 3AO cells.     

全反式维甲酸联合粒细胞集落刺激因子对骨髓瘤细胞生长、分化及RARα2表达的影响

目的：观察粒细胞集落刺激因子（G CSF）与全反式维甲酸（ATRA）对骨髓瘤细胞生长、分化及RARα2表达的影响,探讨两药联合用于临床治疗骨髓瘤的可能性。方法：以人骨髓瘤细胞RARα2阳性细胞株（OPM2）和RARα2阴性细胞株（U266）为研究对象,设对照组、G CSF单药组（1000、2000 U/ml）、ATRA单药组（10 μmol/L）及两药联合组共6个平行组。采用MTT法检测细胞活力,倒置显微镜动态观察细胞凋亡过程,Annexin V/PI双染法检测早期凋亡;瑞氏姬母萨染色观察细胞形态学,流式细胞术分析CD49e表达;逆转录PCR检测RARα2 mRNA表达。结果：ATRA可抑制OPM2细胞的生长（P<005）,联合用药组生长抑制率均大于单药组（P<005）;而在U266细胞这种作用不明显（P>005）。瑞氏 姬母萨染色显示在含ATRA的处理组中,OPM2细胞有细胞核缩小、染色质聚集浓缩、核仁数量减少、胞浆量增加并呈深蓝色改变;此类改变在U226细胞不明显。U266、OPM2细胞均弱表达CD49e。在OPM2细胞中,联合用药组较对照组、ATRA单药组RARα2表达均增加（P<005）,对照组与G CSF单药组RARα2表达无明显差别（均P>005）。U226细胞的对照组、G CSF单药组不表达RARα2,ATRA单药组及G CSF+ATRA联合组弱表达RARα2。结论：ATRA对RARα2阳性骨髓瘤细胞有抑制细胞增殖作用;ATRA对RARα2阳性骨髓瘤细胞的分化也有一定促进作用。     

蝎毒组分Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的：观察蝎毒组分Ⅰ(SV-Ⅰ)对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用。方法：卵巢癌细胞SKOV3分为空白对照组和SV-Ⅰ处理组(终浓度分别为200、400、800 mg•L^-1)，采用MTT法检测SV-Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长抑制率，集落形成法检测肿瘤细胞增殖，流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化。结果：200、400和800 mg•L^-1-1组, SKOV3细胞集落数分别为57.00±6.16和48.00±4.11，明显低于对照组（84.00±5.29）(P<0.01)；与空白对照组比较，400 mg•L^-1组SKOV3细胞S期细胞数明显减少（P<0.01），G₂+M期细胞明显增多 (P<0.01)， 800 mg•L^-1组SKOV3细胞G₂+M期细胞数明显减少（P<0.01），G₁期细胞数有增多趋势；与空白对照组比较，400 和800 mg•L^-1组SKOV3凋亡细胞数明显增加（P<0.01）。结论：在一定浓度范围内蝎SV-Ⅰ可明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的生长，其机制与SV-Ⅰ抑制SKOV3细胞DNA合成、诱导SKOV3细胞发生G₂+M和G₁期阻滞及诱导SKOV3细胞凋亡有关。     

骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响

目的:观察大鼠骨髓间充质干细胞对HepG2肝癌细胞增殖的影响,并初步探讨其机制?方法:全骨髓贴壁法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,流式细胞术鉴定其分子表面标志,体外扩增培养并收集培养上清?MTT法?平板克隆实验及软琼脂克隆实验检测大鼠间充质干细胞对人肝癌细胞株HepG2增殖的影响,流式细胞术检测肝癌细胞周期的改变,Western blot法检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1表达情况?结果:骨髓间充质干细胞CD105和CD90表达阳性,CD34和CD45表达阴性?在骨髓间充质干细胞培养上清作用下,MTT法显示实验组肝癌细胞光密度值增加(P < 0.05),平板克隆法显示实验组肝癌细胞克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),软琼脂克隆法显示实验组肝癌细胞空间克隆形成率比对照组明显升高(P < 0.05),流式细胞术显示实验组细胞周期G1期比例降低,S期?G2期比例增加?Western blot显示实验组细胞Cyclin D1表达量增加(P < 0.05)?结论:骨髓间充质干细胞可促进HepG2肝癌细胞的增殖及空间克隆形成能力,其促进肝癌细胞体外增殖可能与Cyclin D1表达上调有关?     

微小RNA-1180转染对肾癌细胞生长的影响

目的 探讨微小RNA-1180(miR-1180)转染对肾癌细胞系786-O和ACHN生长的影响.方法 肾癌细胞分为两组:dsControl组和miR-1180组.实时定量(qRT)-PCR检测p21 mRNA的表达变化.Western blot检测p21、细胞周期蛋白依赖性激酶(CDK)4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达变化.流式细胞术(FCM)检测细胞周期变化,使用多靶扫描法(MTS)和集落形成实验检测细胞活力和增殖能力.结果 qRT-PCR结果显示,与对照组相比,转染miR-1180后786-O和ACHN细胞中p21 mR-NA水平分别上调2.54倍(P＜0.01)和2.49倍(P＜0.01).p21蛋白表达趋势与qRT-PCR结果相符,CDK4、CDK6和CyclinD1蛋白的表达明显下调.FCM结果显示,转染miR-1180后,位于G0/G1期的细胞比例明显增大,而位于S期和G2/M期的细胞比例明显下降,表明细胞周期被阻滞在Go/G1期.MTS结果显示,与dsControl组相比,转染miR-1180后,两种肾癌细胞活力明显降低.集落形成实验显示,miR-1180组的集落数数量明显较少,表明细胞增殖能力降低.结论 miR-1180能显著激活肾癌细胞中p21蛋白的表达,并抑制肾癌细胞786-O和ACHN的生长.     

卵巢上皮性癌OPCML基因的表达缺失和启动子甲基化

目的探讨OPCML基因在卵巢上皮性癌中的失表达及其与基因启动子CpG岛甲基化的关系。方法用逆转录—聚合酶链反应、限制性内切酶-聚合酶链反应检测卵巢正常组织、良性上皮性肿瘤、上皮性癌组织和SKOV-3、3AO、CAOV3卵巢癌细胞株OPCML基因的失表达及CpG岛甲基化。结果在卵巢癌中OPCMLmRNA的表达率显著低于正常卵巢组织(χ2=30·108,P=0·0000)和卵巢良性肿瘤组织(χ2=21·162,P=0·000)。SKOV-3和CAOV3细胞未见OPCMLmRNA表达,而3AO细胞可见OPCMLmRNA表达。在卵巢癌中,启动子CpG岛尤其是HapⅡ酶切位点甲基化率显著高于正常卵巢组织(χ2=13·630,P=0·0000)和良性肿瘤组织(χ2=11·797,P=0·000)。卵巢癌OPCML启动子CpG岛甲基化和mRNA失表达呈显著相关(r=11·589,P=0·002)。SKOV-3和CAOV3细胞有内切酶位点甲基化,而3AO细胞无酶切位点甲基化。结论卵巢上皮性癌细胞存在OPCML基因失表达;基因启动子CpG岛,尤其是HapⅡ酶切位点的甲基化是导致OPCML基因失表达的途径,但不是唯一途径。     

沉默HOXA13基因对肝癌HepG2和QGY-7703细胞恶性表型的影响

目的：探讨沉默HOXA13基因对肝癌细胞株HepG₂与QGY-7703恶性表型的影响,为肝癌的诊断及治疗提供新的分子靶点。方法：构建HOXA13基因的干扰重组质粒plent-U6-GFP/si-HOXA13,将其稳定转染至HepG₂与QGY-7703细胞;采用RT-PCR和Western blotting法鉴定干扰效果;以HOXA13基因沉默细胞为实验组,以转染空质粒的细胞为对照组,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法、细胞倍增时间测定、平板克隆形成实验和流式细胞术等分析HOXA13基因沉默后HepG₂与QGY-7703细胞生长速度、细胞倍增时间、克隆形成能力和细胞周期等的改变。结果：MTT实验,与对照组比较,实验组细胞的生长速度明显下降;其细胞周期也发生改变,G₁期细胞增多、S期细胞减少。对照组HepG₂和QGY-7703细胞平均倍增时间分别为（4.59±0.27）和（4.93±0.17） h,实验组HepG₂和QGY-7703细胞平均倍增时间分别为（6.02±0.86）和（6.43±0.66） h,2组间比较差异有统计学意义（P<0.05）。对照组HepG₂和QGY-7703细胞平均细胞克隆形成数分别为（264.00±12.62）和（269.00±4.55）个,实验组HepG₂和QGY-7703细胞平均细胞克隆形成数目分别为（165.00±10.61）和（215.00±4.43）个,2组比较差异有统计学意义（P<0.01）。结论：HOXA13基因可以使肝癌细胞HepG₂与QGY-7703的增殖加快、克隆形成能力增强、G₁期细胞减少、S期细胞增多,可以成为肝癌诊断和治疗新的分子靶点。