诊断超声照射后人早孕绒毛Fas/FasL蛋白表达的研究

目的 :检测诊断超声辐照与人早孕绒毛 Fas/ Fas L蛋白表达的关系。方法 :对拟进行人工流产的 2 4例早孕 (4 5～ 6 0 d)妇女随机分为 4组 :对照组为空白照射组、10 min组、2 0 min组和 30 min组。应用 Hp85 0 0彩色多普勒超声诊断仪 ,经腹对孕囊进行不同时间的持续照射 ,照射后 2 4h取材。用免疫组织化学技术检测上述各组绒毛滋养层细胞 Fas/ Fas L 蛋白表达情况。结果 :超声照射后 10 min组绒毛滋养层细胞 Fas/ Fas L蛋白表达率与对照组无差别 (P>0 .0 5 ) ;2 0 min组和 30 min组滋养层细胞表达率明显增加 ,显著大于对照组和 10 min组 (P<0 .0 0 1)。结论 :诊断超声持续照射早孕孕囊组织 >10 min可引起绒毛滋养层细胞 Fas/ Fas L 蛋白表达率增加 ,从而诱导滋养层细胞凋亡增加     

诊断超声对人早孕绒毛bc1—2蛋白表达的研究

目的：检测诊断超声与人早孕绒毛bc1-2蛋白表达的关系。方法：对拟进行人工流产的24例早孕（45－60天）妇女随机分为4组;对照组为空白照射组,10min组,20min组和30min组,应用HP 8500彩色多普勒超声诊断仪,对孕囊进行不同时间的持续照射,照射后25h取材,用免疫组织化学技术检测上述各组绒毛滋养层细胞bc1-2蛋白表达情况。结果：超声照射后10min组绒毛滋养层细胞bc1-2蛋白表达率与对照组无差别（P＞0．05）,20min和30min组滋养层细胞表达率明显减少,显著低于对照组和10min组（P＜0．001）,结论：诊断超声持续照射早孕孕囊组织＞10min可引起绒毛滋养层细胞bc1-2蛋白表达率下降,可能与细胞凋亡增加有关。     

诊断级超声辐照对人早孕绒毛细胞TNF-α及其p55型受体表达的影响

目的探讨诊断级超声剂量与人早孕绒毛肿瘤坏死因子仪（TNF—α）及其p55型受体（p55 TNFR）表达的关系,探寻诊断级超声诱导滋养层细胞凋亡的机制。方法拟进行人工流产的孕45～60d妇女60例,随机分为4组：即经腹对孕囊持续辐照10min、20min、30min组和空白辐照对照组。超声辐照后24h内行人工流产后取材,用免疫组化技术检测上述各组绒毛滋养层细胞TNF—α和p55 TNFR表达情况。结果超声辐照10min组绒毛滋养层细胞TNF-α和p55TNFR表达率与对照组比较差异无统计学意义;20min组和30min组TNF—α、p55 TNFR明显增加,分别为（61．94±6．34）％、（67．38±8．77）％和（65．39±5．96）％、（74．634±7．38）％,显著大于对照组（54．26±6．48）％、（61．56±9．23）％和10min组（55．54±2．82）％、（62．75±11．84）％,P〈0．01。结论诊断级超声持续辐照早孕孕囊组织大于10min,可引起绒毛滋养层细胞TNF—α和p55TNFR表达率增加,从而诱导滋养层细胞凋亡。     

诊断超声照射大鼠早孕胚胎组织细胞Bcl-2表达的影响

目的 研究诊断超声照射大鼠早孕胚胎组织细胞Bcl-2表达的影响,探讨诊断超声诱导细胞凋亡的机制.方法 采用频率为3.5 MHz超声分别照射孕7 d大鼠腹部子宫体表投影区,分为照射0 min组、10 min 组、20 min 组、30 min 组,超声照射后24 h取胚胎组织,SP免疫组织化学检测Bcl-2蛋白表达水平的变化.结果 随着照射时间的延长,各组Bcl-2阳性表达率逐渐下降,与照射时间呈负相关.其中10 min组与0 min组相比差异无显著性(P>0.05),20 min组、30 min组与0 min组相比差异有非常显著性(P<0.01).结论 诊断超声持续照射大鼠早孕胚胎超过20 min使Bcl-2 蛋白水平表达下调,提示诊断超声长时间照射能抑制抗凋亡因子Bcl-2的表达,从而诱导细胞凋亡.     

彩色多普勒超声对大鼠早孕胚胎组织细胞凋亡及Bcl—xl表达的影响

目的 探讨诊断用彩色多普勒超声对大鼠早孕胚胎组织细胞凋亡及B细胞淋巴瘤/白血病-xl基因(Bcl-xl)表达的影响.方法 彩色多普勒超声固定持续照射孕鼠子宫体表位置,60只大鼠按照射时间分为0、5、10、20、30、60 min组.利用Western blotting检测胚胎组织Bcl-xl表达强度变化,流式细胞仪检测胚胎组织凋亡细胞百分率.结果 各组胚胎组织中Bcl-xl蛋白均有表达,照射20 min、30 min组较0 min组Bcl-xl表达增强(P<0.05),照射60 min组较 0 min组Bcl-xl表达减弱(P<0.05).各组胚胎组织均存在凋亡细胞,照射30 min组、60 min组凋亡细胞百分率高于0 min组 (P<0.05).结论 诊断用彩色多普勒超声过度照射早孕大鼠,可诱发胚胎组织细胞凋亡,抑凋亡基因Bcl-xl参与了细胞凋亡的调节过程.     

诊断超声对HEK-293细胞凋亡的影响及其机制

目的 探讨诊断超声照射对体外培养的HEK-293细胞凋亡的影响.方法 采用HEK-293细胞,构建超声照射模型,采用4个超声照射剂量浓度(0 min、10 min、20 min和30 min),每个浓度设3个平行瓶,重复三次.处理后行Annexin V-FITC/PI双染,流式细胞仪行凋亡细胞计数;免疫细胞化学检测Caspase-3凋亡蛋白表达水平的变化.结果 Annexin V-FITC/PI双染色显示,随着超声照射剂量的增加,流式计数的细胞凋亡率增加,20 min组具有统计学意义(P<0.05),30 min组具有显著统计学意义(P<0.01);同时可使凋亡蛋白酶Caspase-3表达水平增加.结论 特定剂量的超声聚焦照射可引起部分细胞凋亡改变,并具有一定量效关系.     

彩色多普勒超声对大鼠早孕胚胎组织细胞凋亡及Caspase3表达的影响

目的探讨诊断用彩色多普勒超声对大鼠早孕胚胎组织细胞凋亡及Caspase3（天冬氨酸特异酶切的半胱氨酸蛋白酶3）表达的影响。方法探头频率为2.5MHz的彩色多普勒超声固定持续照射孕鼠子宫体表位置，60只大鼠按照射时间分为0、5、10、20、30及60min组。利用Western blotting检测胚胎组织Caspase3表达强度变化，进行Caspase3活性测定，流式细胞仪检测凋亡细胞百分率。结果各组胚胎组织中Caspase3蛋白均有表达，照射30、60min组Caspase3表达增强，与0min组比较，相差有显著性意义（P〈0.05）。照射20、30、60min组Caspase3活性高于0min组，相差有显著性意义（P〈0．05）。各组胚胎组织均存在凋亡细胞，照射30、60min组凋亡细胞百分率高于0min组，相差有显著性意义（P〈0．05）。结论诊断用彩色多普勒超声过度照射早孕大鼠，可促使凋亡基因Caspase3蛋白合成增加，活性升高，诱发胚胎组织细胞凋亡。     

经阴道彩色多普勒超声辐照对人早孕绒毛细胞凋亡的影响

目的探讨诊断用经阴道彩色多普勒超声(TVCD)辐照人早孕孕囊一定时间后对人绒毛细胞凋亡率的影响,以期为TVCD在产科的安全应用提供支持依据。方法采用流式细胞仪检测经不同辐照时间及辐照后不同时间取材的绒毛细胞进行凋亡率的分析。结果对照组偶见散在的早期凋亡细胞,早期凋亡率极低;照射各组绒毛细胞的早期凋亡率随着辐照时间的延长而增高;但随着时间的推移(72h后),绒毛细胞早期凋亡率下降至正常范围。结论TVCD辐照人早孕绒毛尽管能造成早孕绒毛细胞凋亡,凋亡率随着辐照时间的延长而增高,但这种早孕绒毛细胞凋亡在一定超声辐照范围内可以恢复到正常范围。     

Bcl-2、Bax、Caspase-3表达与颞叶癫痫发病的相关性研究

目的：探讨神经元凋亡与颞叶癫痫患者海马硬化的关系。方法：取15例颞叶癫痫患者手术切除标本（癫痫组）和5例无癫痫发作的患者正常脑组织标本（对照组）,用原位末端标记（TUNEL）方法检测神经元凋亡,免疫组化染色检测细胞凋亡相关基因表达产物Bcl-2、Bax、Caspase-3蛋白的表达。结果：癫痫组和对照组的TUNEL阳性细胞平均百分率分别为（52．2±3．2）％、（4．0±1．8）％,差异有统计学意义（P〈0．05）。免疫组化染色结果表明,对照组患者脑组织内Bcl-2蛋白无表达,癫痫组患者脑内Bcl-2蛋白表达明显增强（P〈0．05）;Bax蛋白在癫痫组与对照组中均微弱表达,差异无统计学意义;Caspase-3在对照组中有轻微表达,在癫痫组表达明显增强,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：神经元凋亡部分参与癫痫患者海马硬化的形成,Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白在这一过程中可能发挥作用。     

沉默HDAC4抑制多发性骨髓瘤细胞增殖作用机制的研究

目的探究沉默组蛋白去乙酰化酶4(HDAC4)基因表达对多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖、凋亡的影响以及作用机制。方法脂质体Lipofectamine 2000转入LP-1细胞中,实验分为对照组(不做任何处理)、阴性组(转入siRNA NC)、siRNA HDAC4组(转入siRNA HDAC4)。CCK-8法检测细胞的增殖活性,Annexin V-FITC/PI双染色法检测细胞的凋亡率,蛋白质印迹法(Western Blot)检测细胞中HDAC4、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的表达量。结果转染siRNA HDAC4后,LP-1细胞中HDAC4蛋白的表达量显著低于对照组(P 0. 05);与对照组相比,siRNA HDAC4组细胞的增殖活性显著降低(P 0. 05);而凋亡率显著增加(P 0. 05); siRNA HDAC4组细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平显著高于对照组(P 0. 05),但Bcl-2蛋白水平显著降低(P 0. 05)。结论沉默HDAC4基因可抑制多发性骨髓瘤LP-1细胞增殖,诱导其凋亡,可能通过降低Bcl-2水平,促进Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9表达发挥作用。     

急性缺血再灌注心肌细胞凋亡及凋亡基因与左室局部功能的实验研究

目的 应变率成像观察犬急性缺血再灌注后左心室局部功能，与细胞凋亡及心肌组织中caspase-3 mRNA和蛋白表达的变化。方法 健康杂种犬30只，分对照组（10只），缺血组（10只），再灌注组（10只）。缺血组于第一对角支1cm以下套扎左冠状动脉前降支30min，再灌注组套扎30min后再灌注120min，对照组游离左冠状动脉前降支不结扎。超声心动图左室收缩期应变率测量左室局部收缩功能，TUNEL法检测缺血区心肌细胞凋亡数，RT-PCR法检测caspase-3 mRNA的表达，免疫组化法测caspase-3蛋白的表达。结果 结扎30min后，左室前壁缺血节段收缩期应变率明显降低（P〈0.01）。并出现收缩后压缩（PSC），再灌注120min后缺血节段的应变率有所恢复，但仍低于对照组（P〈0.05）。缺血组缺血区心肌TUNEL阳性细胞数与对照组比较无显著性差异;再灌注组缺血区心肌TUNEL阳性数明显增加（P〈0.05）。缺血组缺血区caspase-3 mRNA与对照组比较表达增高（P〈0.05），再灌注组进一步增高（P〈0.01）。缺血组缺血区心肌细胞caspase-3表达升高，与对照组比差异有显著意义（P〈0.05），再灌注组caspase-3表达进一步增强（P〈0.01）。结论 急性心肌缺血再灌注促凋亡基因capase-3激活，缺血心肌细胞凋亡可能为其早期改变，应变率成像可以评价缺血早期心肌局部收缩功能。     

参附注射液对体外缺氧复氧心肌细胞的影响

目的 观察参附注射液对体外缺氧复氧损伤乳鼠心肌细胞凋亡率及Bcl-2、Caspase-3蛋白的影响,探讨其对缺氧复氧损伤心肌细胞保护作用机制.方法 在协和医科大学阜外心血管病医院卫生部心血管疾病再生医学重点实验室进行以下实验:取出生1～2 d SD乳鼠,采用培养乳鼠心肌细胞建立缺氧复氧损伤模型.将培养的心肌细胞随机分为四组:(1)正常对照组(Con组)37℃、5%CO<,2>孵箱中持续孵育20 h,未经缺氧复氧处理;(2)缺氧复氧组(H/R组) 给予培养的心肌细胞单纯缺氧4 h,复氧16 h;(3)低剂量参附注射液组(L-SFI组)在缺氧前30min加入终质量浓度为50μL/mL的参附注射液,余同缺氧复氧组;(4)高剂量参附注射液组(H-SFI组)在缺氧前30 min加入终质量浓度为100μL/mL的参附注射液,余同缺氧复氧组.采用异硫氰酸荧光素(FTI℃)标记的Annexin V(Annexin V-FITC)及碘化丙锭(PI)双染流式细胞仪检测细胞凋亡率.采用增强化学发光免疫印记技术(ECZ-Western blot)检测心肌细胞Bcl-2,Caspase-3蛋白水平.采用SPSS11.5统计软件进行分析,均数计量资料以均数±标准差(x±s)表示,组间比较单因素方差分析,P<0.05为差异有统计学意义.结果 与Con组比较,H/R组细胞凋亡的各个阶段的凋亡率显著增加(P<0.01);与H/R组比较,L-SFI组和H-SFI组凋亡率明显下降(P<0.01).免疫印迹检测结果显示,与Con组比较,H/R组Bcl-2蛋白表达水平显著降低,出现Caspase-3相对分子质量17 000的裂解片断;与H/R组比较,不同浓度的参附注射液组Bcl-2蛋白的表达明显升高,伴随Caspase-3相对分子质量17 000片断的表达减少.结论 参附注射液可以减少缺氧复氧诱导的细胞凋亡,其机制可能通过上调Bcl-2蛋白表达,抑制Caspase-3蛋白的激活,发挥其抗凋亡的作用.     

凋亡调控因子Survivin和Caspase-3蛋白在宫颈鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨宫颈鳞状细胞癌中凋亡凋控因子Survivin和Caspase-3蛋白的表达及其意义.方法采用免疫组织化学技术检测40例宫颈鳞状细胞癌及10例正常宫颈组织中Survivin和Caspase-3的表达水平.结果Survivin蛋白在宫颈鳞状细胞癌 中表达水平高于正常宫颈组织(P＜0.05).Caspase-3表达水平低于正常宫颈组织(P＜0.05).Survivin和Caspase-3蛋白的表达水平在不同分化程度的宫颈癌之间差异有统计学意义(P＜0.05).结论宫颈鳞状细胞癌的发生、发展与Survivin和Caspase-3蛋白的异常表达有关,可能是细胞异常增殖和凋亡失衡的结果.     

Caspase-3及P53蛋白在口腔扁平苔藓及口腔鳞癌中表达意义

目的探讨Caspase-3及P53蛋白在口腔扁平苔藓及鳞癌癌变过程中的作用。方法采用免疫组织化学方法检测45例口腔扁平苔藓（扁平苔藓组）和46例口腔鳞癌（鳞癌组）和15例正常口腔黏膜组织（对照组）中Caspase-3及P53蛋白的表达情况并进行比较。结果Caspase-3蛋白表达在扁平苔藓组（71．11％）高于鳞癌组（47．83％）（P〈0．05）、但低于对照组（93．33％）（P〈0．05）;P53蛋白在鳞癌组中阳性表达率（78．26％）明显高于对照组（0）和扁平苔藓组（28．89％）（P均〈0．05）;Caspase-3蛋白与P53蛋白呈负相关（r=0．339,P=0．021）。结论Caspase-3蛋白可抑制口腔扁平苔藓和鳞癌的发展,P53蛋白则在其发展中起促进作用。     

硫酸乙酰肝素对小鼠乳腺肿瘤细胞Caspase-3、bcl-2的表达及Caspase-3活性影响

目的:探讨硫酸乙酰肝素(heparan sulfate,HS)对乳腺肿瘤细胞Caspase-3、bcl-2表达及Caspase-3活性的影响。方法:(1)培养人乳腺上皮癌MCF-7细胞株,生长达汇合期及汇合后期时收集培养液,提取其中的硫酸乙酰肝素链。(2)建立C3H小鼠移植乳腺癌模型,随机分3组,即生理盐水(NS)组、HS组、阿霉素(adriamycin,ADR)组。第2天腹腔注射给药,给药结束第2天处死小鼠,完全剥离瘤体,称瘤重,计算抑瘤率。(3)免疫组化法测定Caspase-3、bcl-2的表达,Caspase-3活性检测试剂盒检测Caspase-3的活性。结果:(1)HS对小鼠肿瘤生长有抑制作用,HS和ADR组的肿瘤生长抑制率分别为29.98%和46.87%;(2)HS能减少肿瘤bcl-2表达,各组的阳性细胞数为,HS组34.6±2.55、ADR组46.0±3.24、NS组71.5±2.87;(3)HS能促进小鼠肿瘤细胞Caspase-3表达并能增强其生物活性,阳性细胞数为,HS组56.12±2.16、ADR组35.50±2.39、NS组19.75±1.98;各组的Caspase-3活性分别为HS组19.89±1.36、ADR组18.16±0.25、NS组13.15±0.90。结论:HS能通过减少C3H小鼠乳腺癌细胞bcl-2的表达,增加Caspase-3表达和活性来促进肿瘤细胞凋亡,发挥其抗肿瘤作用。     

Caspase-3和E-cadherin在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义

目的 探讨Caspase-3和E-cadherin在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义.方法 75例肾透明细胞癌标本、癌旁标本以及18例正常肾组织采用免疫组化检测Caspase-3和E-cadherin的表达情况.结果 Caspace-3在肾透明细胞癌的阳性表达明显低于正常肾组织和癌旁组织(P＜0.01),随着肾细胞癌病理分级的升高,Caspase-3的阳性表达率降低,临床分期的升高,Caspase-3的阳性表达率增高,但差异无统计学意义(P＞0.05).E-cadherin在肾透明细胞癌的阳性表达明显低于正常肾组织和癌旁组织(P＜0.05或P＜0.01),在癌旁组织表达低于正常肾组织(P＜0.05),其表达与病理分级和临床分期相关(P＜0.05).二者在有淋巴结转移组中的表达低于无转移组(P＜0.05).二者表达呈正相关(r=0.4352,P=0.0002).结论 Caspase-3及E-cadherin在肾透明细胞癌中的异常表达,可能在肾细胞癌的生长、分化中发挥重要作用,可以考虑作为判定肾癌生物学行为的辅助诊断指标.     

丁基苯酞对蒙古沙土鼠全脑缺血再灌注损伤后海马神经元的影响及Caspase-3表达变化

目的 探讨丁基苯酞（dl-3n-butylphthalide,NBP）对蒙古沙土鼠全脑缺血再灌注后海马组织Caspase-3表达的影响.方法 沙土鼠双侧颈总动脉夹闭10min再灌注,制备全脑缺血再灌注模型.沙土鼠随机分为三组：1）正常对照组（CON）;2）模型对照组（I/R）;3）NBP治疗组（NBP）.采用Nissl染色观察海马CA1区神经锥体细胞形态及数量的改变,通过蛋白印迹检测海马组织Caspase-3蛋白水平的变化.结果 正常对照组海马CA1区锥体细胞形态完整,细胞大而圆,尼氏体位于胞浆,深染;模型对照组海马CA1区锥体细胞排列紊乱,胞体缩小、变形、核固缩,并向四周扩散;NBP治疗组锥体细胞排列较整齐,细胞大而圆,尼氏体深染,但仍可见少量胞浆浓染.模型对照组与正常对照组比较锥体细胞数量明显减少,NBP治疗组与模型对照组比较锥体细胞数量明显增加,有显著性差异（P〈0.01）.蛋白印迹检测发现模型对照组与正常对照组比较海马组织Caspase-3蛋白表达明显上调,有显著性差异（P〈0.01）;NBP治疗组与模型对照组比较海马组织Caspase-3蛋白表达明显下调,有显著性差异（P〈0.01）.结论 丁基苯酞对海马区锥体细胞具有保护作用,可能与其下调Caspase-3的表达,抑制神经元凋亡有关.