乳腺癌耐药蛋白的研究进展

乳腺癌耐药蛋白(BVRP)是新近发现的一种肿瘤耐药相关蛋白．与P-gp和多药耐药相关蛋白(MRP)同属ABC转运蛋白超家族。本文对BCRP的发现、基因表达特征、与造血干细胞分化的关系、转运底物及其耐药逆转和临床意义等方面的研究进展进行综述。     

乳腺癌耐药蛋白的研究进展

乳腺癌耐药蛋白 (BCRP)是新近发现的一种肿瘤耐药相关蛋白 ,与P gp和多药耐药相关蛋白 (MRP)同属ABC转运蛋白超家族。本文对BCRP的发现、基因转染、结构特点、组织表达和临床意义等方面研究进展进行综述。     

乳腺癌耐药蛋白--肿瘤多药耐药研究新进展

乳腺癌耐药蛋白（breast cancer resistance protein,BCRP)是近年发现的与肿瘤多药耐药有关的新的药物排出泵。BCRP是含655个氨基酸残基的跨膜蛋白,属于ABC转运蛋白超家族的成员,BCRP仅有6个跨膜区和1个ATP的结合位点,故被称为不完整转运分子,推测BCRP通过组成同二聚体或异二聚体构成跨膜通道而发挥功能,过表达BCRP的肿瘤细胞株对米托蒽醌,阿霉素,柔红霉素,鬼臼乙叉甙,拓扑替康,CPT－11等产生交叉耐药,而对长春新碱,紫杉醇无交叉耐药,GF120918和Fumitremorgin C能有效逆转过表达BCRP的肿瘤细胞株的耐药性,并与细胞内药物蓄积量呈正相关,人体正常组织中胎盘合体滋养层细胞,小肠和结肠粘膜上皮细胞,胆小管膜,乳腺小叶及血管内皮细胞和干细胞均能检测到BCRP的表达,推测BCRP具有抑制消化道吸收某些外源性物质（包括抗癌药和有毒物质）,参与形成胎盘屏障等生理功能,BCRP与急性髓性白血病,非小细胞肺癌,乳腺癌等多种肿瘤的临床化疗敏感性有关。     

乳腺癌耐药蛋白(BCRP)高表达耐药细胞系的建立及其耐药机制的初步研究

目的:建立稳定表达乳腺癌耐药蛋白(Breast cancer resistance protein,BCRP)的小鼠成纤维细胞系PA317/BCRP,初步探讨其耐药机制.方法:从乳腺癌耐药细胞系MCF-7/ADR中克隆BCRP基因.将编码序列克隆导入真核表达载体pcDNA3.1,转化感受态E.Coli DH5α,获得重组质粒pcDNA3.1/BCRP,酶切并测序鉴定.用电穿孔法将质粒转染PA317细胞,同时转染pcDNA3.1/EGFP.G418筛选阳性克隆.阳性转染细胞提取细胞总RNA,RT-PCR检测BCRP的mRNA表达.Western blot检测BCRP蛋白表达.MTT法检测耐药克隆PA317/BCRP细胞对米托蒽醌(Mitoxantrone,MTZ)耐药性,罗丹明123外排实验验证转染后细胞外排罗丹明123功能.Western blot检测P13K-AKT信号转导通路下游靶点AKT表达变化.结果:构建质粒pcDNA3.1/BCRP,转染PA317细胞,G418筛选.RT-PCR和Westem blot,均检测到细胞中BCRP基因转录及蛋白表达.与空质粒转染细胞、未转染细胞时照组相比,PA317/BCRP细胞对MTZ耐药性增强,且外排罗丹明123能力增强.检测P13K-AKT途径下游靶点AKT蛋白磷酸化水平在PA317/BCRP细胞内明显增高.结论:1、成功获得稳定表达BCRP的PA317细胞系-PA317/BCRP,经MTT和罗丹明123外排实验证实,其耐药和外排功能增强.2、检测PA317/BCRP细胞P13K-AKT途径下游靶点AKT的表达,观察到耐药细胞的AKT表达含量明显高于转染空质粒和未转染的PA317细胞.推测BCRP可能通过影响AKT表达上调发挥其耐药作用.     

肺耐药蛋白研究进展

肺耐药蛋白是一种可引起多药耐药现象的蛋白,广泛存在于各种正常组织中,并在许多非Ｐｇｐ机制的ＭＤＲ肿瘤细胞中过度表达,阻滞作用于细胞核ＤＮＡ的化闻药物通过核孔进入细胞核或将胞核内药物泵出核外,并通过囊泡转运和胞吐作用排出细胞外而引起肿瘤ＭＤＲ。     

乳腺癌多药耐药DEDD作用及机制研究

目的 死亡效应结构域DNA结合蛋白(death effector domain DNA-binging protein,DEDD)可抑制乳腺癌的生长和转移,但在乳腺癌多药耐药中的作用尚不明确.本研究将探讨DEDD在人乳腺癌多药耐药中的作用及机制.方法 通过转染DEDD-shRNA建立稳定敲低DEDD表达的MCF-7人乳腺癌细胞株,MTS实验检测多柔比星、紫杉醇对MCF-7 WT(Wild type,野生型)、MCF-7 control shRNA和MCF-7 DEDD-shRNA细胞活力的影响,Annexin-V和碘化丙啶(propidium iodide,PI)双染后流式细胞仪检测细胞凋亡.蛋白质印迹法检测乳腺癌耐药蛋白(breast cancer resistance protein,BCRP)在药物干预后的蛋白表达水平.结果 多柔比星干预后,半数抑制浓度IC50的多因素方差分析结果显示,不同处理(F=89.49,P＜0.001)、不同时间(F=50.81,P＜0.001)组间比较差异有统计学意义.多柔比星干预24或48 h后,MCF-7 DEDD-shRNA的半数抑制浓度IC50分别为(0.97±0.15)和(0.62±0.09) μmol/L,明显高于MCF-7 WT(0.46±0.05)和(0.26±0.03) μmol/L和MCF-7 control shRNA细胞(0.39±0.05)和(0.25±0.03)μmol/L,P＜0.001.紫杉醇干预后,半数抑制浓度IC50的多因素方差分析结果显示,不同处理(F=15.94,P＜0.001)、不同时间组间(F=129.70,P＜0.001)比较差异有统计学意义.紫杉醇干预24或48 h后,MCF-7 DEDD-shRNA的半数抑制浓度IC50为(16.74±2.26)和(9.88±1.47) μmol/L,明显高于MCF-7 WT(13.39±1.44)和(7.69±0.92) μmol/L(P=0.001)和MCF-7 control shRNA细胞(12.58±1.15)和(7.17±1.12) μmol/L(P＜0.001).多柔比星干预后24 h后流式细胞凋亡结果显示,不同处理(F=131.46,P＜0.001)、不同浓度组间(F=160.95,P＜0.001)比较差异有统计学意义.正常培养状态下,MCF-7 control shRNA细胞和MCF-7 DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(14.32±1.47)％和(11.58±1.63)％,而给予0.5μmol/L和1 μmol/L多柔比星作用24 h后,M[CF-7DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(21.62±1.97)％和(24.39±2.36)％,明显低于MCF-7 control shRNA细的(36.26±1.87)％和(38.23±1.46)％,P＜0.001.同样,紫杉醇干预后24 h,不同处理(F=124.81,P＜0.001)、不同浓度组问(F=172.56,P＜0.001)细胞凋亡率比较差异有统计学意义.给予9.37和18.74 μmol/L紫杉醇作用24 h后,MCF-7DEDD-shRNA细胞的凋亡率分别为(30.26±1.63)％和(32.18±2.16)％,明显低于MCF-7 control shRNA组的(53.84±2.17)％和(58.27±2.16)％,P＜0.001.多柔比星作用后不同时间BCRP蛋白质印迹检测统计分析结果显示,不同处理(F=14.67,P＜0.001)、不同时间(F=6.39,P=0.006)组间BCRP蛋白表达比较差异有统计学意义.给予0.5 μmol/L多柔比星作用24 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.87±0.04、1.06±0.02和5.25±0.18.MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.多柔比星作用48 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为1.06±0.01、0.97±0.04和2.98±0.13.MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平出现回落,但仍显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.同样,紫杉醇作用后不同时间BCRP蛋白质印迹检测统计分析结果显示,不同处理(F=7.26,P=0.004)、不同时间(F=8.32,P=0.002)组间BCRP蛋白表达比较差异有统计学意义.给予9.37 μmol/L紫杉醇作用24 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.81±0.05、2.25±0.10和1.78±0.14.其中MCF-7 control shRNA组细胞BCRP表达水平高于MCF-7 WT (P＜0.001)和MCF-7 DEDD-shRNA (P=0.002)组.而紫杉醇作用48 h后,3组细胞的BCRP相对表达水平分别为0.73±0.04、1.73±0.05和3.12±0.12,MCF-7 DEDD-shRNA细胞组BCRP蛋白的表达水平继续增高,且显著高于MCF-7 WT和MCF-7 control shRNA细胞组,P＜0.001.结论 敲低DEDD表达可增强乳腺癌细胞的抗肿瘤药耐药性,BCRP的表达增加可能是低表达DEDD乳腺癌细胞多药耐药的机制之一.     

磁性纳米颗粒载ABCG2-siRNA逆转乳腺癌细胞对阿霉素耐药性的研究

目的：研究抑制乳腺癌耐药蛋白（ABCG2）表达对乳腺癌细胞耐药性的逆转作用,为乳腺癌基因靶向治疗提供新思路。方法：通过透射电镜和纳米粒度电位分析仪对磁性纳米颗粒（polyMAG）的粒径、电位进行表征,利用凝胶电泳阻滞实验检测polyMAG 与siRNA的结合情况,并用polyMAG携载不同浓度（5、10、20、50、100 nmol/L）ABCG2-siRNA,将其转染入乳腺癌细胞耐药株（MCF-7/ADR）后,采用CCK-8检测siRNA转染后细胞的存活率,荧光定量PCR和Western blotting分别检测ABCG2 mRNA和蛋白表达水平,Calcein-AM/PI染色观察细胞凋亡。结果：polyMAG粒径约100 nm,呈正电荷,表面电位29.6 mV。当polyMAG与ABCG2-siRNA的比为1：1和1：2时ABCG2-siRNA可完全结合。当20~100 nmol/L polyMAG-siRNA干扰ABCG2表达后,细胞存活率较未转染组明显降低（P < 0.05）。20 nmol/L polyMAG-siRNA转染组ABCG2 mRNA表达显著下调,约为未转染组的1/8（P < 0.05）,且凋亡细胞较其他组明显增多;50 nmol/L polyMAG-siRNA转染后可明显干扰ABCG2蛋白表达（P < 0.05）。结论：polyMAG-siRNA能高效干扰ABCG2表达,增加MCF-7/ADR细胞对阿霉素敏感性,逆转细胞耐药。     

多药耐药相关蛋白在乳腺癌组织中的表达

目的 观察多药耐药相关蛋白(MRP)是否在临床乳腺癌组织中表达,了解MRP在乳腺癌多药耐药现象中的临床相关性.方法 用RT-PCR及免疫组化技术检测乳腺癌、乳腺纤维瘤组织中MRP及MRPmRNA的表达.结果 乳腺癌组织的MRP阳性率为56%,乳腺纤维瘤为20%.阳性染色主要位于癌细胞胞浆,胞膜次之.结论 RT-PCR进一步表明术前化疗的乳腺癌组织MRPmRNA表达明显强于乳腺纤维瘤及术前未受化疗者.MRP是乳腺癌化疗时值得重视的因素.     

多药耐药相关蛋白2及其在肿瘤耐药中的研究进展

肿瘤对化疗药物多药耐药是肿瘤治疗失败的重要原因之一。多药耐药的主要原因是由Pgp、多药耐药相关蛋白（MRP）、肺耐药相关蛋白（LRP）、乳腺癌耐药相关蛋白（BCRP）等转运蛋白表达异常增高所致。MRP包含9个成员：MRP1-MRP9。多药耐药相关蛋白2（MRP2）是三磷酸腺苷（A1甲）结合盒运载体蛋白家族成员之一，本文就MRP2基因的特性及其在肿瘤耐药中的作用作一综述.     

乳腺癌耐药蛋白ABCG2对胰腺癌SW1990细胞耐药性影响的实验

目的 探讨吉西他滨诱导胰腺癌细胞SW1990中ABCG2的表达及其与化疗耐药的关系。方法 胰腺癌细胞SW1990用DMEM培养液常规培养,用0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48和72 h后,使用流式细胞仪测其细胞凋亡率,Western blot检测ABCG2蛋白的表达,RT-PCR检测ABCG2 mRNA的表达,并且分析ABCG2表达水平与化疗耐药的关系。结果 0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48和72 h后,细胞凋亡率分别为（21.1±0.61）%、（13.4±2.17）%、（6.4±1.34）%,不同时间点两两相比P均<0.05。0.82 mg/ml吉西他滨作用SW1990细胞24、48、72 h后与对照组相比,ABCG2 mRNA分别上升了（2.21±0.11）倍、（3.30±0.08）倍和（4.72±0.12）倍,蛋白上升了（2.17±0.14）倍、（3.61±0.09）倍和（4.98±0.13）倍,且组间比较P均<0.05,有统计学意义。结论 吉西他滨能抑制胰腺癌细胞SW1990的增殖,但随着时间延长,药物抵抗逐渐增强,这可能与吉西他滨作用细胞后上调ABCG2的表达有关。     

多药耐药相关蛋白7及其抑制剂

多药耐药(MDR)的机制与转运蛋白有关,现在研究最多的为P-糖蛋白(P-gp)、多药耐药相关蛋白(MRP)1、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)等的抑制剂.MRP7可介导对紫杉醇、长春新碱和长春碱等的耐药.MRP7抑制剂近年研究主要包括千斤藤素、酪氨酸酶抑制剂、环孢素A等,MDR是多种机制共同作用的结果,对其他转运体的研究会提供更全面、更广泛的MDR逆转途径.     

转运蛋白及其介导的肿瘤多药耐药研究

 引言 究发现,MDR 的出现与肿瘤细胞内药物聚集降低有关,表明药物转运的改变(外排增加) 可能是产生耐药的原因。参与药物外排机制的膜转运蛋白主要有: P-蛋白( P-qP) 、多药耐药相关蛋白(MRP) 、乳腺癌耐药蛋白(BCRP) ) 和肺耐药蛋白(L RP) 等。前三者同属于A TP 结合盒(adenosinetriphosphate - binding cassette ,ABC) 膜转运蛋白超家族成员[ 1 ] 。药物转运介导的多药耐药是近年来耐药研究领域的一大热点,本文就转运蛋白及其介导的多药耐药研究作一综述。     

多药耐药相关蛋白基因在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的：检测多药耐药相关蛋白（ＭＲＰ）基因在乳腺癌组织中的表达水平,并和谷胱甘肽Ｓ－转移酶－ｐｉ（ＧＳＴ－π）的表达作相关性比较,探讨其在临床的应用价值。方法：用定量ＲＴ－ＰＣＲ技术,检测了５５例乳腺癌组织中ＭＲＰ和其中４０例ＧＳＴ－πｍＲＮＡ的表达水平,并和术前化产疗比较分析。结果：ＭＲＰ表达的阳性率为７６．４％,高表达占１８．２％,中低表达各占２３．６％和３４．５％。ＭＲＰ和ＧＳＴ－π有４０％的     

表达BCRP的胚肾细胞系HEK293/BCRP的建立及生物学特征

目的:建立HEK293/BCRP多药耐药细胞系并研究其生物学功能。方法:构建有BCRP基因的表达载体,利用脂质体转染方法将载体转入HEK293细胞,并用RT-PCR、间接免疫荧光染色和流式细胞术分析检测转染细胞系BCRP的表达,体外细胞毒试验检测其对米托蒽醌等的耐药指数,流式细胞术和激光共聚焦分别检测其对罗丹明123和阿霉素的外排作用。结果:HEK293/BCRP细胞系在BCRP mRNA和蛋白表达均明显升高(P<0.05),对米托蒽醌的耐药指数达112.07倍,经1.5 h和3 h外排,细胞内罗丹明123浓度分别降低了42.25%和69.01%,激光共聚焦显示细胞内阿霉素浓度降低。结论:成功构建了表达BCRP的胚肾细胞系HEK293/BCRP,并对多种抗肿瘤药物具有耐受性。     

乳腺癌C-erbB-2、P16基因蛋白表达与多药耐药的相关分析

目的 探讨乳腺癌中c—erhB-2、P16与GST-Pi、TOPOⅡ、PgP耐药基因表达的相关性。方法 采用即用型微波加热免疫组化法，对57例乳腺癌C—erbB-2、P16、GST-Pi、TOPOⅡ、PgP进行检测分析。结果 57例乳腺癌中c—erbB-2、P16、GST—Pi、TOPOⅡ、PgP阳性表达率分别为61．40％、36．84％、52．63％、24．56％、15．79％。浸润性导管癌对3种耐药基因有不同程度的阳性表达，较其它组织学类型的乳腺癌的耐药基因更为广基。乳腺癌C—erbB-2、P16、GST-Pi、TOPOⅡ、PgP阳性表达与年龄、临床分期、腋下淋巴结转移无明显关系。结论 乳腺癌产生多药耐药性可能与c—erbB-2、P16异常表达相关。C—erbB-2、P16异常表达可能是乳腺癌产生多药耐药的因素之。部分乳腺癌患者体内存在多项耐药基因或癌细胞内原发存在对GST-Pi、TOPOⅡ、PgP介导的抗癌药物已产生耐药性。     

贲门癌组织中多药耐药基因和多药耐药相关蛋白基因表达的临床研究

目的了解多药耐药基因（ＭＤＲ１）和多药耐药相关蛋白基因（ＭＲＰ）在贲门癌组织中的表达及其临床意义。方法采用反转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术,检测了４６例贲门癌及癌旁组织中ＭＤＲ１和ＭＲＰ６４表达。结果癌组织中ＭＤＲ１和ＭＲＰ表达的阳性率分别６３％和５０％,均高于癌旁组织（Ｐ＜０．０５）;术前化疗的ＭＤＲ１ｍＲＮＡ和ＭＲＰｍＲＮＡ表达水平高于未化疗者（Ｐ＜０．０５）;中低分化肿瘤的ＭＤＲ１ｍＲＮＡ和ＭＲＰｍＲＮＡ表达水平高于高分化肿瘤（Ｐ＜０．０５）;结论贲门癌组织中具有内源和获得性多药耐药性;ＭＤＲ１和ＭＲＰ表达与贲门癌的ＴＮＭ分期无关,其高表达状态可预示肿瘤组织的分化不良。     

转运蛋白与肿瘤细胞多药耐药的研究进展

有许多因素可以影响化疗的效果，细胞耐药机制、细胞动力学因素（肿瘤细胞生长速度）、药物代谢动力学因素（药物的吸收、代谢、渗透弥散能力）、肿瘤的血液供应等。其中耐药是影响化疗疗效的最重要因素之一。细胞耐药机制主要包括以下几方面：①肿瘤细胞内药物积聚减少，②药物的隔离，③药物靶标的改变，④细胞解毒系统活化，⑤凋亡通路阻滞，⑥细胞周期凋控因子的改变，⑦药物诱导的DNA损伤修复能力增强等。总之肿瘤耐药是多因素共同作用的结果，是影响肿瘤化疗成功的关键。转运蛋白介导的药物外排，细胞内药物重新分布是导致细胞内药物聚集减少从而产生耐药的主要原因之一。     

多药耐药相关蛋白2及其在肿瘤耐药中的研究进展

肿瘤对化疗药物多药耐药是肿瘤治疗失败的重要原因之一.多药耐药的主要原因是由PgP、多药耐药相关蛋白(MRP)、肺耐药相关蛋白(LRP)、乳腺癌耐药相关蛋白(BCRP)等转运蛋白表达异常增高所致.MRP包含9个成员:MRP1-MRP9.多药耐药相关蛋白2(MRP2)是三磷酸腺苷(ATP)结合盒运载体蛋白家族成员之一,本文就MRP2基因的特性及其在肿瘤耐药中的作用作一综述.     

乳腺癌耐药蛋白在乳腺癌组织中的表达及其与预后的关系

目的:研究乳腺癌耐药蛋白(BCRP)在乳腺癌组织中的表达,评估其在乳腺癌预后中的作用。方法:采用免疫组织化学方法(IHC)检测60例手术切除的乳腺癌组织中BCRP的表达,并分析其与临床病理特征的关系及对预后的影响。结果:①BCRP在乳腺癌组织中的阳性表达率为35%(21/60例);②腋淋巴结或激素受体阳性者BCRP表达水平显著高于腋淋巴结阴性者和激素受体阴性者(P<0.05),BCRP表达与年龄、月经状况、肿瘤大小和组织学分级均无关(P>0.05);③Kaplan-Meier生存分析结果表明BCRP表达与无病生存期显著相关(P<0.05),但和总生存期无关(P>0.05);④Cox单因素和多因素分析都显示肿瘤大小、淋巴结转移和雌激素受体(ER)与无病生存期和总生存期显著相关(P<0.05),另外孕激素受体与总生存期(P<0.05)显著相关。结论:BCRP在乳腺癌组织中具有一定的表达水平,与乳腺癌患者的无病生存期有关,而与总生存期无关。     

引起肿瘤多药耐药的新蛋白：肺耐药蛋白

引起肿瘤多药耐药的新蛋白：肺耐药蛋白马仲才胥彬作者单位：中国科学院上海药物研究所（上海２０００３１）肿瘤多药耐药性（ｍｕｌｔｉｄｒｕｇｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ，ＭＤＲ）是当前基础医学和临床医学研究的热门领域之一，其发生机制和临床逆转等方面都已取得了很大进...