人外周血内皮前体细胞体外增殖规律的动态观察及其特性

目的：探讨人外周血内皮前体细胞（endothelial progenitor cells EPCs）体外诱导分化为内皮细胞（ECs）的生长增殖规律及其特性，以期证实人外周血是临床治疗缺血性疾病一个理想的内皮前体细胞来源。方法密度梯度离心提取单个核细胞，接种在人纤连蛋白包被的培养板上，培养于含有促血管生长因子VEGF、b—FGF、IGF、EGF等的内皮生长基质EGM-2 MV中。每天倒置显微镜观察，并记录。4d后去除未附着细胞，继续培养黏附细胞，同时，黏附细胞用Dn—AC—LDL和FITC—UEA—1进行免疫荧光染色，荧光显微镜和共聚焦激光扫描显微镜观察。收集第7d的黏附细胞，流式细胞仪检测细胞表面标志CD34和CD31。结果接种1d后，一些细胞变形；2d后，有细胞团形成；3d后，细胞团周围一些贴壁细胞开始出现；4d后，黏附细胞呈短梭形或多角形贴壁生长，荧光显微镜、共聚焦激光扫描显微镜下可观察到Dn—AC—LDL和FITC—UEA-1双阳性的黏附细胞；第6d、7d，黏附细胞呈长梭形；FACS分析，CD34和CD31阳性率分别为（14．13±2．79）％、（54．67±3．44）％。结论外周血中确实存在EPCs，并且在促血管生长因子VEGF、b—FGF、IGF、EGF等的刺激下能分化为成熟的内皮细胞。EPCS可望作为临床血管再生的细胞治疗     

低分子量肝素对外周血内皮祖细胞数量和功能的影响

目的通过观察低分子量肝素(LMWH)对体外培养的外周血内皮祖细胞(EPC)数量和功能的影响,旨在探讨EPC参与LMWH治疗心血管疾病的作用机制。方法采用密度梯度离心法从外周血获取单个核细胞,培养7 d后,洗去非贴壁细胞,分别加入50,100,200和400 kU.L-1的LMWH培养一定时间(6,12,24,48和72 h)后收集细胞进行研究。激光共聚焦显微镜鉴定FITC-UEA-Ⅰ和Dil-acLDL双染色阳性细胞为正在分化的EPC,并在倒置荧光显微镜下计数。分别采用MTT比色法,改良的Boyden小室和黏附能力实验来观察EPC的增殖能力,迁移能力和黏附能力。结果LMWH能显著增加外周血EPC数量,200 kU.L-1浓度的LMWH作用48 h影响最为显著(对照vs200 kU.L-1LMWH,44±5vs112±9)。LMWH也能显著改善外周血EPC的增殖能力(对照vs200 kU.L-1LMWH,0.504±0.097vs0.828±0.109),迁移能力(对照vs200 kU.L-1LMWH,8±6vs40±8)和黏附能力(对照vs200 kU.L-1LMWH,9±4vs29±4)。结论增加EPC的数量及促进其增殖、迁移和黏附等功能是LMWH治疗心血管疾病的作用机制之一。     

人骨髓来源内皮前体细胞体外培养和鉴定的研究

目的:明确人骨髓单个核细胞中是否存在内皮前体细胞(EPCs),探讨从人骨髓中分离、培养EPCs的方法及体外进行EPCs的鉴定。方法:采集正常人骨髓单个核细胞进行体外培养,应用流式细胞术进行内皮细胞表面标记物检测,应用免疫荧光术对培养细胞进行内皮细胞功能特性检测。结果:人骨髓单个核细胞经体外培养,收获细胞可以表达内皮细胞的特异性抗原,包括CD34、VWF、KDR等,并显示出能摄取乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL),结合荆豆凝集素(UEA-1)等内皮细胞的特性。结论:人骨髓中存在具有内皮细胞潜能的EPCs,其具有内皮细胞的表型特征和功能,有希望作为种子细胞用于冠心病的血管新生治疗。     

间质细胞衍生因子1α对外周血内皮干细胞衰老的影响

目的观察间质细胞衍生因子1α(SDF-1α)对外周血内皮干细胞(ESC)衰老的影响,探讨其可能机制。方法密度梯度离心法获取人外周血单核细胞,培养4d后,收集贴壁细胞。实验分为正常对照组及SDF-1α1,10,50和100μg.L-1组。采用SA-β-半乳糖苷酶染色试剂盒检测衰老细胞;MTT比色法和集落生成能力测定实验检测ESC的增殖和集落形成能力;端粒重复序列扩增法(TRAP)-ELISA定量检测端粒酶(端粒末端转移酶)活性;Western蛋白印迹法检测ESCAktSer473磷酸化水平。结果与正常对照组相比,SDF-1α能显著减少SA-β-半乳糖苷酶染色阳性细胞,SDF-1α100μg.L-1最为明显(40.8±7.1vs17.5±3.0;P<0.01);SDF-1α100μg.L-1也能显著促进ESC增殖能力(0.22±0.02vs0.39±0.04;P<0.01),集落形成能力(7.8±2.2vs22.4±3.4;P<0.01);SDF-1α100μg.L-1增加ESC端粒酶活性(0.34±0.05vs0.57±0.09;P<0.01);SDF-1α能促进ESCAkt磷酸化。结论SDF-1α能减缓ESC衰老,伴随ESC增殖和集落形成能力的改善,提示细胞衰老可能是SDF-1α影响ESC功能的机制之一;SDF-1α减缓ESC衰老可能与增加ESC端粒酶活性及Akt磷酸化水平有关。     

雌激素替代治疗对绝经妇女血管内皮生长因子水平的影响

血管内皮生长因子是一种高效的多功能多肽，在妇女月经周期及正常妊娠中发挥着重要作用。笔者等通过监测１０６例绝经妇女血管内皮生长因子水平，对接受或未接受雌激素替代治疗，子宫切除及未切除的绝经妇女血管内皮生长因子水平变化进行对照分析，以了解雌激素对绝经妇女血管内皮生长因子的影响。１对象和方法１．１研究对象１０６例均１９９８－０１～２０００－０７在济南市立五院和１０６医院妇产科门诊就诊者，年龄４７～７０岁，平均（５２．１±３．５）岁，绝经３年以上的妇女。其中自然绝经７２例，人工绝经３４例。排除子宫内膜疾…     

基质细胞衍生因子-1对外周血内皮祖细胞功能影响的研究进展

<正>基质细胞衍生因子-1(SDF-1)是CXC亚家族的一种趋化因子,在干/祖细胞归巢等方面发挥了重要的作用。最新研究表明[1],SDF-1唯一的受体CXCR4可在内皮祖细胞(EPCs)表面高度表达,SDF-1与CXCR4结合后形成SDF-1/CXCR4轴,促使EPCs沿SDF-1的浓度梯度发生黏附、增殖、迁移并抑制其凋亡,从而改善EPCs功能。EPCs能增殖分化为成熟血管内皮细胞,参与血管新生,其是缺血组织的血管新生,利用EPCs的血管新生能     

雌激素对糖尿病大鼠内皮祖细胞功能的影响及其机制研究

目的 探索雌激素对糖尿病大鼠内皮祖细胞(EPCs)功能的影响及其可能的作用机制。方法 取健康Wistar大鼠骨髓提取EPCs并采用流式细胞仪和荧光显微镜鉴定。大鼠给予链脲佐菌素诱导为糖尿病模型,提取正常大鼠和糖尿病大鼠骨髓EPCs并培养,糖尿病大鼠EPCs体外给予雌激素10 nmol/L孵育24 h。检测EPCs增殖和功能;测定EPCs中锰超氧化物歧化酶(MnSOD)水平和NO水平及上清液中凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)蛋白水平。结果 与对照组比较,糖尿病EPCs的细胞增殖能力、迁移能力和小管形成功能受损(P<0.01),而雌激素体外干预后细胞增殖能力、迁移能力和小管形成功能均得到改善(P<0.01);糖尿病EPCs中MnSOD水平和NO水平明显下调,上清液中TSP-1蛋白水平升高(P<0.01);雌激素孵育能逆转上述改变(P<0.01)。结论 雌激素能改善糖尿病大鼠EPCs迁移能力和小管形成功能,作用机制可能与其降低糖尿病EPCs内的氧化应激及下调TSP-1的表达相关。     

雌激素对大鼠心内神经节血管内皮生长因子表达的影响

目的:用免疫组织化学方法观察成年雌性大鼠,卵巢摘除组大鼠,卵巢摘除后17beta雌二醇肌肉注射组大鼠的心内神经节血管内皮生长因子(VEGF)的表达及变化。方法:免疫组织化学染色。结果:①各组大鼠心内神经节均存在VEGF表达阳性神经细胞;②卵巢摘除组大鼠心内神经节VEGF阳性神经元明显减少,表达明显减弱(P<0.05)。结论:心内神经节细胞表达血管内皮生长因子(VEGF);雌激素可能影响心内神经节VEGF的表达。     

丹参酮ⅡA对外周血内皮祖细胞增殖、粘附和迁移功能的影响

丹参酮ⅡA(TanⅡA)是中药丹参(salvia miltiorrhiza Bge)中分离提取的一种有效单体。实验表明丹TanⅡA可促进心肌梗死冠脉侧支循环形成,对损伤内皮细胞功能障碍具有保护作用[1,2]。作为内皮细胞前体的内皮祖细胞(endo-thelial progenitor cell,EPC)在内皮损伤后的修复及侧支循环形成中起重要作用[3]。本文采用体外培养外周血EPC,观察TanⅡA对内皮祖细胞增殖、粘附和迁移功能的影响,以进一步探讨TanⅡA治疗冠心病的作用机制。1材料与方法1.1材料人纤维连接蛋白(HFN)和VEGF购自Chemicon公司;M199和FITC-UEA-I为Sigma产品;acLDL…     

雌激素在短暂性前脑缺血中的保护作用

用短暂性前脑缺血模型观察了正常大鼠、去卵巢大鼠及去卵巢后雌激素替代大鼠脑组织病理学改变。结果显示 ,雌激素替代治疗可使脑缺血损害程度减轻 ,并接近正常大鼠 ,提示雌激素对短暂性前脑缺血具有保护作用。     

白藜三醇对人外周血内皮祖细胞功能的影响

目的 观察白藜三醇(Res)对人外周血内皮祖细胞(EPCs)功能的影响.方法 密度梯度离心法获取人外周血单个核细胞,培养7 d后,收集贴壁细胞并加入Res(1、10、25、50 μmol/L)干预一定时间(6、12、24、48 h).激光共聚焦显微镜和流式细胞术鉴定EPCs,分别观察EPCs的增殖、黏附、迁移和体外血管生成能力.结果 Res促进外周血EPCs扩增,50 μmol/L Res作用24 h对EPCs数量的影响最为显著(P<0.01).Res也显著改善了外周血EPCs的增殖、黏附、迁移和体外血管生成能力.结论 Res可增加EPCs数量并改善其功能.     

大鼠外周血内皮祖细胞分离培养与鉴定

目的 获得大鼠外周血内皮祖细胞（EPCs）并进行鉴定。方法 首先采用密度梯度离心法获得大鼠外周血单个核细胞,然后用EGM-2完全培养基体外培养条件下诱导单个核细胞分化为靶标细胞,最后分别用EPCs特异性标记物CD133和Flk-1检测及内吞乙酰低密度脂蛋白（ac-LDL）和荆豆凝集素-1（UEA-1）的能力,识别和鉴定靶标细胞。结果 靶标细胞培养至第6天呈纺锤形,梭状排列,具有与典型EPCs形态一致的生物学特征,CD133及FLK-1双抗体荧光检测结果阳性,内吞ac-LDL及UEA-1的能力实验结果阳性,证明该纺锤形细胞为EPCs。结论 通过密度梯度离心法及多细胞因子诱导大鼠外周血单个核细胞获得EPCs的方法可行,该方法可为EPCs的基础研究及临床应用提供理论与实验方法学基础。     

Effects of puerarin on number and activity of endothelial progenitor cells from peripheral blood

AIM: To investigate whether puerarin can augment endothelial progenitor cells (EPCs) numbers, promote EPC proliferative, migratory, adhesive, and in vitro vasculogenesis capacity. METHODS: EPCs were characterized as adherent cells by double staining of DiLDL-uptake and lectin binding under a laser scanning confocal microscope. Expression of KDR, VEGFR-2, and AC 133 was detected by flow cytometry. EPCs proliferation, migration and in vitro vasculogenesis were determined with MTT assay, modified Boyden chamber assay, and in vitro vasculogenesis kit, respectively. EPCs adhesive assay was performed by replating those on fibronectin-coated dishes, then adherent cells were counted. RESULTS: Incubation of isolated human MNCs with puerarin 0.1-3 mmol/L increased the number of EPCs, EPC proliferative, migratory, adhesive, and in vitro vasculogenesis capacity in a concentration and time-dependent manner, which reached maximum at 3 mmol/L, 24 h (approximately 1-fold increase, P<0.01). CONCLUSION: Puerarin enhanced     

Effects of resveratrol on number and activity of endothelial progenitor cells from human peripheral blood

1. It has been well established that oestrogens can increase the number of endothelial progenitor cells (EPC) by anti-apoptotic effects. Resveratrol, a polyphenolic phytoalexin extracted from grapes and wine, has been reported to act as an oestrogen receptor agonist. We hypothesize that putative phyto-oestrogen may promote EPC proliferation and survival in vitro. 2. Endothelial progenitor cells were isolated from human peripheral blood and identified immunocytochemically. Endothelial progenitor cells were incubated with resveratrol (1, 10, 25 and 50 mmol/L) or control for specified times. Cell proliferation, migration and in vitro vasculogenesis were assayed using the 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetra-zolium bromide (MTT) assay, modified Boyden chamber assay and in vitro vasculogenesis detection, respectively. 3. Resveratrol increased the number of EPC and promoted EPC proliferation, adhesion and migration in a dose- and time-dependent manner. Cell number peaked at 50 mmol/L resveratrol after incubation for 24 h compared with vehicle control (61.3 +/- 5.8 vs 112.8 +/- 7.2, respectively; P < 0.01). 4. Furthermore, cell cycle analysis showed that 50 mmol/L resveratrol significantly increased the S phase and decreased the G(0)/G(1) phase of EPC. In addition, resveratrol increased vascular endothelial growth factor production and further induced vasculogenesis in vitro. 5. In conclusion, resveratrol significantly induces EPC proliferation, migration and further promotes angiogenesis in vitro.     

阿托伐他汀对慢性肾衰竭大鼠外周血内皮祖细胞的影响

目的探讨阿托伐他汀对慢性肾衰竭大鼠外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cells,EPCs)数量和功能的影响。方法采用分阶段5/6肾切除制备大鼠慢性肾衰竭模型。实验动物随机分为4组:假手术组、慢性肾衰竭组(模型组)、8mg.kg-1.d-1阿托伐他汀干预组(小剂量组)、16mg.kg-1.d-1阿托伐他汀干预组(大剂量组)。大鼠阿托伐他汀灌胃8周后,取其外周血分离与培养EPCs,并检测EPCs数量及其增殖、黏附能力。结果与假手术组比较,慢性肾衰竭大鼠外周血EPCs数量及其增殖、黏附能力均下降(P<0.05)。应用阿托伐他汀能明显增加慢性肾衰竭大鼠外周血EPCs数量,改善外周血EPCs增殖、黏附能力(P<0.05),并且呈剂量依赖性。结论阿托伐他汀可改善慢性肾衰竭大鼠外周血EPCs的数量和功能。     

Effects of Ginkgo biloba extract on number and activity of endothelial progenitor cells from peripheral blood

The aim of this study is to investigate whether Ginkgo biloba extract can augment endothelial progenitor cells numbers, and promote the cells' proliferative, migratory, adhesive, and in vitro vasculogenesis capacity. Total mononuclear cells were isolated from peripheral blood by Ficoll density gradient centrifugation, and then the cells were plated on fibronectin-coated culture dishes. After 7 days culture, attached cells were stimulated with Ginkgo biloba extract (to make a series of final concentrations: 10 mg/L, 25 mg/L, and 50 mg/L) or vehicle control for the respective time points (6 hours, 12 hours, 24 hours, and 48 h). Endothelial progenitor cells were characterized as adherent cells double positive for DiLDL-uptake and lectin binding by direct fluorescent staining under a laser scanning confocal microscope. They were further documented by demonstrating the expression of KDR, VEGFR-2, and AC133 with flow cytometry. Endothelial progenitor cells proliferation, migration, and in vitro vasculogenesis activity were assayed with 3-(4, 5-dimethylthiazol-2-yl)-2, 5-diphenyltetrazolium bromide assay, modified Boyden chamber assay, and in vitro vasculogenesis kit, respectively. Endothelial progenitor cells adhesion assay was performed by replating those on fibronectin-coated dishes, and then counting adherent cells. Incubation of isolated human mononuclear cells with Ginkgo biloba extract dose- and time-dependently increased the number of endothelial progenitor cells, maximum at 25 mg/L, 24 hours (approximately 1-fold increase, P < 0.01). In addition, Ginkgo biloba extract also dose- and time-dependently promoted endothelial progenitor cells proliferative, migratory, adhesive, and in vitro vasculogenesis capacity. The results of the present study defined a novel functional effect of Ginkgo biloba extract: the augmentation of endothelial progenitor cells with enhanced functional activity.     

银杏叶提取物对外周血内皮祖细胞数量和功能的影响

目的观察银杏叶提取物对外周血内皮祖细胞(endothelial progenitor cell, EPC)数量和功能的影响。方法密度梯度离心法获取外周血单个核细胞，培养7 d后，收集贴壁细胞并加入银杏叶提取物(10, 25和50 mg·L^-1)干预一定时间(6,12,24和48 h)。激光共聚焦显微镜和流式细胞仪鉴定EPC，分别观察EPC的增殖、迁移、粘附和体外血管生成能力。结果银杏叶提取物促进外周血EPC扩增，25 mg·L^-1银杏叶提取物作用24 h对EPC数量的影响最为显著(较对照组增加了1倍， p<0.01)。银杏叶提取物也显著改善了外周血EPC的粘附、迁移、增殖和体外血管生成能力。结论银杏叶提取物可增加EPC数量并改善其功能。     

阿托伐他汀对外周血培养内皮祖细胞数量及功能的影响

目的 观察阿托伐他汀对体外培养外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的影响.方法 分离培养人外周血单个核细胞,分别接种在普通培养基(A组)及阿托伐他汀干预培养基(B组),7d后收集贴壁细胞进行分析.激光共聚焦显微镜下双染色阳性细胞鉴定为正在分化的EPCs,采用transwell小室、细胞计数法评估EPCs扩增、黏附及迁移能力的差别.结果 与A组相比,B组体外培养EPCs的数量显著增多,黏附及迁移能力显著提高.结论 阿托伐他汀在外周血EPCs培养中能促使细胞扩增,增强黏附及迁移功能,可作为EPCs培养的一种改良方法.