Semaphorin 3A及其受体在舌鳞癌中的表达及作用

目的：检测Semaphorin（Sema）3A及其受体Neuropilin1（NRP1）在舌癌组织和舌鳞状细胞癌SCC9细胞株中的表达情况,同时观察外源性Sema 3A蛋白对舌鳞状细胞癌SCC9细胞株的影响。方法：通过细胞免疫化学、RT-PCR和Western blot-ting方法检测Sema 3A、NRP1在舌癌组织和SCC9细胞株中的表达情况;通过MTT实验检测外源性Sema 3A蛋白对SCC9细胞株增殖的影响;通过Transwell检测外源性Sema 3A蛋白对SCC9细胞株迁移、侵袭的影响。结果：Sema 3A在舌癌组织和SCC9细胞株中阴性表达,NRP1在舌癌组织和SCC9细胞株中阳性表达;100 ng/ml外源性Sema 3A蛋白明显抑制SCC9细胞株的增殖（P〈0.05）,对其迁移、侵袭能力影响未见统计学差异（P〉0.05）。结论：舌癌组织和舌鳞状细胞癌SCC9细胞株中Sema 3A的阴性表达、NRP1的阳性表达可能与舌癌的发生发展有关。     

Semaphorin3A及其受体在舌鳞癌中的表达及作用

目的:检测Semaphorin (Sema) 3A及其受体Neuropilin1(NRP1)在舌癌组织和舌鳞状细胞癌SCC9细胞株中的表达情况,同时观察外源性Sema 3A蛋白对舌鳞状细胞癌SCC9细胞株的影响.方法:通过细胞免疫化学、RT-PCR和Western blotting方法检测Sema 3A、NRP1在舌癌...     

TRPM8在舌癌组织及Tca8113中的表达及其意义

目的 观察瞬时受体电位M8(transient receptor potential melastatin type 8,TRPM8)在舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113中的表达,探讨其在肿瘤生成与发展中的意义.方法 应用免疫组织/细胞化学方法检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞株、舌乳头状瘤组织和正常舌体组织中的表达;应用Western blot检测TRPM8在舌癌组织、Tca8113细胞及正常舌体组织中的表达.结果 免疫组织化学显示:TRPM8在舌癌组织中100%(22/22)呈强阳性表达;而在舌乳头状瘤组织中18%(2/11)呈强阳性表达,45%(5/11)呈弱阳性表达,余为阴性表达;正常舌体组织中10%(1/10)呈弱阳性表达,余为阴性表达.TRPM8在舌癌、舌乳头状瘤及正常舌体组织中的表达有统计学差异(P＜0.05).免疫细胞化学显示:TRPM8在舌癌细胞Tca8113中呈阳性表达.Western blot结果显示舌癌细胞及组织中TRPM8表达水平明显高于正常舌体组织.结论 TRPM8在舌癌中的高表达提示肿瘤的发生发展可能受到离子通道蛋白的调节.     

TRPM1在舌癌组织及Tca8113细胞中表达的研究

目的 观察瞬间受体势M亚基1(Transient Receptor Potential Melastatin-1,TRPM1)在舌癌组织及舌癌Tca8113细胞系中的表达情况。方法 选取25例舌癌组织作为实验组,15例正常舌组织作为对照组,应用免疫组化及Western-blot的方法检测TRPM1蛋白在舌癌组织及Tca8113细胞与正常舌组织中的表达;应用RT-PCR方法检测TRPM1 mRNA在舌癌细胞与正常舌组织中的表达。结果 免疫组化实验结果显示,23/25例舌癌组织中TRPM1呈强阳性表达,2/25例呈阴性表达;12/15例正常舌体组织中TRPM1呈阴性表达,3/15例呈弱阳性表达。TRPM1在舌癌与正常舌组织中的表达有显著性差异(P<0.05);Western-blot实验显示舌癌组织及舌癌细胞系Tca8113细胞中TRPM1蛋白的表达水平高于其在正常舌组织的表达;RT-PCR实验结果也证实TRPM1 mRNA在Tca8113细胞中的表达高于正常舌组织。结论 TRPM1与舌癌的发生可能存在相关性。     

土曲霉酮对人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9的作用

目的 观察土曲霉酮对人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9的影响.方法 不同浓度的土曲霉酮处理SCC9细胞后,用四甲基偶氮唑盐法检测细胞活力,用Annexin V/PI试剂盒及碘化丙啶分别检测细胞凋亡及细胞周期情况.结果 土曲霉酮对SCC9细胞有抑制增殖的作用,抑制作用随着药物浓度的增大(P＜0.05)及给药时间的延长而增强(P＜0.05).此外,与不给药组相比,5 μmol/L和10 μmol/L土曲霉酮处理,可引起处于G2/M期的SCC9细胞比例由(24.8±0.6)％分别增加到(26.2±0.4)％和(34.2±1.2)％ (F=132.13,P＜0.01),但对SCC9细胞凋亡没有明显的影响.结论 土曲霉酮通过引起G2/M期阻滞来抑制人舌鳞状细胞癌细胞系SCC9细胞的增殖,提示土曲霉酮有望在舌鳞状细胞癌的治疗中发挥作用.     

DACH1在舌鳞状细胞癌及舌不典型增生中的表达及意义

目的:探讨细胞命运决定因子(Dachshund homolog 1,DACH1)蛋白在舌鳞状细胞癌发生、发展及预后中的作用.方法:应用免疫组织化学方法检测51例舌鳞状细胞癌及其对应癌周正常组织、25例舌不典型增生组织中DACH1的表达.采用SPSS 16.0软件包进行统计学处理.结果:51例舌鳞状细胞癌中,36例(70.6％) DACH1表达显著低于癌周正常组织(P＜0.05);DACH1低表达与肿瘤分化差、临床分期晚及淋巴结转移相关;DACH1在舌不典型增生中的表达显著低于舌鳞癌组织(P＜0.05).单因素生存分析显示,DACH1高表达的舌癌患者,总体生存率显著高于低表达组(P＜0.05).结论:DACH1表达降低可能与舌鳞状细胞癌的发生、发展及不良预后有关,可能有助于舌癌前病变的辅助判断,并为肿瘤治疗提供潜在靶点.     

白细胞介素-23通过无翅基因相关整合位点/β-连环蛋白通路增强舌鳞状细胞癌抗凋亡及耐药能力

目的 检测白细胞介素-23（IL-23）在舌鳞状细胞癌组织中表达水平与临床预后的关系,研究舌鳞状细胞癌细胞系SCC9经IL-23处理后抗凋亡及耐药能力的变化。方法 免疫组织化学法检测28例舌鳞状细胞癌患者组织中IL-23的表达情况;实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测不同浓度的IL-23处理后,SCC9中无翅基因相关整合位点（Wnt）1及c-myc的mRNA表达水平;结合小分子干扰RNA（siRNA）,Western blot法检测IL-23对SCC9细胞的β-连环蛋白（β-catenin）和B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、三磷酸腺苷结合转运蛋白G超家族成员2（ABCG2）、P-糖蛋白（P-gp）表达影响及潜在机制;甲基噻唑基四唑法检测SCC9细胞在IL-23作用下对顺铂的抗凋亡能力改变。结果 舌鳞状细胞癌组织中IL-23表达强度与淋巴结转移、神经侵犯及治疗复发有相关性（P<0.05）; IL-23可增强癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-2和耐药相关蛋白ABCG2、P-gp的表达,并且与Wnt通路活化程度密切相关;IL-23能够显著加强SCC9细胞对顺铂的抵抗性（P<0.01）。结论 IL-23通过上调舌鳞状细胞癌细胞的Wnt通路增强其抗凋亡及耐药能力。     

舌鳞状细胞癌淋巴结转移与长链非编码RNA HOTAIR的关系探讨

目的:研究HOTAIR在舌鳞状细胞癌中的表达,并探究HOTAIR与舌鳞状细胞癌淋巴结转移的关系。方法:对19例舌鳞状细胞癌患者的癌组织以及其对应的19例癌旁组织进行实时荧光定量PCR检测,检测HOTAIR在癌组织、癌旁组织的相对表达量,把结果与患者的TNM分期进行关联比较,并进一步通过构建沉默HOTAIR表达的CAL27、SCC9细胞系,检测肿瘤细胞侵袭、迁移能力的改变。结果:19对舌鳞状细胞癌组织中,26.3%显示出HOTAI的高表达(P=0.016 9<0.05),且高表达者均为具有淋巴结转移的患者,而在无淋巴结转移的癌组织中HOTAIR呈现低表达(P<0.001),通过RNA干扰技术降低HOTAIR在CAL27及SCC9细胞系中的表达水平,结果发现细胞侵袭(P<0.001)和迁移能力(P<0.001)受到了抑制。结论:长链非编码RNA HOTAIR在舌鳞状细胞癌淋巴结转移过程中可能发挥促进因子的作用。     

NOD1在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义

目的　探索NOD1在舌鳞状细胞癌组织中的表达及意义。方法　采用免疫组织化学、RT-qPCR检测舌鳞状细胞癌组织和正常舌黏膜对照组中NOD1的表达,并分析其临床意义。应用SPSS13.0软件包,对各组m RNA的表达进行t检验。结果　NOD1蛋白表达于细胞质,舌鳞状细胞癌组织中NOD1 蛋白表达率为60 .0％（15/25）,显著低于正常舌黏膜对照组表达率80.0％(20/25,P<0.05)。舌鳞状细胞癌组织NOD1 mRNA表达量为正常舌黏膜对照组（0.437±0.103）倍（P＜0.05）。结论　舌鳞状细胞癌组织中NOD1 mRNA和蛋白表达显著低于正常舌黏膜对照组,但需要在更大样本中验证这一结果,并开展功能学研究以揭示其潜在的生物学机制。     

Cystatin B与Cystatin C在舌鳞状细胞癌中的表达及意义

目的　研究半胱氨酸蛋白酶抑制剂B(Cystatin B)与半胱氨酸蛋白酶抑制剂C(Cystatin C)在舌鳞状细胞癌中的表达及意义并探讨其在舌鳞状细胞癌中的作用.方法　收集于2010年1月—2011年1月在中国医科大学附属口腔医院口腔颌面外科就诊的50例舌鳞状细胞癌病例标本及临床病理资料,行免疫组化方法检测Cystatin B与Cystatin C在舌鳞状细胞癌及癌旁正常组织中的表达,进行统计分析。结果　在舌鳞状细胞癌组织和癌旁正常舌黏膜组织中,Cystatin B的阳性表达率分别为72.0%(36/50)和36.0%(18/50),两者比较有统计学意义(P＜0.05);Cystatin C的阳性表达率分别为68.0%(34/50)和38.0%(19/50),两者比较有统计学意义(P<0.05)。Cystatin B与Cystatin C在不同病理分级中的表达强度分别有统计学意义(P＜0.05),与患者的年龄、性别及有无淋巴结转移均无关(P＞0.05)。结论　Cystatin B与Cystatin C在舌鳞状细胞癌的诊断及病理分级中具有一定的作用。     

外源性拮抗神经纤毛蛋白1促进人舌癌细胞 SCC9细胞凋亡的研究

目的：研究外源性拮抗人舌癌细胞 SCC9中神经纤毛蛋白1（Neuropilin-1,NRP-1）蛋白对人舌癌细胞 SCC9增殖、凋亡的影响。方法：通过免疫印迹实验（western blot,WB）及实时定量荧光 PCR（real-time RT-PCR）分别从蛋白水平及 mRNA 水平检测小分子肽 ATWLPPR（A7R）对 SCC9细胞 NRP-1表达的影响,利用细胞计数法及流式细胞术检测拮抗 NRP-1蛋白后对SCC9细胞增殖、凋亡的影响。结果：A7R 拮抗后 SCC9细胞 NRP-1的 mRNA 水平下降而蛋白表达未见明显下降,同时对 SCC9细胞凋亡有促进作用,而对 SCC9细胞增殖无明显影响。结论：外源性拮抗 NRP-1可促进 SCC9细胞凋亡。     

低氧诱导下Tca8113细胞HIF-1α与VEGF的表达及血管生成相关性研究

目的:研究在体外缺氧培养条件下舌鳞癌细胞系Tca8113中缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor 1alpha,HIF-1α)和血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达,探讨HIF-1α、VEGF在缺氧条件下对舌鳞癌血管生成的作用机制及相互联系。方法:CoCl2化学缺氧法模拟肿瘤缺氧环境,MTT法检测细胞生长能力。荧光定量PCR,Western blot法分别检测不同缺氧状态下HIF-1α和VEGF在mRNA和蛋白水平的表达并进行相关性研究。结果:MTT发现CoCl2诱导的缺氧对细胞的生长起抑制作用。低氧条件下,Tca8113细胞HIF-1αmRNA水平稳定,蛋白表达显著升高,而VEGF mRNA和蛋白的表达均显著升高。结论:CoCl2诱导的缺氧使Tca8113细胞HIF-1α在蛋白水平表达升高,并通过转录激活VEGF的表达,调控舌鳞癌的血管生成。     

Notch信号通路分子在舌鳞癌中的表达及意义

目的 明确Notch信号通路受体Notch1、Notch3及其配体Jagged1、Jagged2在舌鳞癌中的表达及其意义。方法 通过逆转录聚合酶链反应、免疫组织化学和Western blot检测74例舌癌患者的组织标本（舌癌及癌旁组织）和人舌癌Cal-27细胞株中Notch1、Notch3、Jagged1和Jagged2 mRNA与蛋白质的表达水平,分析其与细胞增殖及临床病理的关系。结果 舌癌、癌旁组织及Cal-27细胞株中均检测到Notch1、Notch3、Jagged1、Jagged2 mRNA和蛋白质的表达。Notch1和Notch3蛋白在舌癌中的表达率高于癌旁组织,而Jagged1和Jagged2蛋白在舌癌和癌旁组织中的表达率无明显差异。Notch1和Notch3蛋白的表达和舌癌的临床分期具有相关性。4种信号蛋白的表达与患者的年龄、性别和临床病理分级无相关性。Notch3和Jagged2的表达具有相关性。Notch1蛋白在淋巴结转移阳性病例中的表达率高于转移阴性的病例,Jagged1在转移阳性病例的表达分级高于阴性病例。结论 Notch信号通路分子在舌鳞癌中表达活跃,与舌癌的发生发展有重要的相关性。     

shRNA沉默LASP-1对舌鳞状细胞癌SCC9细胞增殖和迁移的影响

目的：探讨LASP?1在人舌鳞状细胞癌细胞中的表达,并应用shRNA沉默人舌鳞状细胞癌细胞SCC9中LASP?1基因,研究LASP?1对SCC9细胞增殖和迁移能力的影响。方法构建携带绿色荧光蛋白的LASP?1 shRNA质粒及阴性对照组质粒LASP?1 shNC,通过脂质体转染SCC9细胞,采用MTT法检测细胞增殖;RT?PCR法检测细胞LASP?1 mRNA表达;Western blot检测细胞LASP?1蛋白的表达;运用Transwell小室实验检测细胞迁移能力。结果 LASP?1在舌鳞状细胞癌细胞中高表达;实验组和阴性对照组分别转染相应质粒48 h后细胞均有绿色荧光蛋白表达,表明质粒转染成功;实验组SCC9细胞LASP?1 mRNA和LASP?1蛋白表达明显降低;与空白对照组相比,实验组细胞培养48 h和72 h细胞存活率分别降低了（51.23±1.47）%和（50.07±2.11）%;Transwell实验结果显示, LASP?1基因被沉默后细胞迁移能力明显下降,比对照组降低约43%。结论 LASP?1在舌鳞状细胞癌细胞中高表达,下调LASP?1基因表达可抑制SCC9细胞的增殖和迁移。     

舌鳞状细胞癌浸润方式与癌淋巴管生成的特点及临床意义

目的探讨不同浸润方式舌鳞状细胞癌淋巴管生成的特点及临床意义。方法 参照Anneroth等描述的肿瘤浸润方式对41例舌鳞状细胞癌进行分型,应用免疫组化法,以D2-40标记淋巴管,计数淋巴管密度（lymphatic vessel density,LVD）。结果不同浸润方式的舌鳞状细胞癌D2-40的表达不同,浸润方式为Ⅲ、Ⅳ型的舌鳞状细胞癌,淋巴管密度（LVD）显著高于Ⅰ、Ⅱ型（P〈0.05）,且临床易出现淋巴结转移。结论Ⅲ、Ⅳ型浸润方式的舌鳞状细胞癌恶性程度高,可能具有较强的诱导淋巴管生成的能力。     

沉默calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响

目的 探讨沉默内质网应激相关蛋白calnexin对舌鳞状细胞癌细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法 将calnexin siRNA转染到舌鳞状细胞癌细胞SCC-9和SCC-25中,采用qRT-PCR检测calnexin表达情况;Western blot实验进一步验证calnexin siRNA沉默效果.通过CCK-8实验检...     

RNA干扰TEAD基因对舌癌细胞系Tca8113增殖和侵袭的影响

目的：应用RNA干扰技术抑制人舌癌细胞株Tca8113中内源TEAD基因的水平,观察TEAD基因对舌癌细胞生物学行为的影响。方法：构建针对TEAD基因特异性siRNA真核表达载体,将其转染至Tea8113,采用RT—PCR法检测转染后的Tca8113细胞中TEAD基因的表达。采用CCK8技术检测细胞的增殖情况,采用Transwell法检测细胞的迁移情况。实验数据采用SPSSl3．0软件包进行单因素方差分析。结果：siRNA干扰Tea8113细胞后,TEAD基因的表达水平显著下降（P〈0．05）,细胞生长缓慢,体外侵袭能力下降。结论：通过RNA干扰技术阻断TEAD的表达,可抑制,rca8113细胞的生长、增殖、迁移,提示TEAD基因在舌癌的发生、发展过程中起着重要作用。