应用LiquiChip液相蛋白芯片技术检测HMGB1诱导肺泡巨噬细胞的细胞因子表达谱

目的 检测高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导肺泡巨噬细胞(AM)的细胞因子表达谱.方法 RT-PCR扩增HMGB1 cDNA,插入pGEX4T-1原核表达载体并转大肠杆菌,IPTG诱导HMGB1表达,Ni2+-NTA和多粘菌素B亲和层析柱分离纯化.应用LiquiChip液相蛋白芯片检测HMGB1(20 ng/ml)诱导AM细胞因子表达谱的变化.结果 成功表达纯化的重组HMGB1可诱导AM肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、MIP-2、单核细胞趋化蛋白-l(MCP-1)、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)及γ-干扰素(IFN)-γ的表达显著增加(P<0.01).结论 HMGB1可诱导AM释放多种炎性细胞因子.     

外源性一氧化氮对急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞功能的影响

目的 研究外源性一氧化氮（ＮＯ）对急性肺损伤大鼠肺泡巨噬细胞功能的影响。方法 健康雄性ＳＤ大鼠随机分为空白组（Ａ组）和实验组,分别接受生理盐水１ｍｌ或内毒素５ｍｇ／ｋｇ腹腔注射,６ｈ后大鼠在麻醉下行肺灌洗术。实验组的肺泡巨噬细胞取出后孵育时又 分为对照组（不加硝普钠,Ｂ组）和加硝普钠０．１ｍｍｏｌ／Ｌ组（Ｃ组）,分别测定各组巨噬细胞对白色念珠菌的吞噬和杀伤率,超氧阴离子（Ｏ２＾－）释放量,肿瘤坏死     

承气合剂对毒血症大鼠肺泡巨噬细胞活力的影响

本研究采用四甲基偶氮唑蓝（ＭＴＴ）比色法检测肺泡巨噬细胞活力（ＡＭＡ），对比观察了承气合剂对毒血症大鼠ＡＭＡ的影响。结果表明毒血症模型３ｈＡＭＡ显著增高，２４ｈ有所降低，但仍高于对照组（Ｐ＜００１）；承气合剂治疗组２４ｈＡＭＡ已恢复至正常水平，而３ｈＡＭＡ显著高于模型组（Ｐ＜００１）。表明承气合剂对大鼠肺泡巨噬细胞的活化具有调控作用。     

周期性牵张对肺泡Ⅱ型上皮细胞IL-8表达的影响

目的研究周期性牵张肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549细胞对炎性介质白细胞介素-8（IL8）产生和释放的影响。方法对融合的肺泡Ⅱ型上皮细胞株A549细胞施加周期性机械牵张应力。实验一：加载频率0．5Hz，加载时间4h，加载应力分别为5％、15％、30％；实验二：加载应力为15％，加载频率0．5Hz，加载时间分别为1h、2h、4h、8h；实验三：加载应力为15％，加载时间4h，加载频率分别为0．2Hz、0．5Hz、1．0Hz。每个实验均设立空白对照即不给予机械应力。用实时荧光定量PCR法测定IL-8 mRNA的表达，用ELISA法测定IL-8蛋白的浓度。结果随着加载应力的增加和加载时间的延长，IL-8蛋白浓度增加、IL-8 mRNA表达上调（P〈0．05）；施加不同加载频率后，IL-8蛋白浓度增加、IL-8 mRNA表达上调（P〈0．05）；不同加载频率间IL-8蛋白浓度和IL-8 mRNA表达比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肺泡Ⅱ型上皮细胞IL-8的产生和释放与周期性的机械牵张应力呈强度和时间依赖性，而加载频率对其无影响。     

诱导型一氧化氮合成酶在大鼠坏死性胰腺炎肺泡巨噬细胞的表达

目的通过研究诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在急性坏死性胰腺炎(ANP)肺泡巨噬细胞(AM)中的表达,明确其在ANP所致肺损伤中的作用。方法72只成年SD大鼠随机分为正常对照组、ANP组、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME)组,每组24只。逆行性胰胆管注射3%牛磺酸钠建立ANP大鼠模型。经支气管肺泡灌洗获取AM,检测支气管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平,AM分泌iNOS水平及iNOSmRNA表达情况,并行肺组织学检查。结果ANP大鼠AM iNOS的表达随时间进展而增强,同时肺损伤也逐渐加重。L-NAME组则恰好相反,与ANP组相比有显著性差异(P<0.05)。结论ANP发生后,肺泡巨噬细胞iNOS表达增强,并促进肺损伤。     

山莨菪碱对急性肺损伤时肺泡巨噬细胞分泌细胞因子的影响

我们通过静脉注射内毒素复制大鼠急性肺损伤 (ＡＬＩ)模型 ,观察山莨菪碱 (6 5 4 2 )对ＡＬＩ大鼠肺泡巨噬细胞(ＡＭ)分泌肿瘤坏死因子 α(ＴＮＦ α)、白细胞介素 (ＩＬ) 6的干预作用 ,探讨6 5 4 2的免疫学作用和治疗ＡＬＩ的可能机制。一、材料与方法1.动物分组与处理 :健康Ｗｉｓｔａｒ大鼠 48只 (由本校动物中心提供 ) ,体重 180～ 2 40ｇ ,雌雄不拘 ,随机分为 (1)ＡＬＩ模型组 (16只 ) :尾静脉注射大肠杆菌内毒素 5ｍｇ/ｋｇ体重 (溶于 2ｍｌ生理盐水 ) ;(2 ) 6 5 4 2治疗组 (16只 ) ,尾静脉注射内毒素后即刻静脉推注6 5 4 2 2ｍｇ/ｋ…     

银杏叶提取物对急性坏死性胰腺炎大鼠肺泡巨噬细胞功能的影响

目的:探讨银杏叶提取物(GBE)对急性坏死性胰腺炎(ANP)肺损伤时肺泡巨噬细胞功能的影响。方法:48只成年SD大鼠随机分为对照组、ANP组、治疗组,每组再分为6h、12h组。逆行性胰胆管注射5%牛磺酸钠建立ANP大鼠模型。治疗组在胰腺炎模型基础上予GBE干预,对照组、ANP组给予等量生理盐水。经支气管肺泡灌洗获取肺泡巨噬细胞,激光共聚焦扫描显微镜(LSCM)结合特异性荧光探针DAF-FM-DA检测肺泡巨噬细胞内一氧化氮(NO)、ELISA法检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及MIF水平。结果:治疗组肺泡巨噬细胞内NO水平、TNF-α、MIF分泌水平显著低于ANP组(P<0.01)。结论:银杏提取物通过抑制肺泡巨噬细胞内NO生成,降低TNF-α、MIF分泌活性,从而改善ANP肺损伤时肺泡巨噬细胞的功能。     

内毒素刺激大鼠腹腔巨噬细胞高迁移率族蛋白B1释放的研究

目的　观察高迁移率族蛋白B1(HMGB1)在大鼠巨噬细胞中的分布和释放。方法　取正常Wistar大鼠腹腔巨噬细胞 ,培养 3d后以内毒素 (LPS)刺激 ,应用免疫组织化学的方法检测LPS刺激前后HMGB1的表达释放情况 ;分正常、4、8、12、2 4h时间点留取细胞培养上清 ,观察LPS刺激与HMGB1释放的时效关系。结果　大鼠腹腔巨噬细胞的胞核及胞浆内存在HMGB1蛋白表达 ,LPS刺激 10h使之明显增强 ,并分泌至胞外 ;LPS可诱导大鼠腹腔巨噬细胞HMGB1释放 ,于 8～ 12h达峰值 (正常对照和 12h的积分吸光度值分别为 19.3 99± 1.488、5 9.5 61± 2 .991,P <0 .0 1) ,2 4h后减弱 (积分吸光度值为 2 6.10 4± 2 .671)。结论　HMGB1分布于大鼠腹腔巨噬细胞核及胞浆中 ,LPS可促进HMGB1缓慢释放于细胞外。     

活血清解灵对ACST大鼠肺组织内NOS及肺泡巨噬细胞分 …

目的：观察急性重证胆管炎（ＡＣＳＴ）大鼠肺组织内一氧化氮合酶（ＮＯＳ）、肺泡巨噬细胞分泌一氧化氮（ＮＯ）的变化及活血清解灵的调节作用。方法：通过胆总管远端结扎，近端注入菌液并封闭的方法，造成大鼠ＡＣＳＴ模型。采用单纯胆管减压、胆管减压配合活血清解灵两种不同方法治疗。分离和培养肺泡巨噬细胞，采用Ｇｒｉｅｓｓ法检测收集培养液中ＮＯ水平。应用分光光度法测定ＮＯＳ活性。结果：ＡＣＳＴ组肺内ＮＯＳ的水平和肺     

利多卡因预先给药对大鼠肾脏缺血再灌注时肾组织HMGB1表达的影响

目的 探讨利多卡因预先给药对大鼠肾脏缺血再灌注时肾组织高迁移率族蛋白-1(HMGB1)表达的影响.方法 健康成年雄性Wistar大鼠36只,体重300 ～ 350 g,采用随机数字表法,将其随机分为3组(n=12):假手术组(S组)、肾脏缺血再灌注组(I/R组)和利多卡因组(L组).I/R组和L组采用夹闭双侧肾动脉60 min恢复灌注的方法建立肾脏缺血再灌注损伤模型.L组于缺血前60min静脉注射利多卡因5mg/kg,随后以2mg·kg-1·h-1速率静脉输注60 min; I/R组给予等容量生理盐水.3组分别于再灌注4、24h时取6只大鼠,取肾组织,采用PCR技术检测HMGB1 mRNA表达,采用Western blot法测定HMGB1表达,分别采用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,光镜下观察肾组织病理学结果.结果 与S组比较,I/R组和L组肾组织HMGB1 mRNA及其蛋白表达和MDA含量升高,肾组织SOD活性降低(P＜0.05);与I/R组比较,L组肾组织HMGB1 mRNA及其蛋白表达和MDA含量降低,肾组织SOD活性升高(P＜0.05).L组肾组织病理学损伤轻于I/R组.结论 利多卡因可减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤,其机制与下调肾组织HMGB1表达有关.     

信号转导及转录激活子1和3抑制剂对高迁移率族蛋白B1诱导鼠巨噬细胞合成肿瘤坏死因子α的影响

目的探讨信号转导及转录激活子1(STAT1)和3抑制剂对高迁移率族蛋白B1(HMGB1)诱导巨噬细胞合成肿瘤坏死因子α(TNFα)的影响。方法取正常Wistar大鼠腹腔巨噬细胞置24孔培养板中(1×106细胞/孔),培养3d后以HMGB1刺激,采用氟达拉滨(Fludarabine,STAT1特异性抑制剂)及雷帕霉素(Rapamycin,STAT3特异性抑制剂)进行干预。观察HMGB1刺激与肿瘤坏死因子αmRNA表达和蛋白释放的时效、量效关系,Fludarabine和Rapamycin处理对TNFαmRNA表达和蛋白释放的影响。结果(1)HMGB1可导致大鼠腹腔巨噬细胞TNFα基因表达明显升高,于攻击后24h达峰值,至36h减弱。HMGB1的用量为10μg/ml时,TNFα基因表达明显增强;(2)HMGB1可诱导大鼠腹腔巨噬细胞TNFα蛋白早期释放,4h即可达到高峰,8h后减弱。随着HMGB1刺激剂量从5μg/ml增大到25μg/ml,TNFα蛋白释放持续增强;(3)Fludarabine和Rapamycin可抑制大鼠腹腔巨噬细胞TNFα基因表达,但不能影响TNFα蛋白的释放。结论STAT1和STAT3抑制剂可显著下调巨噬细胞由HMGB1诱导的TNFα基因表达,但不能影响其早期(<24h)蛋白释放。     

The role of HMGB1 in inflammation-mediated organ injury

HMGB1 is a chromosome-binding protein that also acts as a damage-associated molecular pattern molecule. It has potent proinflammatory effects and is one of key mediators of organ injury. Evidence from research has revealed its involvement in the signaling mechanisms of Toll-like receptors and the receptor for advanced glycation end-products in organ injury. HMGB1-mediated organ injuries are acute damage including ischemic, mechanical, allograft rejection and toxicity, and chronic diseases of the heart, kidneys, lungs, and brain. Strategies against HMGB1 and its associated cellular signal pathways need to be developed and may have preventive and therapeutic potentials in organ injury.     

一氧化氮对肺泡巨噬细胞致炎效应的调节作用

目的 探讨一氧化氮（ＮＯ）对肺泡巨噬细胞致炎效应的调节作用。方法 内毒素（ＬＰＳ）刺激体外培养的小鼠肺泡巨噬细胞,ＴＮＦα等细胞因子释放及ＮＯ对细胞因子释放的影响。结果ＬＰＳ诱导巨噬细胞释放炎症性细胞因子的时效关系不同,肺泡巨噬细胞释放ＴＢＦα、ＩＬ－１α、ＩＬ－６的峰值时间分别为６、８、２４小时。ＮＯ合成酶抑制剂甲基异硫脲明显降低ＬＰＳ诱导的ＮＯ释放,同时强烈刺激肺泡巨噬细胞释放ＩＬ－１β、ＩＬ     

HMGB-1在脓毒症及肿瘤中的作用

高迁移率族蛋白（HMG）是脓毒症晚期的一种重要炎症介质,也是与多种肿瘤生长、浸润、转移有密切相关的染色质蛋白。其自身毒性和与促炎细胞因子的相互作用是HMGB1在脓毒症中的两种机制,JAK/STAT途径是HMGB1在致炎效应中的确切传导机制。在HMGB1的作用下促使细胞外基质降解,促进肿瘤浸润、转移。本文就HMGB1在脓毒症和肿瘤中的作用作一综述。     

周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖影响的实验研究

目的观察周期性单轴牵张力对前软骨干细胞增殖能力的影响。方法免疫磁珠分选新生大鼠前软骨干细胞(precartilaginous stem cells,PSCs),取生长良好的第三代PSCs,通过四点弯曲细胞加压装置对细胞加载不同的机械牵张力(2 000、4 000μstrain),并在不同时间点(1、2、4和8 h)收集细胞,采用流式细胞仪检测应力刺激后PSCs的细胞周期及增殖指数的变化,揭示不同的牵张力在不同的时间点对PSCs增殖活性的影响。结果周期性单轴牵张力能影响大鼠PSCs的增殖活性。2 000μstrain机械牵张力组与对照组相比,增殖指数升高(P<0.05),促进细胞增殖,并且S期DNA合成率增多(P<0.05);而4 000μstrain机械牵张力组与对照组比较,增殖指数降低,抑制细胞增殖(P<0.05),同时S期细胞DNA合成率减少(P<0.05)。结论适宜的机械牵张力能促进PSCs增殖,过大的机械牵张力反而抑制细胞增殖。     

利多卡因对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1mRNA表达的影响

目的 探讨利多卡因对脓毒症大鼠肺组织高迁移率族蛋白B1( HMGB1) mRNA表达的影响.方法 雄性Wistar大鼠50只,体重200 ～ 250 g,采用随机数字表法,将其随机分为5组(n＝10):假手术组(S组)、脓毒症组(L组)、低、中和高剂量利多卡因组(LL1组、LL2组和LL3组).除S组外,其他4组采用盲肠结扎穿孔术制备大鼠脓毒症诱发急性肺损伤模型.LL1组、LL2组和LL3组分别于术毕、术后1、2h时腹腔注射利多卡因5、10、20 mg/kg,S组和L组给予等容量生理盐水.分别于术后24、48 h时处死5只大鼠,取肺组织,测定HMGB1 mRNA表达、髓过氧化物酶(MPO)活性和NF-κB活性,光镜下观察肺组织病理学结果.结果 与S组比较,其他4组肺组织HMGB1 mRNA表达上调,MPO活性升高(P<0.05);与L组比较,LL1组、LL2组和LL3组肺组织HMGB1 mRNA表达下调,MPO活性降低(P<0.01);LL1组、LL2组和LL3组肺组织HMGB1 mRNA表达依次下调,MPO活性依次降低(P<0.05).LL1组、屿LL2和LL3组肺组织NF-κB活性逐渐降低,肺组织损伤程度逐渐减轻.结论 利多卡因减轻脓毒症大鼠急性肺损伤的机制与下调肺组织HMGB1基因表达有关,其下调HMGB1基因表达的机制与抑制NF-κB活化有关.     

Endogenous HMGB1 is required in endotoxin tolerance

Background

High-mobility group box 1 protein (HMGB1), a downstream inflammatory response modifier in sepsis and endotoxemia, alters endotoxin tolerance by affecting cellular hyporesponsiveness and tumor necrosis factor α and interleukin 1 production.

Objective

Endogenous HMGB1 signaling mechanisms during low-dose lipopolysaccharide (LPS)-induced endotoxin tolerance were investigated.

Methods

BALB/c mice were preconditioned with either 0.1 mL low-dose LPS (0.2 mg/kg) or phosphate-buffered saline (PBS) (control) followed by treatment with three consecutive injections of anti-HMGB1, IgY (an nonspecific antibody), or PBS, at 2, 12, and 22 h, respectively, Mice were then subjected to 0.1 mL high-dose LPS (10 mg/kg) or PBS at 24 h. Serum and hepatic tissue samples were obtained 1 or 3 h after final treatments. Signaling mechanisms were further investigated in the serum and hepatic tissues of mice preconditioned with 0.1 mL HMGB1 (1 mg/kg), low-dose LPS (0.2 mg/kg), or PBS for 1 h, and then high-dose LPS treatment for 3 h.

Results

The signaling mechanisms involved in low-dose LPS preconditioning required enhanced endogenous HMGB1 expression and secretion. Neutralizing endogenous HMGB1 with anti-HMGB1 antibodies following low-dose LPS preconditioning altered endotoxin tolerance by increasing serum tumor necrosis factor α, reducing hepatic interleukin-1R-associated kinase M expression, and partially restoring nuclear factor κB in vivo. The translocation from nucleus to cytoplasm of endogenous HMGB1 in RAW264.7 cells was also observed during low-dose LPS–induced endotoxin tolerance.

Conclusions

Increased interleukin-1R-associated kinase M and decreased nuclear factor κB activity in endotoxin tolerance is associated with endogenous HMGB1 expression after low-dose LPS preconditioning. These findings provide a basis for a better mechanistic understanding and the development of safer clinical therapeutics utilizing induced endotoxin tolerance.