不同浓度5-ALA与不同激光辐照剂量介导的光动力学疗法对大肠癌细胞的体外杀伤作用

目的:探讨不同浓度的5-氨基乙酰丙酸(5-ALA)及不同激光辐照剂量介导的光动力学疗法(PDT)对人大肠癌细胞株LOVO的体外杀伤作用.方法:取对数生长期的LOVO细胞加入不同浓度的5-ALA,随之以相同剂量的激光辐照,并设阴性对照及空白对照;另取对数生长期的LOVO细胞,施以1.0 mmol/L 5-ALA及不同剂量的激光辐照,并设阴性对照与空白对照.均用MTT法测定细胞存活率.结果:在相同的辐照强度下,5-ALA的浓度在0.25～2.0 mmol/L时,细胞存活率随5-ALA浓度的增加而降低 (F=259.36, P＜0.001);但5-ALA的浓度在2.0～4.0 mmol/L时,细胞存活率无明显差异(P＞0.05).在5-ALA的浓度为1.0 mmol/L时,随辐照剂量增加细胞存活率逐渐降低(F=222.25,P＜0.000 1).而单用5-ALA或单纯激光辐照,细胞几乎无死亡.结论:5-ALA介导的PDT对大肠癌细胞有确切的杀伤作用.在一定浓度范围内,其杀伤作用随着5-ALA浓度的递增而增加,该作用存在浓度饱和现象.杀伤力与激光辐照剂量成正比.     

5-氨基酮戊酸对人鼻咽癌CNE细胞的光动力作用

 目的 观察及检测5-氨基酮戊酸（5-ALA）对于人鼻咽癌CNE细胞的光动力作用。方法 通过5-ALA与CNE细胞共培养后荧光检测确定适合的培养时间及药物浓度,从而观察5-ALA光动力治疗（5-ALA-PDT）后细胞的形态变化及坏死、凋亡情况,并且通过MTT检测5-ALA浓度及激光器能量密度与细胞生存率的关系。结果 5-ALA与CNE细胞共培养的适合时间为12 h,最大有效浓度1 mmol/L。5-ALA-PDT后能观察到细胞凋亡,能量密度越大,变化出现越早。并且,光动力后早期细胞主要凋亡,晚期细胞逐渐坏死。当激光能量密度不变时,细胞死亡率随药物浓度增高而增高,但并不呈线性相关;而5-ALA小于1 mmol/L且固定不变时,细胞生存率随能量密度增高而降低,且呈线性相关。结论 5-ALA对CNE细胞有明显的杀伤作用,并且PDT后的细胞生存率与5-ALA浓度及激光的能量密度相关。     

转染反义MIF对人胃癌细胞的影响

目的 探讨反义巨噬细胞移动抑制因子(MIF)对人胃癌MGC-803细胞的影响.方法 将胃癌MGC-803细胞分为pcDNA3.1-Anti MIF组与空白对照组.pcDNA3.1-Anti MIF组采用转染技术将MIF反义RNA真核表达质粒(pcDNA3.1-AntiMIF)转入MGC-803细胞;空白对照组转染pcDNA3.1-sh-MIF质粒.qRT-PCR与蛋白质印迹法检测转染效率;采用MTT法、侵袭实验、AnnexinV-FITC和PI染色法分别检测反义MIF对MGC-803细胞增殖、侵袭、凋亡的影响.结果 qRT-PCR结果显示,pcDNA3.1-Anti MIF组MIF mRNA表达量(2.086±0.248)较空白对照组(6.992±0.342)明显下调;Western blot显示,pcDNA3.1vAntiMIF组MIF蛋白表达水平量(0.361±0.043)较空白对照组(1.171±0.091)明显下调;MTT实验结果显示,pcDNA3.1-AntiMIF组MGC-803细胞的OD值(0.436±0.017)较空白对照组(0.563±0.019)明显下降;侵袭实验结果显示,pcDNA3.1-AntiMIF组穿过基质胶的MGC-803细胞数(73.67±8.54)较空白对照组(137.30±11.91)明显减少;AnnexinV-FITC和PI染色法结果显示,pcDNA3.1-AntiMIF组MGC-803细胞的凋亡率(21.61±4.62)%较空白对照组(7.67±0.63)%明显增加.以上各项指标比较差异均具有显著统计学意义(P<0.01).结论 反义MIF能抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖与侵袭,并能诱导凋亡.     

5-氨基乙酰丙酸光动力杀伤人鼻咽癌耐药/非耐药细胞株的实验研究

目的 观察5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)光动力学效应对体外培养人鼻咽癌细胞株CNE2及其顺铂耐药株CNE2/DDP的生物作用,探讨光动力治疗多药耐药鼻咽癌的可行性.方法 对CNE2与CNE2/DDP分别加入不同浓度的5-ALA (0.01、0.05、0.10、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0 mmol/L)孵育4 h,予波长为630 nm的半导体激光进行照射,能量密度分别为2、5、10、20 J/cm2,继续孵育24 h,用四唑盐比色法测定细胞存活率;两株细胞与2.0 mmol/L浓度的 5-ALA溶液共孵育4 h后,用流式细胞仪检测细胞内生性光敏剂原卟啉Ⅸ的荧光强度.结果 5-ALA光动力对体外培养的CNE2和CNE2/DDP细胞均有杀伤作用,表现为对5-ALA浓度、激光剂量的量-效依赖关系.激光能量为20 J/cm2时,5-ALA对CNE2和CNE2/DDP细胞的半数杀伤浓度分别为0.07 mmol/L与0.375 mmol/L,二者比较差异显著(P＜0.01);不同5-ALA浓度、不同激光剂量条件下CNE2细胞存活率显著低于CNE2/ DDP (P＜0.05);CNE2和CNE2/DDP的细胞内荧光强度分别为(197.33±1.45)、(106.36±2.31),相差非常显著(P＜0.01).结论 5-ALA-PDT对CNE2和CNE2 /DDP均有杀伤作用,但CNE2/DDP对其敏感性低于CNE2,表明CNE2/DDP对5-ALA-PDT存在一定程度的交叉抗性,增加5-ALA浓度和/或增大激光剂量可以在一定程度上克服这种抵抗.     

胃癌中自发性癌细胞的凋亡

目的 :观察胃癌组织中自发性癌细胞凋亡及癌基因MDM2、病理组织学类型、浸润深度、淋巴结癌转移对肠型胃癌和胃型胃癌自发性癌细胞凋亡的影响。方法 :应用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL)技术显示凋亡细胞 ,免疫组化SABC法显示MDM2 ,组织化学Mowry阿尔辛蓝过碘酸雪夫 (ABPAS)染色法显示胃癌组织中的中性和酸性粘液。结果 :4 8例胃癌平均凋亡指数为 8.6 0± 2 .6 0 ,其中 30例肠型胃癌平均凋亡指数为 6 .80± 1.6 7,显著高于 18例胃型胃癌 (3.6 0± 2 .6 0 ) ;30例肠型胃癌MDM2阴性者自发性凋亡指数为 7.5 0± 1.6 2 ,明显高于MDM2阳性者 (5 .80± 1.14 ) ;18例胃型胃癌MDM2阴性者自发性凋亡指数为 7.2 0± 1.10 ,亦明显高于MDM2阳性者 (2 .2 0± 1.36 ) ,胃型胃癌MDM2的阳性率高于肠型胃癌 (χ2 =4 .6 8,P <0 .0 5 )。无论是肠型胃癌还是胃型胃癌 ,累及与未累及浆膜的癌细胞凋亡指数差异无显著性 (分别为t=0 .5 2 ,P >0 .0 5 ;t=1.70 ,P >0 .0 5 ) ;5种组织学类型间癌细胞凋亡指数的比较 ,差异均无显著性 (分别为F =1.90 ,P >0 .0 5 ,F =2 .2 3,P >0 .0 5 )。肠型胃癌有或无淋巴结转移组癌细胞凋亡指数无明显差异 (t =0 .2 6 ,P >0 .0 5 ) ;而胃型胃癌有或无淋巴结转移组癌细胞凋?     

西咪替丁增强5-氟脲嘧啶对人胃癌细胞的生长抑制作用

目的 观察不同浓度的西咪替丁、5-氟脲嘧啶(5-Fu)单用或联合应用对人胃癌细胞MGC-803、BGC-823生长及凋亡的影响.方法 用MTTT法检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞MGC-803、BGC-823存活率的影响;流式细胞仪检测西咪替丁与5-Fu联合应用对胃癌细胞凋亡率的影响.结果 西咪替丁与5-Fu联合应用时,西咪替丁在无毒浓度(5～50μmol/L)即可显著增强低浓度5-Fu对胃癌细胞的生长抑制作用.同时还发现,西咪替丁能增强5-Fu诱导胃癌细胞凋亡.结论 西咪替丁可提高人胃癌细胞MGC-803、BGC-823对化疗药物5-Fu的敏感性,抑制细胞增殖,促进细胞凋亡.     

α5整合素亚基在肺癌细胞凋亡中作用的实验研究

目的探讨α5整合素亚基在肺癌细胞凋亡中的作用.方法以特异性单克隆抗体阻断肺癌细胞中α5整合素亚基的功能,TUNEL实验检测肺癌细胞的凋亡情况.结果肺癌GLC-82细胞24h、48h AI值分别为(1.3±0.67)%和(2.4±0.84)%.在1.0μg/ml、5.0μg/ml和10.0μg/ml浓度的抗体作用后24h的AI分别为(2.0±0.66)%、(2.7±0.67)%和(2.8±0.63)%;48h的AI分别为(3.4±0.96)%、(4.7±1.33)%和(5.1±1.19)%.与对照组相比差异有显著性(P＜0.05).结论α5整合素亚基可能抑制体外培养的GLc-82肺癌细胞的凋亡.     

胃复春胶囊提取物对人胃癌细胞系MGC-803细胞凋亡及Bcl-2/Bax表达的影响*

目的研究胃复春胶囊提取物对人胃癌细胞系MGC-803细胞的凋亡作用及其作用机理。方法 MGC-803细胞分别用不同浓度的胃复春胶囊提取物处理。CCK-8法检测细胞活力;Hoechst 33258染色观察形态学改变;流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期;Western blot检测Bcl-2、Bax、Caspase-3和Caspase-9的表达。结果 胃复春胶囊提取物（浓度为0～100 μg·mL-1）可以浓度和时间依赖性地降低MGC-803细胞的活力。Hoechst 33258染色显示胃复春胶囊提取物处理后的MGC-803细胞膜通透性增高。流式细胞检测结果显示胃复春胶囊提取物作用于MGC-803细胞后可以诱导细胞凋亡,细胞凋亡率分别为（20.4 ± 2.7）%（25 μg·mL-1）、（41.3 ± 6.2）%（50 μg·mL-1）、（68.8 ± 5.8）%（100 μg·mL-1）,明显高于对照组凋亡率（3.8 ± 1.6）%（0 μg·mL-1）（P<0.05）。MGC-803细胞经过不同浓度胃复春胶囊提取物处理24 h后,处于G0/G1期细胞比例升高,而G2/M期和S期细胞比例下降;免疫印迹实验结果表明胃复春胶囊提取物（浓度为25,50,100 μg·mL-1）处理组 MGC-803 细胞中cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9和Bax表达量升高,而Bcl-2表达量降低,且呈剂量依赖性。结论 胃复春胶囊提取物能抑制MGC-803细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与下调Bcl-2基因的表达,上调Bax基因的表达以及增加Caspases活性有关。     

丹参酮ⅡA抑制人肝癌细胞的生长及诱导其凋亡的实验研究

目的　研究丹参酮ⅡA对人肝癌细胞系BEL 740 2的生长抑制及凋亡诱导作用。方法　 0～ 10 μg/ml丹参酮ⅡA作用人肝癌细胞 72h后 ,用MTT比色法观察其细胞毒性 ,荧光显微镜、透射电镜检测细胞凋亡 ;流式细胞术 (Flowcy tometry ,FCM )定量检测 5 μg/ml丹参酮作用不同时间后的细胞凋亡率。 结果　丹参酮ⅡA以剂量依赖的方式抑制肝癌细胞的生长 ,其IC50 值为 6.2 8μg/ml。 1～ 10 μg/ml丹参酮ⅡA作用 72h后 ,肝癌细胞表现为细胞皱缩、核染色质浓缩、核碎裂、细胞出芽以及凋亡小体形成等凋亡特征性的形态学改变。流式细胞仪直方图上可见亚二倍体峰 ,5 μg/ml浓度作用12、2 4、3 6、48、72h后的细胞凋亡率分别为 ( 2 .3 2± 0 .16) %、( 3 .0 1± 0 .3 5 ) %、( 3 .87± 0 .43 ) %、( 6.73± 0 .5 8) %和 ( 2 0 .85±1 74) % ,与对照组 ( 1.0 7± 0 .13 ) %比较均有显著性差异。结论　在体外丹参酮ⅡA能诱导人肝癌细胞系BEL 740 2凋亡 ,这可能为丹参酮ⅡA抑制其生长的机制     

5-氨基乙酰丙酸介导光动力治疗甲状旁腺功能亢进的前期研究

目的研究5-氨基乙酰丙酸(5-aminolevulinic acid,5-ALA)介导光动力治疗(photodynamic therapy,PDT)对正常大鼠甲状旁腺及其周围组织形态和功能的影响,探索采用该法治疗甲状旁腺功能亢进的可行性。方法 64只6~8周龄健康雌性SD大鼠,体质量150~200 g,按光敏剂剂量(0、100、300、500)mg/kg平均分为4个组,每组按光动力照射时间(0、10、15、20)min再分为4个亚组,共16个处理组(n=4),手术暴露甲状旁腺及其周围组织后行光动力照射,ELISA检测照射前后血清甲状旁腺激素(parathyroid hormone,PTH)、三碘甲状腺原氨酸(triiodothyronine,T3)、甲状腺素(thyroxine,T4)、促甲状腺素(thyroid-stimulating hormone,TSH)浓度,并观察照射前后各组织形态学上的变化。结果单独使用光敏剂或光照对甲状旁腺功能无影响,光动力治疗短时间内即可造成甲状旁腺功能的减低,而对甲状腺功能无显著影响,随着光敏剂浓度和光照时间的增加,其对甲状旁腺功能的破坏作用增强。当光敏剂浓度为500 mg/kg,光照时间为10、15、20 min时,血清PTH值分别为(75.24±6.06)ng/L、(47.23±5.18)ng/L、(39.10±4.03)ng/L,与对照组(0 mg/kg,0 min)(128.19±4.75)ng/L相比,具有显著性差异(P<0.05)。组织学检查显示,经过光动力照射后的甲状旁腺组织与正常组比较,腺体包膜仍比较完整,其内纤维结缔组织增生明显,主细胞数明显减少,代之以大量空泡状的脂肪细胞,而甲状腺及其周围的肌肉组织在形态学上未见明显改变。结论以5-ALA为光敏剂介导的光动力疗法可对大鼠甲状旁腺组织及其功能产生特异性破坏作用。     

5-ALA治疗和hTERT mRNA的反义寡核苷酸联合应用对人卵巢癌细胞的杀伤作用及其机制

目的：观察5-氨基乙酰丙酸（5-ALA）光动力治疗（PDT）和人端粒酶催化亚单位 (hTERT) mRNA的反义寡核苷酸（ASODN)联合应用对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制及促凋亡作用,探讨两种方法联合应用协同促进对人卵巢癌3AO细胞的杀伤作用机制。方法：采用MTT法筛选不同浓度5-ALA 和激光能量照射对人卵巢癌3AO细胞增殖抑制作用的最佳组合参数; RT-PCR法检测hTERT ASODN和SODN转染后hTERT mRNA表达水平的变化。将人卵巢癌3AO细胞分为空白
对照组、hTERT ASODN转染组、hTERT SODN转染组、5-ALA PDT组、hTERT ASODN转染+5-ALA PDT组和hTERT SODN转染+5-ALA PDT组,应用MTT法检测各组人卵巢癌3AO细胞增殖抑制率;应用膜联蛋白V-硫氰酸荧光素(AnnexinV-FITC)/碘化丙啶(PI)双染色结合流式细胞术检测
各组人卵巢癌3AO细胞凋亡率。结果：5-ALA PDT对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制作用随着光敏剂浓度的增加和激光能量的增大而增加(P<0.05);不同浓度hTERT ASODN转染人卵巢癌3AO细胞24 h后,hTERT mRNA表达水平呈浓度依赖性下调(P<0.05),而hTERT-SODN对人卵巢癌3AO细胞hTERT mRNA表达无显著影响(P>0.05)。hTERT ASODN转染+5-ALA PDT (5-ALA浓度为0.5 mmol•L-1,激光能量密度为2.50 J•cm-2)组人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制率高于5-ALA PDT组和hTERT ASODN组(P<0.05)。hTERT ASODN转染+5-ALA PDT组人卵巢癌3AO细胞的凋亡率为29.28％,显著高于hTERT ASODN 转染组（12.79％）和5-ALA PDT组（21.19％)(P<0.05）。结论：hTERT ASODN转染与5-ALA PDT联合治疗可协同增强对人卵巢癌3AO细胞的增殖抑制作用,其机制可能与联合作用促进细胞凋亡有关联。     

Influence of CaNa2 EDTA on topical 5-aminolaevulinic acid photodynamic therapy

Background We asssessed whether the CaNa2 EDTA could improve the accumulation of protoporphyrin Ⅸ (PpⅨ) and photosensitisation in HEp-2 cells as well as the depth of treatment of skin cancers on the topical 5-Aminolaevulinic acid (5-ALA) PDT.Methods HEp-2 cells were incubated with 5-ALA (0-1mmol/L) and CaNa2EDTA (0-1mmol/L) for 4 hours, intracellular protoporphyrin Ⅸ content was quantified by extraction, and cell viability was assessed by use of the methyl-tetrazolium (MTT) assay four hours after exposure to light. In comparison with the pictures before and after treatment, depth of treatment could be determined using a Acuson Sequioa 512 phase-array system in paired experiments.Results PpⅨ accumulation increased with increasing extracellular concentrations of ALA (0-1mmol/L). Adding 1mmol/L of CaNa2EDTA increased 30% PpⅨ accumulation over the same period of incubation in the concentration of 1mmol/L ALA. Significant difference was observed between the 5-ALA alone group and 5-ALA combined CaNa2 EDTA group in the PpⅨ accumulation (P&lt;0.01). Cell viability after exposure to light decreased with adding CaNa2 EDTA, a statistical difference in a same fluence above 1.2 J/cm2 between two groups was demonstrated (P&lt;0.05, P&lt;0.01 respectively). Depth of treatment of skin cancers were increased in CaNa2 EDTA-treated group.Conclusion CaNa2 EDTA could improve the PpⅨ accumulation and photosensitisation in HEp-2 cells. Clinically, CaNa2 EDTA could increase the depth of treatment in the cutaneous cancers.     

5-氨基乙酰丙酸介导的光动力学治疗人脑胶质瘤

目的:探讨光敏剂5-氨基乙酰丙酸介导光动力学疗法对体外培养的U251细胞株的疗效。方法:收集对数期生长的U251细胞,用台盼蓝染色细胞计数法确认细胞存活率在95%以上,接种于96孔板上,每孔含细胞数：5 000～10 000个, 并分别以不同累积能量（每孔累积能量分别为（15、30、45、60、75） J/cm2）、不同浓度的5-氨基乙酰丙酸（浓度分别为0 、0.5 、1.0 、1.5 、2.0 、2.5 、3.0mmol/L）介导PDT,光辐照后各孔补加50μL含10%新生牛血清的培养液,继续培养24 h。使用CCK-8法测定各孔细胞数并计算细胞存活率。结果：⑴ 5-氨基乙酰丙酸本身对U251细胞无细胞毒性作用。⑵单孔累积能量45 J/cm2、5-氨基乙酰丙酸浓度为2.5 mmol/L时,PDT效果最好,U251细胞生存率约为50.2%。结论: 5-氨基乙酰丙酸介导的PDT对U251细胞有杀伤作用。 [关键词] 光动力学疗法;光敏剂;5-氨基乙酰丙酸;U251。     

A comparative study on the enhancement efficacy of specific and non-specific iron chelators for protoporphyrin IX production and photosensitization in HaCat cells

The iron chelators can be utilized in target cells to improve 5-aminolaevulinic acid （ALA）-based photodynamic therapy （PDT）. The purpose of this study is to compare the effect of two kinds of iron chelators, desferrioxamine （DFO） and ethylenediaminetetraacetic acid （EDTA） on the enhancement of ALA-PDT. HaCat cells were cultured in medium containing 2.0 mmol/L of ALA and 0.5 mmol/L of DFO or EDTA. After 3-h incubation in the dark, the concentration of cellular pro-toporphyrin Ⅸ （PpⅨ） was detected by high performance liquid chromatography （HPLC）, and the fluorescence of PpⅨ was observed at 630 nm emission under confocal laser scanning microscope. For PDT, HaCat cells were irradiated using 632.8 nm laser, and the fractions of apoptotic and necrotic cells were flow cytometrically assayed. Related differences in morphology and ultrastructure of Ha-Cat cells were observed using optical microscope or transmission electron microscope. Compared to incubation with ALA alone, the addition of DFO or EDTA increased the concentration of cellular PpⅨ and the fluorescent density of PpⅨ, and also increased cell death ratio after PDT. PDT using ALA plus DFO produced the highest cellular PpⅨ level, greatest cell death ratio and most severe structural damage to the cells. It was concluded that both DFO and EDTA could enhance ALA-based PpⅨ production and PDT. Compared to the non-specific iron chelator of EDTA, the specific chelator, DFO, showed more potential for the enhancement.     

5-氨基乙酰丙酸光动力疗法诱导人宫颈癌细胞株Hela和Siha凋亡的研究

目的  探讨5-氨基乙酰丙酸结合光动力疗法对人宫颈腺癌Hela细胞株和鳞癌Siha细胞株凋亡的影响及其相关机制。方法  噻唑蓝（MMT）法检测光动力疗法对人宫颈癌细胞株Hela和Siha增殖的影响,并比较不同的抑制作用。Annexin V-FITC/PI双染法检测光动力疗法对Hela和Siha细胞株凋亡的影响。免疫细胞化学法检测光动力疗法对两种细胞Her-2/neu基因的蛋白表达影响。结果   Hela比Siha细胞株对光动力治疗更敏感。5-氨基乙酰丙酸2mmol/L、10J/cm2激光剂量孵育为光动力疗法体外杀伤Hela和Siha细胞株较理想的实验条件,在该条件下Hela、Siha细胞的IC50分别为0.724、1.206mmol/L。光动力疗法可显著诱导Hela和Siha细胞凋亡,并抑制Hela和Siha细胞Her-2/neu基因的蛋白表达。结论  光动力治疗在体外对人宫颈腺癌Hela细胞株和鳞癌Siha细胞株有明显的增殖抑制作用,还能诱导两种细胞发生凋亡,其机制可能与抑制Her-2/neu基因表达有关。     

稳定过表达Cdx2基因的胃癌细胞株的建立

目的 建立稳定过表达Cdx2基因的胃癌细胞株。方法 使用阳离子脂质体分别将真核表达载体pCMV-Cdx2-HA或空载体pCMV-HA转染至人胃癌细胞MGC-803中,G418筛选出阳性克隆后扩大培养。RT-PCR和Western Blot技术检测各组胃癌细胞中Cdx2基因mRNA和蛋白的表达情况,将挑选出的稳定株命名为MGC-803/Cdx2细胞（转染组）和MGC-803/EV细胞（空载体组）;流式细胞仪检测MGC-803细胞（未转染组）、MGC-803/EV细胞和MGC-803/Cdx2细胞的细胞周期和凋亡情况。结果 成功筛选出稳定过表达Cdx2基因的MGC-803胃癌细胞,即MGC-803/Cdx2细胞;与MGC-803细胞和MGC-803/EV细胞比较,MGC-803/Cdx2细胞中Cdx2基因mRNA和蛋白的表达明显增加（P<0.05）,而且细胞周期G0/G1期比例和凋亡率也明显增加（P<0.05）。结论 成功构建了稳定过表达Cdx2基因的胃癌细胞株,而且Cdx2过表达使细胞周期停滞、凋亡增加。     

姜黄素对胃癌MGC-803细胞磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶表达的影响

目的 探讨姜黄素对胃癌MGC-803细胞磷酸化-丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶(p-AKT)表达的影响.方法 将MGC-803细胞分为空白对照组和四个药物实验组,各组姜黄素浓度分别为5 μmol/L,10 μmol/L,20 μmol/L,40 μmol/L.经不同浓度的姜黄素作用24 h、48 h、72 h后,应用CCK8法检测姜黄素对MGC-803细胞增殖的影响;应用Annexin V-FITC/PI双染色法测定不同浓度的姜黄素作用24 h后胃癌MGC-803细胞凋亡情况;应用蛋白免疫印迹法检测不同浓度姜黄素作用24 h对MGC-803细胞内p-AKT蛋白表达水平的影响.结果 姜黄素对MGC-803细胞增殖有抑制作用,且呈剂量依赖性和时间依赖性.在5~40 μmol/L浓度范围内,姜黄素呈浓度依赖性地促进MGC-803细胞的凋亡,并下调MGC-803细胞中p-AKT的水平.结论 姜黄素可能是通过抑制p-AKT蛋白的表达和AKT信号通路促进MGC-803细胞凋亡并抑制其增殖.     

miR-183-5p/mTOR信号轴介导有氧糖酵解促进 胃癌细胞增殖

目的 探讨miR-183-5p/mTOR信号轴是否通过影响胃癌细胞有氧糖酵解过程而促进胃癌细胞增殖,为胃癌的治疗提供新靶点。方法 使用转染试剂盒对MGC-803胃癌细胞进行inhibitor NC、miR-183-5p inhibitor、mimics NC、miR-183-5p mimics转染;葡萄糖、乳酸、腺嘌呤核苷三磷酸（adenosine triphosphate,ATP）检测试剂盒检测低葡萄糖、乳酸、ATP水平变化;通过蛋白质印迹和聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测雷帕霉素机械靶蛋白（mechanistic target of rapamycin,mTOR）mRNA、葡萄糖转运蛋白（glucose transporter 1,GLUT1）和乳酸脱氢酶（recombinant lactate dehydrogenase A,LDHA）蛋白;二苯基四氮唑溴盐法（multiple table tournament,MTT）检测MGC-803胃癌细胞活性。结果 与inhibitor NC组相比,miR-183-5p inhibitor在胃癌细胞中低表达（P<0.001）,与mimics NC组相比,miR-183-5p inhibitor组在胃癌细胞中高表达miR-183-5p（P<0.0001）;过表达miR-183-5p可促进MGC-803胃癌细胞对葡萄糖的消耗（P<0.01）,生成更多的乳酸和ATP（P<0.01）、上调LDHA和GLUT1蛋白（P<0.01）、促进mTOR mRNA表达、促进胃癌细胞增殖。结论 miR-183-5p/mTOR信号轴通过调控有氧糖酵解相关蛋白表达促进MGC-803胃癌细胞增殖。     

LincRNA-p21敲减对胃癌细胞生长和转移的影响及其作用机制

目的：探讨LincRNA-p21敲减对胃癌细胞增殖、迁移与侵袭的影响,并阐明其作用机制。方法：采用实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测胃癌组织、癌旁组织以及3种胃癌细胞（MGC-803、MKN-45和SGC-790）和正常胃黏膜上皮细胞GES-1中LincRNA-p21mRNA表达水平。以MGC-803细胞作为研究对象,实验分为sh-NC组、sh-LincRNA-p21组和AG490+sh-LincRNA-p21组。sh-NC组MGC-803细胞采用慢病毒感染sh-NC;sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞采用慢病毒感染sh-LincRNA-p21;AG490+sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞采用慢病毒感染sh-LincRNA-p21后,再采用10 μg·L^-1 AG490处理细胞。采用5-乙炔基-2'-脱氧尿苷（EdU）掺入法检测各组MGC-803细胞EdU掺入百分比,CCK-8法检测各组MGC-803细胞活性,Transwell法检测各组MGC-803细胞迁移数和侵袭数,Western blotting法检测sh-NC组和sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞中p-JAK1、p-STAT3和p-STAT5蛋白表达水平。将sh-NC组和sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞移植入BALB/c裸鼠颈部皮下成瘤,检测瘤体体积和质量。结果：与癌旁组织比较,胃癌组织中LincRNA-p21mRNA表达水平明显降低（P<0.01）;与GES-1细胞比较,MGC-803、MKN-45和SGC-790细胞中LincRNA-p21表达水平均明显降低（P<0.01）。与sh-NC组比较,sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞EdU掺入百分比、细胞活性、细胞迁移数和侵袭数、p-JAK1、p-STAT3和p-STAT5蛋白表达水平均明显升高（P<0.05或P<0.01）;与sh-LincRNA-p21组小鼠比较,AG490+sh-LincRNA-p21组MGC-803细胞活性、细胞迁移数和侵袭数均明显降低（P<0.05或P<0.01）。裸鼠成瘤实验,与sh-NC组比较,sh-LincRNA-p21组小鼠瘤体体积和质量均明显增加（P<0.05或P<0.01）。结论：敲减LincRNA-p21可明显促进胃癌细胞的生长与转移,且该促进作用可能与其促进JAK-STAT信号通路活性有关。